乙肝患者外周血HBV抗原抗體表達(dá)及病毒載量與T細(xì)胞亞群檢測(cè)分析

[摘要] 目的 探討臨床中乙肝患者外周血的HBV抗原抗體的表達(dá)及病毒載量情況，并分析其與T細(xì)胞亞群之間的關(guān)系。 方法 選取我院2010年1～12月間的80例乙肝患者為研究組，另選取同期在我院體檢的80例健康對(duì)象為對(duì)照組，然后采取熒光定量法檢測(cè)HBV-DNA含量，微粒子酶免疫法檢測(cè)HBV原抗體的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血T細(xì)胞亞群。 結(jié)果 HBV抗原抗體含量分為HBeAg陽(yáng)性和HBeAg陰性，例數(shù)分別為50例、30例，對(duì)照組的CD3+、CD4+、CD8+含量均明顯高于HBeAg陽(yáng)性組及HBeAg陰性組的CD3+、CD4+、CD8+的含量（P<0.05）。HBeAg陽(yáng)性組及HBeAg陰性組的CD3+、CD4+、CD8+的含量比較無(wú)明顯的差異（P>0.05）。HBV-DNA含量分為三個(gè)亞組，<104 IU/mL組、（104-106）IU/mL組和（107-108）IU/mL組，例數(shù)分別為20例、25例、35例。對(duì)照組、<104 IU/mL組和（104～106）U/mL組以及（107～108）U/mL組的CD3+比較具有明顯差異（P<0.05）；對(duì)照組和（107～108）U/mL組的CD4+含量比較具有明顯的差異（P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)照組和（104-106）IU/mL組以及（107-108）IU/mL組的CD8+比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義（P<0.05）。（104～106）IU/mL組和（107～108）IU/mL組的CD8+含量均明顯高于<104IU/mL組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義（P<0.05）。 結(jié)論 臨床中乙肝患者的HBV抗原抗體和病毒載量均與T細(xì)胞亞群之間存在聯(lián)系，并且其不同含量的T細(xì)胞亞群也存在差異，均異于常人。因此，臨床中可以通過(guò)測(cè)定病毒載量與T細(xì)胞亞群，并有效了解患者的機(jī)體免疫狀況，從而更好地指導(dǎo)臨床治療。

[關(guān)鍵詞] 乙肝患者；外周血；HBV抗原抗體；病毒載量；T細(xì)胞亞群

[中圖分類號(hào)] R51；R44 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）35-0071-03

乙型肝炎在我國(guó)具有較高的發(fā)病率，嚴(yán)重影響人們的身體健康。多數(shù)臨床患者存在免疫功能紊亂，出現(xiàn)這種情況與患者的乙肝病毒清除情況有關(guān)[1]。乙肝病毒的激活常常是由于T淋巴細(xì)胞的作用，使得具有特異性的CD8+和輔助性的CD4+細(xì)胞釋放更多的炎癥因子，從而引發(fā)病毒性肝炎的發(fā)生。臨床中乙型肝炎的發(fā)生和發(fā)展常常與宿主細(xì)胞的免疫功能狀態(tài)有密切的聯(lián)系，而T細(xì)胞亞群調(diào)節(jié)紊亂是誘發(fā)HBV在患者體內(nèi)持續(xù)復(fù)制的重要原因。因此，筆者結(jié)合自己多年的臨床工作經(jīng)驗(yàn)，對(duì)乙肝患者外周血的HBV抗原抗體的表達(dá)及病毒載量情況進(jìn)行測(cè)定，并分析其與T細(xì)胞亞群之間的關(guān)系，為臨床中診斷與治療該病提供參考，具體分析如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

本次研究選取我院2010年1～12月間的80例乙肝患者為研究組，另選取同期在我院體檢的80例健康對(duì)象為對(duì)照組。對(duì)照組男40例，女40例，年齡22～60歲，平均（47.3±2.3）歲，本組患者均無(wú)肝功能異常，體檢正常。研究組男42例，女38例。年齡20～57歲，平均（46.1±2.6）歲。均符合全國(guó)病毒性肝炎和肝病學(xué)術(shù)會(huì)議制定的《病毒性肝炎防治方案》中的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組和研究組的基本資料比較無(wú)明顯差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1標(biāo)本采集 病毒載量和HBV抗原抗體的標(biāo)本采集：均給予空腹靜脈外周血采血5.0 mL，并將其進(jìn)行離心處理，離心率為3000 r/min，離心時(shí)間為5 min。然后選取上層血清備用，置入-20℃環(huán)境下保存?zhèn)溆?。T細(xì)胞檢測(cè)標(biāo)本：主要是靜脈采血2.0mL，并將其置于真空管中備用，并在6 h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)處理[2]。

