施氏鱘出血性敗血癥組織漿疫苗的應用研究

【摘 要】制備施氏鱘出血性敗血癥組織漿疫苗，通過口服、注射、浸洗等方式使用組織漿疫苗后，獲得了理想的效果，施氏鱘出血性敗血癥發病率明顯減低，有的池塘甚至不再發病。

【關鍵詞】組織漿疫苗；施氏鱘；出血性敗血癥

施氏鱘（Acipenser schrenckii Brandt）原產于我國黑龍江和俄羅斯烏蘇里江，因其在資源保護、食用以及生產魚籽醬等方面具有重要科學意義和經濟價值而備受關注。近年來，由于過渡捕撈和生存環境的改變致使施氏鱘種群數量日趨下降。隨著施氏鱘南移馴養成功，施氏鱘人工養殖技術和規模發展迅速，全國施氏鱘年產量已超過數萬噸（據不完全統計）。然而，隨著人工養殖規模的不斷擴大和集約化程度的不斷提高，施氏鱘病害問題日趨嚴重，細菌、真菌、病毒和寄生蟲等多種水產病原均可使施氏鱘感染而導致大量死亡，造成重大經濟損失。近年來，在湖北、江西、重慶、貴州等地施氏鱘出血性敗血癥大面積暴發，該病發病率、死亡率很高，患病魚體表充血、腹部腫脹，剖檢后腹腔內有大量腹水，腸道充血或失血，肝臟有出血點，脾臟發生實質性出血病變，其致病菌為嗜水氣單胞菌，該菌廣泛存在于水環境中。嗜水氣單胞菌是一種條件致病菌，當水體環境惡化、水溫升高或者機體對外界環境的抵抗力下降時，嗜水氣單胞菌就會乘虛而入，造成機體感染，該菌有許多毒力很強的因子，如氣溶素、溶血素、胞外蛋白酶、S層蛋白等，可以引起魚類出現敗血癥等癥狀。施氏鱘出血性敗血癥主要發生在溫度較高的5～10月份，并且以幼齡魚為主要感染對象，發病率和死亡率都很高。在夏季，由于溫度高，水體中容易富集養分造成水體污染，而且高溫還會使魚體抵抗力下降，尤其在當前人工化養殖條件下，養殖密度大、養殖水體循環緩慢，這些都為嗜水氣單胞菌作為一種條件致病菌提供了增殖和感染的條件。

目前，對于嗜水氣單胞菌所引起出血性敗血癥的主要防治方法是集中與應用抗生素。隨著人們對抗生素等藥物使用安全性的日益重視，人們的認識從過去的“靶動物安全”到“人類食品安全”乃至“環境安全”，為此開展對水產品藥物殘留隱患的抗病技術研究已顯得尤為重要，急需水產疫苗的開發應用。采取免疫方法對施氏鱘出血性敗血癥的預防控制是十分有效的，因此，黑龍江生物科技職業學院開展此課題的研究是有非常重要的現實意義的。

魚類組織漿疫苗的應用研究是一項制備技術簡單、成本便宜、效果顯著、操作方便、容易推廣、不污染環境、深受群眾歡迎的實用性防病方法，免疫防病法在生產實踐中發揮了極其重要的作用，大大減少了抗菌素等化學藥物在水產養殖中的為害，節約了生產的成本，提高了水產品的質量，更有利于水環境的保護和人類的健康。

1 研究方法

（1）文獻法：查閱魚類免疫相關資料，掌握組織漿疫苗制備技術，為課題研究做好準備。

（2）實驗法：采用組織漿疫苗對不同的魚病進行防控療效實驗。

（3）對比法：免疫組織漿疫苗不同的使用方法對各類魚類疾病療效對比分析。

（4）分析法：分析試驗組與對照組水環境理化因素的影響。

2 實驗方案

（1）魚病收集、保存，為制備組織漿疫苗做準備。收集大量的施氏鱘出血性敗血癥病魚標本，保存備用。

（2）組織漿疫苗的制備。按不同病原的魚病，分別制成各自的組織漿疫苗。

（3）病原分離、菌種培養保存。從病魚體上分離病原，并培養保存。

（4）測定最小抑菌濃度。按藥物稀釋法進行測定。

（5）組織漿疫苗的使用對比分析。用注射法、浸洗法和口服法進行疫苗接種，健康魚體試驗。

技術關鍵：①確定合適的注射劑量與部位；②掌握高滲浸洗的濃度與時間；③確定口服藥餌比例

（6）試驗組魚體與對照組魚體，人工感染試驗分析對比結果。

（7）綜合分析，確定最佳疫苗的使用方法。

3 實驗技術路線

（1）免疫組織漿疫苗的制備：病魚組織取樣→清洗→研磨→過濾→離心→取上清液→水浴滅活→保存備用。

技術關鍵：①在恰當的時間獲取病魚的病變組織；②組織漿濾液的制備；③確定水浴滅活的時間與溫度。

（2）最小抑菌濃度（MIC）測定的藥物稀釋法。

（3）免疫組織漿疫苗的使用對比分析：①注射：找出合適的部位與劑量；②口服：確定口服藥餌的配比比例；③浸洗：確定浸洗藥液的濃度與時間。

4 實驗結果

通過對施氏鱘出血性敗血癥組織漿疫苗應用的研究，獲得了理想的效果，通過口服、注射、浸洗等方式使用組織漿疫苗后，施氏鱘出血性敗血癥發病率明顯減低，甚至有的池塘不發病。通過此課題的研究，為魚類的疑難雜癥的預防與治療進行了探索，有較好的借鑒作用。

作者簡介：

翟秀梅（1979-），女，講師，主要從事魚類養殖、疾病防治方面的研究

【基金項目】

黑龍江省教育廳2012年度科學技術研究（指導）項目技術，項目編號（12525091）