復(fù)方局部緩釋藥物治療牙周炎的實(shí)驗(yàn)研究

[摘要]目的：探討復(fù)方局部藥物緩釋劑對(duì)牙周病治療效果及其臨床耐藥性研究。方法：建立實(shí)驗(yàn)大鼠人工感染牙周炎模型后，將大鼠分A組（實(shí)驗(yàn)組），局部使用復(fù)方局部藥物緩釋藥物；B組（對(duì)照組）。選擇甲基藍(lán)和米諾環(huán)素兩種抗菌藥物，通過檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)和觀察組織學(xué)變化，探討其抑制牙周袋內(nèi)相關(guān)致病菌增殖的方法，了解其治療牙周病的效果。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)總細(xì)菌數(shù)持續(xù)下降，與對(duì)照組相比牙周袋內(nèi)相關(guān)致病菌總數(shù)明顯減少，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異（P<0.01）；組織學(xué)觀察結(jié)果顯示，該復(fù)方制劑可產(chǎn)生明顯殺菌作用及有效消除炎癥現(xiàn)象。結(jié)論：應(yīng)用甲基藍(lán)和米諾環(huán)素局部緩釋藥物能有效抑制牙周炎的發(fā)生及發(fā)展過程。

[關(guān)鍵詞]牙周炎；牙周袋；緩釋藥物；甲基藍(lán)；米諾環(huán)素

[中圖分類號(hào)]R783 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008-6455（2013）10-1058-03

牙周炎是一種發(fā)生在牙周支持組織的炎性感染性疾病，菌斑細(xì)菌是其啟動(dòng)因子，齦下的革蘭陰性厭氧菌和牙周病關(guān)系非常密切。在牙周病的治療中，抗菌藥物的應(yīng)用為一種常見的治療手段，由于牙周炎是一種多細(xì)菌感染性疾病，而各類抗生素的抗菌譜并不能針對(duì)所有的牙周致病菌，因此現(xiàn)在更推崇藥物的聯(lián)合應(yīng)用，以擴(kuò)大藥物對(duì)細(xì)菌的作用范圍。由于菌斑生物膜的特殊生態(tài)環(huán)境，對(duì)牙周炎的治療必須首先通過機(jī)械方法清除齦下牙石菌斑，傳統(tǒng)方法是機(jī)械性齦上下潔刮治術(shù)，破壞菌斑生物膜，為藥物治療創(chuàng)造條件，藥物緩釋系統(tǒng)是指活性藥物能緩慢、有控制地從劑型中釋放出來，直接作用于病變組織、使病變局部能較長(zhǎng)時(shí)間維持有效藥物濃度的特定劑型，牙周病緩釋抗菌藥物是當(dāng)前牙周臨床上應(yīng)用抗菌藥物最理想的劑型，是合理的給藥途徑，適宜只在低氧濃度下生長(zhǎng)的兼性厭氧菌或?qū)Ｐ詤捬蹙妫?它具有用藥劑量小，牙周局部濃度高，維持時(shí)間長(zhǎng)，療效高，且不易引起耐藥菌株和宿主副效應(yīng)的特點(diǎn)[2-4]。

1 材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SD大鼠，清潔級(jí)，40只（安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：皖醫(yī)實(shí)動(dòng)準(zhǔn)字第01號(hào)），飼養(yǎng)1周。選擇體重相對(duì)平均的SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)鼠，實(shí)驗(yàn)過程中每周定時(shí)過磅，各組大鼠的平均體重相對(duì)穩(wěn)定增加，原則上各組之間體重差距變化不大。

1.2根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求，選擇40只飼養(yǎng)1周SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)鼠，采用直徑0.2mm的口腔科專用不銹鋼線結(jié)扎大鼠的下頜前牙（如圖1）。從牙周炎患者的牙周袋內(nèi)提取含有厭氧混合菌齦溝液體，作適當(dāng)培養(yǎng)后將其注入實(shí)驗(yàn)大鼠的下頷前牙結(jié)扎區(qū)內(nèi)，1次/天，持續(xù)1周后檢查。實(shí)驗(yàn)大鼠的下頷前牙結(jié)扎區(qū)內(nèi)產(chǎn)生人工感染牙周炎（如圖2）停止注入，未出現(xiàn)人工感染牙周炎模型再持續(xù)注入1周檢查，檢測(cè)牙周袋深度及牙周附著等指標(biāo)來評(píng)價(jià)其診療后效果，直到人工感染牙周炎模型成功建成并予以確認(rèn)。

1.3待實(shí)驗(yàn)大鼠人工感染牙周炎模型建成后，將40只實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分組。A組（實(shí)驗(yàn)組）：使用復(fù)方局部藥物緩釋劑涂布實(shí)驗(yàn)大鼠牙周炎模型區(qū)連續(xù)3天，每日涂緩釋抗菌藥物一次，使用藥物后禁食、禁水1h左右； B組（對(duì)照組）：實(shí)驗(yàn)大鼠形成人工感染牙周炎模型、感染持續(xù)，不做進(jìn)一步處置。

1.4細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)：分別于實(shí)驗(yàn)后第0、1、7天采樣，在實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下頷前牙結(jié)扎區(qū)人工感染牙周炎模型區(qū)用滅菌紙針進(jìn)行微生物采樣，進(jìn)行牙周病原菌培養(yǎng)3天后做細(xì)菌總菌數(shù)檢測(cè)。

