動物疫病監(jiān)測樣品的采集技術(shù)

【摘 要】樣品采集是動物疫病監(jiān)測和診斷工作順利開展的前提和基礎(chǔ)，樣品的質(zhì)量好壞決定著檢測工作的成敗，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性在一定程度上依賴于樣品的代表性和質(zhì)量。這篇文章從不同檢測對象出發(fā)，闡述了不同的采樣技術(shù)要點(diǎn)，使我們在今后的工作中能更清楚地知道如何才能正確地采集到高質(zhì)量的檢測樣品。

【關(guān)鍵詞】動物疫病；監(jiān)測樣品；采集技術(shù)

實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測在重大動物疫病的診斷和防控中發(fā)揮了重要作用，監(jiān)測結(jié)果的準(zhǔn)確性、有效性除受實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)設(shè)備、監(jiān)測試劑、實(shí)驗(yàn)操作等因素影響外，送檢樣品的質(zhì)量和數(shù)量的影響也很大。下面將動物疫病檢測樣品的規(guī)范化采集技術(shù)簡述如下。

1 樣品采集要遵循的一般原則

1.1 樣品種類

根據(jù)不同疫病或檢驗(yàn)?zāi)康模謩e采集相應(yīng)的組織、器官、分泌物、排泄物等；在無法估計(jì)發(fā)病群體的病因時(shí)，可進(jìn)行全面的樣品采集。

1.2 樣品數(shù)量

在進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查、抗體監(jiān)測、動物群體健康評估或環(huán)境衛(wèi)生檢測時(shí)，樣品數(shù)量應(yīng)滿足生物統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求。

1.3 不可盲目解剖

凡發(fā)現(xiàn)患畜有急性死亡，懷疑是炭疽病時(shí)則不能隨意剖檢，而應(yīng)采取局部皮膚或耳尖的血液涂片鏡檢，排除炭疽病后方可解剖采樣。

1.4 采樣時(shí)間

采死亡動物的病料要及時(shí)，以死亡后6h內(nèi)最佳；對于感染傳染病的則要在發(fā)病前期采樣。

1.5 做好人身防護(hù)

嚴(yán)防人畜共患病的感染，做好環(huán)境消毒和病害肉尸的處理，防止環(huán)境污染和疫病的傳播。

2 樣品采集

2.1 血清學(xué)檢測樣品

2.1.1 數(shù)量

用一次性采血器或一次性注射器（5ml）從畜禽靜脈抽取血液3ml左右，在注射器內(nèi)留一定空間。

2.1.2 部位

豬從前腔靜脈采血，牛、羊、馬等動物從頸靜脈或尾靜脈采血，用量少時(shí)也可以從耳靜脈抽取，家禽從翅靜脈采血。

2.1.3 標(biāo)注

在采血瓶上貼上標(biāo)簽，注明種類、地址、編號、日期等。

2.1.4 血清分離

將采血瓶傾斜45°放在室溫下靜置，待凝固后血清自然析出時(shí)吸出，或經(jīng)離心分離后吸出血清，將其裝入無菌瓶，在瓶上貼上標(biāo)簽。

2.1.5 送檢

短時(shí)間內(nèi)送檢的血清要置于4℃左右的地方冷藏保存；如時(shí)間較長才送檢，應(yīng)將血清置-20℃下保存，注意不能反復(fù)凍融，否則會影響抗體的效價(jià)。

2.2 病理學(xué)檢測樣品

2.2.1 采樣部位

在采集時(shí)應(yīng)選擇病變最典型、最明顯的部位，連同病灶附近的健康組織一并采集。

2.2.2 送檢

將樣品立即浸泡在10倍組織塊體積的10%福爾馬林緩沖液內(nèi)固定，冷藏送檢。

2.2.3 樣品規(guī)格

樣品厚度不超過0.5cm，切成1～2㎝？大小的組織塊（檢查狂犬病的組織塊要再大些）。

2.2.4 其他要求

病理學(xué)檢驗(yàn)的組織樣品必須保證新鮮，樣品要有切面，切忌擠壓、刮摸和用水洗；如做冷凍切片，則要將組織放在0～4℃容器中，并盡快送到實(shí)驗(yàn)室。