1.2.2 病毒載量檢測(cè) 本次研究對(duì)于病毒的檢測(cè)主要采取熒光定量法進(jìn)行檢測(cè)，主要采取德國(guó)的Roche lightcycle480型的PCR定量檢測(cè)儀進(jìn)行測(cè)定，試劑由上海申友生物工程股份有限公司提供。整個(gè)操作流程均嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行，并詳細(xì)記錄檢測(cè)情況[3]。

1.2.3 HBV抗原抗體檢測(cè) 本研究對(duì)HBV抗原抗體的檢測(cè)主要采取微粒子酶免疫法，主要采用美國(guó)Abbott公司生產(chǎn)的ARCHITECT i2000型診斷分析儀及配套試劑，整個(gè)操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，詳細(xì)記錄檢測(cè)情況[4]。

1.2.4 T細(xì)胞亞群檢測(cè) T細(xì)胞亞群主要采取流式細(xì)胞術(shù)，采用FACSCalibur儀進(jìn)行檢測(cè)，其中熒光素標(biāo)記單克隆抗體和溶血素均由美國(guó)BD公司提供，整個(gè)操作均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。首先，按照試驗(yàn)要求進(jìn)行染色處理，然后進(jìn)行流式細(xì)胞分析。開機(jī)后自動(dòng)檢測(cè)儀器的靈敏度，并開啟自動(dòng)設(shè)定試驗(yàn)，采取sminulset軟件分析T細(xì)胞亞群，并將其獲得的結(jié)果分析T淋巴細(xì)胞數(shù)（CD3+）和輔助/誘導(dǎo)T細(xì)胞（CD4+）以及抑制/細(xì)胞毒T細(xì)胞（CD8+）占淋巴總細(xì)胞的比例[5]。

1.3 亞分組方法

本次研究依據(jù)病毒載量和HBV抗原抗體含量進(jìn)行亞分組，并探討其與T細(xì)胞亞群之間的聯(lián)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本次研究的數(shù)據(jù)資料均采取SPSS19.0的統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析與處理，計(jì)量資料采取均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，獨(dú)立樣本采取t檢驗(yàn)，多組間計(jì)量資料比較進(jìn)行方差檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV抗原抗體含量與T細(xì)胞亞群聯(lián)系

本次研究主要將HBV抗原抗體含量分為HBeAg陽(yáng)性和HBeAg陰性，例數(shù)分別為50例、30例，對(duì)照組的CD3+、CD4+、CD8+含量均明顯高于HBeAg陽(yáng)性組以及HBeAg陰性組的CD3+、CD4+、CD8+的含量，且組間比較具有明顯差異（F=23.12、18.35、14.21，P<0.05）。HBeAg陽(yáng)性組以及HBeAg陰性組的CD3+、CD4+、CD8+的含量比較無(wú)明顯差異（t=0.231、0.503、0.236，P>0.05）。見(jiàn)表1。

表1 HBV抗原抗體含量與T細(xì)胞亞群聯(lián)系（x±s，%）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

2.2 病毒載量與T細(xì)胞亞群聯(lián)系

本次研究將HBV-DNA含量分為三個(gè)亞組，<104 IU/mL組、（104～106）U/mL組和（107～108）IU/mL組，例數(shù)分別為20例、25例、35例。對(duì)照組、<104 IU/mL組和（104～106）IU/mL組以及（107-108）IU/mL組的CD3+比較具有明顯差異（F=12.31，P<0.05）；對(duì)照組和（107～108）IU/mL組的CD4+含量比較具有明顯差異（t=7.24，P<0.05）；對(duì)照組和（104～106）IU/mL組以及（107～108）IU/mL組的CD8+比較具有明顯差異（F=8.23，P<0.05）。（104～106）IU/mL組和（107～108）IU/mL組的CD8+含量均明顯高于<104IU/mL組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義（F=9.21，P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 病毒載量與T細(xì)胞亞群聯(lián)系（x±s，%）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與<104IU/mL組比較，#P<0.05

