大葉小檗體外對(duì)細(xì)菌抑菌活性的研究

中圖分類號(hào)：R37 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-0515（2013）10-030-02

大葉小檗（Berberis amurensis Rupr.）為小檗科小檗屬植物，又名三顆針。主要分布在我國(guó)東北，是東北地區(qū)重要的藥用植物[1-3]。中藥主要以其根和根皮入藥，是長(zhǎng)白山區(qū)民間的常用藥材[4]。具有消炎止痛， 解毒清火等功效。果實(shí)可健胃，根皮也可以外用[5]。本實(shí)驗(yàn)通過研究大葉小檗體外抑菌活性實(shí)驗(yàn)，觀察其消炎抗菌[6]作用及對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌敏感情況[7]。為開發(fā)其藥用價(jià)值提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1供試菌種 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、沙門氏菌，實(shí)驗(yàn)所用菌種均來(lái)自吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院。

1.1.2儀器與試劑 DHG-9140A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；SHZ-Ⅲ循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）YXQ-LS-5OSⅡ 立式壓力蒸汽滅菌器（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）HH·CP-01W二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）大葉小檗采集于長(zhǎng)白山，由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)包海英教授鑒定為大葉小檗根。供試陽(yáng)性藥阿米卡星（批號(hào)為070905），江蘇吳中醫(yī)藥集團(tuán)有限公司蘇州第六制藥廠；氯霉素（批號(hào)為0806092），天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司；硫酸慶大霉素（批號(hào)為0709302），天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司；供試陽(yáng)性藥均于福百草藥房?jī)?nèi)購(gòu)買。

1.2方法

1.2.1提取物配制：取大葉小檗塊根2.0kg粉碎成粗粉，用適量體積的75%乙醇浸漬提取三次，每次10h，合并提取液過濾，減壓濃縮后置水浴鍋上至浸膏狀，取適量浸膏密封保存?zhèn)溆谩⑹Ｓ嗟慕嘤?% 鹽酸將溶解，靜置24h后取，取其上清液用與酸水等體積的氯仿重復(fù)萃取，至完全除去雜質(zhì)，再用氨水調(diào)pH值至10，之后用等體積的氯仿萃取，使樣品與生物堿化學(xué)檢識(shí)均呈陰性。收集氯仿層并濃縮蒸干至浸膏狀，即得總生物堿。分別稱取定量的大葉小檗75%乙醇提取物、總生物堿于研缽中，用適量的生理鹽水及少量的吐溫-80研磨，至樣品與生理鹽水充分混合成混懸液，并以生理鹽水及吐溫-80混合液為空白對(duì)照，以上樣品配置好后均需密封低溫保存。

1.2.2供試陽(yáng)性藥的篩選 在無(wú)菌條件下精確分別吸取200μl菌液滴于平板培養(yǎng)基上。采用紙片擴(kuò)散法，做3個(gè)平行，密封好后置于CO2恒溫培養(yǎng)箱中，在37℃下培養(yǎng)16～18小時(shí)后觀察每個(gè)平板上的抑菌圈，并用十字交叉法測(cè)量其直徑。

通過表1-1的數(shù)據(jù)可知，對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、沙門氏菌抑菌效果最佳陽(yáng)性藥均為阿米卡星，濃度為1.28 mg/mL。

1.2.3 受試樣品抑菌實(shí)驗(yàn)方法 精確吸取上述四種供試菌液滴于平板培養(yǎng)基上。采用紙片擴(kuò)散法，做3個(gè)平行，密封好后置于CO2恒溫培養(yǎng)箱中，在37℃下培養(yǎng)16～18小時(shí)后觀察并測(cè)量各抑菌圈直徑，記錄數(shù)據(jù)。

1.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：結(jié)果要根據(jù)抑菌圈直徑（mm）以及抑菌率（%）來(lái)判定藥物的抑菌活性，抑菌率計(jì)算公式為：

所得數(shù)據(jù)均要用 ±s表示，并通過SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

如表1-2所示，通過實(shí)驗(yàn)證明大葉小檗75%提取物，大葉小檗總生物堿對(duì)各受試菌種有較好的抑菌效果，且隨著受試樣品濃度的增加，抑菌率呈上升趨勢(shì)。

4討論

本論文采用紙片法對(duì)大葉小檗75%乙醇提取物及總生物堿對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌及沙門氏菌的抑菌活性進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示受試樣品對(duì)四種菌均有較好的抑菌效果，且隨著受試樣品濃度的增加，抑菌率呈上升趨勢(shì)。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)推測(cè)大葉小檗75%乙醇提取物中有類似生物堿某個(gè)或幾個(gè)單體具有抗菌作用。大葉小檗全株含生物堿， 根皮含大量小檗堿[8]。小檗堿能抑制核因子B（ NF- kB ）激活[9]， 越來(lái)越多的研究結(jié)果證實(shí)了NF- kB 具有調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄的作用[10]。大葉小檗確實(shí)表現(xiàn)出一定的消炎抗菌作用。但大葉小檗的消炎抗菌作用的具體機(jī)制尚不清楚， 可進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行研究。

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