2.3 細(xì)菌學(xué)檢測樣品

做細(xì)菌檢測的樣品，以采集發(fā)病典型或剛剛死亡的整體動物送實(shí)驗(yàn)室為最好，如不方便則可按無菌采樣方法采集組織樣品。每個組織須單獨(dú)放在密閉的新滅菌容器內(nèi)或滅菌塑料袋內(nèi)，貼上標(biāo)簽并做好外包裝消毒，放入冷藏箱內(nèi)立即送往實(shí)驗(yàn)室。注意采集的所有樣品都不得加入任何物質(zhì)。

2.4 病毒學(xué)檢測樣品

做病毒檢測的組織樣品，應(yīng)在動物發(fā)病初期體溫升高期間按無菌采樣方法采集，一般以組織臟器、血液、糞便等樣品為主，要密封、冷藏送檢。若送檢時(shí)間較長，則最好凍結(jié)后送檢，也可將組織塊浸泡在含有青霉素的、pH值為7.4的PBS液中（按1mlPBS液加入2000IU青霉素），置于冷藏箱內(nèi)送檢；若采集的是糞便棉拭子，則應(yīng)立即放入按1mlPBS液加入1萬IU青霉素的PBS液中，PBS液的量以剛好淹沒樣品為好；若采集的是血液樣品，則必須是抗凝血，采血前在真空采血管內(nèi)加入0.1%肝素，按血液與0.1%肝素為10∶1的比例加入，采樣后將采血管顛倒幾次使其充分混合。

3 樣品采集的注意事項(xiàng)

3.1 要有典型性

采集樣品時(shí)，要根據(jù)檢測的目的和實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測方法的不同進(jìn)行有針對性的采集，同時(shí)還應(yīng)根據(jù)發(fā)病動物典型臨床癥狀、病變、是否治療和有無并發(fā)癥等情況，選擇未治療、病變明顯、兼顧并發(fā)癥等準(zhǔn)確個體采樣。

3.2 要有適量性

不同監(jiān)測方法所需樣品量的差異較大，要根據(jù)檢測項(xiàng)目確定采樣的量，采集的樣品個數(shù)要足夠，同時(shí)每個樣品的采集量要滿足檢測的需要量且有備份，以備必要的復(fù)檢使用，從而保證檢測樣品的準(zhǔn)確性。

3.3 要有適時(shí)性

由于監(jiān)測對象和監(jiān)測項(xiàng)目的不同，對采集樣品有不同的時(shí)間要求，要根據(jù)實(shí)際情況確定采樣時(shí)間。用于抗體監(jiān)測的樣品，應(yīng)根據(jù)疫苗的免疫時(shí)間、疫苗種類和病種確定時(shí)間。做病原分離的樣品，必須在病初發(fā)熱期或癥狀典型時(shí)采樣，對于病死的則要立即采樣，以免貽誤采樣的最佳時(shí)間，從而影響監(jiān)測結(jié)果。

3.4 要有無菌性

用于病原學(xué)和血清學(xué)監(jiān)測的樣品所用包裝用具、容器和采集器械必須經(jīng)過滅菌處理，且容器要密封不漏液體，采樣必須按無菌操作，同時(shí)要做好個人防護(hù)。尸體剖檢采樣的，先采樣后檢查，以免人為污染樣品，同時(shí)還可避免其他細(xì)菌和病菌的污染而干擾檢測結(jié)果。

3.5 要有追溯性

樣品編號和采樣單必須一致，要具有唯一性和可追溯性，送檢樣品采樣單上的資料是檢驗(yàn)人員確定檢測項(xiàng)目、目的、方法的重要依據(jù)，也是分析樣品檢測結(jié)果的重要參考資料，因此采樣單填寫的越詳細(xì)越好。清楚的了解畜禽的品種、日齡、免疫情況等信息，就可以選定正確的檢驗(yàn)項(xiàng)目，進(jìn)而得到正確的檢驗(yàn)結(jié)果。

作者簡介：

田肖（1972—），女，陜西城固人，獸醫(yī)師，主要從事動物疫情測報(bào)工作