3 討論

乙型肝炎是臨床中常見(jiàn)疾病之一，在我國(guó)具有較高的發(fā)病率，嚴(yán)重影響人們的身體健康。臨床中通過(guò)檢測(cè)抗原抗體進(jìn)行診斷該病的病毒傳染情況，但是這種診斷方法并不能夠直接地反映患者乙肝病毒的含量情況[6，7]。隨著臨床中人們對(duì)該病的不斷研究，HBV感染的不同時(shí)期和不同狀態(tài)下，患者血清中病毒載量存在明顯的差異，并且這種變化與患者的免疫功能有密切的聯(lián)系[8，9]。因此，臨床中可以有效地依據(jù)HBV-DNA定量分析進(jìn)行判斷HBV感染的情況，從而為患者的治療提供指導(dǎo)方向[10]。

機(jī)體的免疫系統(tǒng)主要是通過(guò)對(duì)一系列的免疫細(xì)胞進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而發(fā)揮其具體的免疫功能[11]。其中T淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)是整個(gè)免疫過(guò)程中的一個(gè)重要過(guò)程。T淋巴細(xì)胞一般可以分為CD4+和CD8+兩種亞群，在臨床免疫疾病的診斷中具有重要的應(yīng)用價(jià)值[12，13]。臨床資料顯示，對(duì)于完全清除病毒急性HBV感染患者體內(nèi)存在有特異性的CD4+T淋巴反應(yīng)，同時(shí)其CD4+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量也明顯降低，使得CD8+T淋巴細(xì)胞的活性也快速降低。在乙型肝炎的潛伏期患者出現(xiàn)的HBV特異性CD4+T與CD8+T淋巴細(xì)胞反應(yīng)，主要是由于這些細(xì)胞控制HBV感染。臨床資料顯示，人體中的各個(gè)淋巴細(xì)胞亞群之間具有相互協(xié)調(diào)的作用，從而有效地維持正常的免疫功能。但是不同的淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和相關(guān)的功能異常往往會(huì)導(dǎo)致相關(guān)疾病的發(fā)生[14]。而乙型肝炎屬于肝病毒侵入肝臟細(xì)胞之后而引發(fā)的一系列免疫系統(tǒng)疾病，并且多數(shù)患者存在T細(xì)胞免疫功能失調(diào)的情況，整個(gè)活動(dòng)與其病情的發(fā)展有密切聯(lián)系[15]。

通過(guò)本次的臨床研究分析，臨床中乙肝HBeAg陽(yáng)性和HBeAg陰性患者的CD3+和CD4+均明顯低于正常人。由此分析，HBV感染的患者很容易出現(xiàn)免疫下降，身體的抵抗力也明顯下降。其中CD3+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量下降進(jìn)一步地提示機(jī)體參加細(xì)胞的免疫反應(yīng)不足，也提示HBV感染患者體內(nèi)的細(xì)胞免疫功能比較低下。同時(shí)數(shù)據(jù)還顯示，HBV感染患者的CD8+含量明顯高于正常人。由此分析，T抑制/細(xì)胞毒細(xì)胞的比值增加，從而有效地增加患者溶血機(jī)制發(fā)揮其抑制作用，增加病情發(fā)展。本組數(shù)據(jù)還顯示，病毒載量在低于<104 IU/mL時(shí)，CD3+異于常人。進(jìn)一步分析，機(jī)體總的細(xì)胞免疫功能下降，而病毒載量達(dá)到（104～106）IU/mL的情況時(shí)，CD8+含量與正常人比較具有明顯差異。進(jìn)一步分析，患者的機(jī)體免疫逐漸下降，從而增加病情嚴(yán)重性。本次研究數(shù)據(jù)還顯示，在病毒載量達(dá)到（107～108）IU/mL的情況下，CD3+、CD4+、CD8+的含量均異于常人。由此分析，具有高載量病毒感染的乙型感染患者，在出現(xiàn)有機(jī)體免疫下降的同時(shí)還伴有免疫損傷的情況發(fā)生[16，17]。另外，CD8+T淋巴細(xì)胞的不斷增加，使得CD4+T/CD8+T的淋比值下降。同時(shí)，也進(jìn)一步提示HBV感染很容易影響外周血T巴細(xì)胞亞群的不斷變化，很容易加重患者體內(nèi)細(xì)胞免疫功能的紊亂情況。

綜上所述，乙肝患者的HBV抗原抗體和病毒載量均與T細(xì)胞亞群之間存在聯(lián)系，并且其不同含量的T細(xì)胞亞群也存在差異，均異于常人。因此，臨床中可以通過(guò)測(cè)定病毒載量與T細(xì)胞亞群，有效了解患者的機(jī)體免疫狀況，從而更好地指導(dǎo)臨床治療。

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（收稿日期：2013-10-22）