1.5組織學(xué)觀察：取實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，分別于第0、1、7天腹腔內(nèi)注射麻醉后處死實(shí)驗(yàn)大鼠作組織學(xué)觀察，取大鼠的下頷前牙結(jié)扎區(qū)人工感染牙周炎模型區(qū)唇舌向組織切塊，所得標(biāo)本用10%福爾馬林常規(guī)固定24h，然后進(jìn)行系列脫鈣、脫水、石蠟固定包埋后，連續(xù)切片厚4UM，常規(guī)HE染色、觀察；同法取未感染大鼠標(biāo)本。

2 結(jié)果

2.1總菌數(shù)檢查結(jié)果：經(jīng)過1周的觀察和定期取樣檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)組A組檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)總細(xì)菌數(shù)持續(xù)下降，結(jié)果顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），對(duì)照組B組檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)總細(xì)菌數(shù)無顯著性差異（見表1）。

2.2 總菌數(shù)觀察結(jié)果：為了解本實(shí)驗(yàn)用牙體局部緩釋藥物治療人工感染牙周炎患者的抗菌效果，筆者采用根面平整術(shù)，牙周潔治術(shù)后再輔以相關(guān)藥物局部應(yīng)用，通過探診檢查出血部位，出血量，發(fā)現(xiàn)牙周袋內(nèi)相關(guān)致病菌數(shù)明顯減少（見表1）。

2.3 組織學(xué)觀察結(jié)果：筆者于實(shí)驗(yàn)后第0、3、7周后分別處理實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物各1只，常規(guī)固定、脫水、石蠟包埋切片觀察，發(fā)現(xiàn)相關(guān)藥物能有效抑制牙周袋中細(xì)菌的生長(zhǎng)和增殖，可以更有效抑制牙周袋中病原菌的生長(zhǎng)，達(dá)到牙周病治療的目的[5]（如圖1～6）。

3 討論

牙周病是細(xì)菌感染性疾病，其進(jìn)一步發(fā)展易引起牙槽骨吸收和牙周組織破壞進(jìn)而發(fā)展為牙周炎。因此，控制細(xì)菌感染是治療牙周病的關(guān)鍵。研究發(fā)現(xiàn)，靠近齦緣和齦溝內(nèi)有一薄層（60μm以下）以革蘭陽性球菌占優(yōu)勢(shì)的菌斑。細(xì)菌培養(yǎng)研究證明，其優(yōu)勢(shì)菌是以血鏈球菌為主的鏈球菌。此外還有少量的革蘭陰性菌，如Velonella、Campnocytophaga等[6]。因此清除牙菌斑和防止或減緩菌斑的再聚集是治療牙周病、防止其復(fù)發(fā)的主要途徑[7]，并依靠患者的自我菌斑控制來保持療效減少復(fù)發(fā)。有研究報(bào)道，引發(fā)牙周病的細(xì)菌總是相關(guān)存在[8]，密切相關(guān)組成的細(xì)菌可能和其在菌斑形成過程中共聚的選擇性有關(guān)。為增進(jìn)療效，近年有向復(fù)方藥物緩釋劑型發(fā)展的趨勢(shì)[9]。復(fù)方緩釋劑型可克服以往牙周局部藥物劑型的性能單一、降解過快、持續(xù)時(shí)間短、需頻繁復(fù)診的弊端，并且局部用藥劑量小、有效抑菌濃度高[10]。

本研究將甲基藍(lán)聯(lián)合米諾環(huán)素的復(fù)方局部緩釋藥劑放置在齦下牙周患處，直接作用于病變區(qū)，可被唾液、血液及齦溝液緩慢的溶解，使藥物呈緩慢釋放，在牙周袋內(nèi)能維持較長(zhǎng)時(shí)間的有效濃度，充分發(fā)揮其抑菌作用。并以甲基藍(lán)（Methylene Blue） 為主要成分，利用其還原作用減緩米諾環(huán)素（Minocycline） 被氧化破壞的作用，并且甲基藍(lán)本身亦為一有效的殺菌劑對(duì)革蘭氏陽性菌具有直接抑和殺菌效果，加上米諾環(huán)素（Minocycline）主要是對(duì)革蘭氏陰性菌有直接抑菌效果，利用兩種抗菌有效成分的協(xié)同作用，可以更有效抑制牙周袋中病原菌的生長(zhǎng)，達(dá)到牙周病治療的目的[4]。本研究證明，該復(fù)方局部藥物緩釋劑對(duì)人工感染的牙周炎有明顯的抑菌及有效消除炎癥的作用，但患者仍應(yīng)定期檢查，且牙周炎的治療首先應(yīng)包括徹底消除病原刺激物，如潔牙、根面平整等。

總之，基于以上理論及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證明，本研究找出一種新穎且有效的復(fù)方局部緩釋配方治療藥物，利用甲基藍(lán)的特殊作用起到雙重抑菌的效果并產(chǎn)生對(duì)米諾環(huán)素的保護(hù)作用而延長(zhǎng)藥效，此配方可供口腔醫(yī)護(hù)人員對(duì)牙周病有效而準(zhǔn)確的治療，降低牙周病患病率，值得臨床借鑒和參考[11]。隨著高分子材料學(xué)和藥劑學(xué)的發(fā)展，新型可生物降解的載體材料也逐漸應(yīng)用于牙周緩控釋制劑的研究和生產(chǎn)中，從而為牙周病的臨床治療提供安全、有效、順應(yīng)的新型藥物制劑。

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[收稿日期]2013-02-20 [修回日期]2013-04-20

編輯/何志斌