酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的分析

【摘要】目的研究分析酶聯(lián)免疫技術(shù)對(duì)乙型肝炎表面抗原檢測(cè)的效果。方法選取2012年11月至2013年11月期間鐵法煤業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院接收診斷的乙型肝炎44例患者設(shè)為觀察組，與同期就診的44例健康者進(jìn)行對(duì)比設(shè)為對(duì)照組。對(duì)全部患者運(yùn)用酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測(cè)乙型肝炎表面抗原，并具體分析其檢測(cè)結(jié)果予以評(píng)價(jià)。結(jié)果近似臨界值分析物的重復(fù)性情況：+20%濃度時(shí)，臨界值分析物檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率大于等于95%；-20%濃度時(shí)，臨界值分析物檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率小于等于5%。靈敏度情況：觀察組中43例患者乙型肝炎呈陽(yáng)性，靈敏度約為97.73%；對(duì)照組中43例乙型肝炎呈陰性，靈敏度約為97.73%。結(jié)論酶聯(lián)免疫技術(shù)應(yīng)用于乙型肝炎表面抗原的檢測(cè)，其臨界值為±20%。在檢測(cè)濃度范圍內(nèi)能夠獲得很高的靈敏度，對(duì)臨床診斷意義重大。

【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫技術(shù)；乙型肝炎表面抗原；研究分析

所謂乙型肝炎就是乙型病毒性肝炎，是因?yàn)闄C(jī)體受到乙型肝炎病毒（簡(jiǎn)稱HBV）感染造成的一種疾病[1]。乙型肝炎病毒主要作用于肝細(xì)胞，屬于一種嗜肝病毒，能夠?qū)Ω渭?xì)胞造成損傷，從而引起肝細(xì)胞炎癥、壞死以及纖維化等。乙型病毒性肝炎有慢性與急性兩種。在成年患者中絕大部分急性乙型肝炎是能夠自愈的，但是慢性乙型肝炎表現(xiàn)各異，又可分成活動(dòng)性乙型肝炎、乙型肝炎攜帶者以及乙型肝炎肝硬化等。現(xiàn)階段，臨床中一般應(yīng)用的檢測(cè)方法是酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)，即為乙型肝炎兩對(duì)半：表面抗原（簡(jiǎn)稱HBsAg）、表面抗體（簡(jiǎn)稱抗HBs）、e抗原（簡(jiǎn)稱HBeAg）、e抗體（簡(jiǎn)稱抗HBe）、核心抗體（簡(jiǎn)稱HBc）。其中乙型肝炎表面抗原為一種非乙型肝炎病毒表面外殼蛋白，自身沒(méi)有傳染性，卻可以隨著乙型肝炎病毒一同存在，所以其可作為乙型肝炎病毒被感染的重要標(biāo)志。現(xiàn)通過(guò)本組研究進(jìn)一步論證酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測(cè)的靈敏度，總結(jié)如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年11月至2013年11月期間鐵法煤業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院接收診斷的乙型肝炎44例患者設(shè)為觀察組，其中女性患者21例，男性患者23例。年齡均在23-74歲之間，平均年齡（41.52±4.35）歲。另選同期44例健康者設(shè)為對(duì)照組，其中女性患者20例，男性患者24例。年齡均在24-73歲之間，平均年齡（42.31±3.79）歲。采集全部受檢者的血液樣本，予以檢測(cè)。

1.2試劑、儀器的選擇試劑盒選自上海天齊生物技術(shù)有限公司。儀器選用ALIISIE全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀。由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供質(zhì)控血清，濃度標(biāo)準(zhǔn)為1IU/ml，生產(chǎn)批號(hào)：0806。

1.3方法分別選取兩組受檢者血液，采集的血液需經(jīng)過(guò)0.5小時(shí)以上的凝集，再選取上層血清。應(yīng)用稀釋液把酶復(fù)合物稀釋以后，加入血清、陽(yáng)性、陰性、質(zhì)控品[2]。靜止放置1小時(shí)予以孵育，再洗板，將底物加進(jìn)去，避光反應(yīng)30分鐘以后，加入終止液（反應(yīng)部分完成）。將底物溶液滴入，通過(guò)酶的作用，讓底物內(nèi)含有的供氫體從無(wú)色還原型轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩趸停l(fā)生顏色反應(yīng)。利用底物的顏色反應(yīng)判斷是否有相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺程度與標(biāo)本內(nèi)相應(yīng)的抗體，或是抗原量為正比相關(guān)。

重復(fù)性試驗(yàn)：采集觀察組患者S/CO檢測(cè)值，即為樣本吸光度比臨界質(zhì)控（陽(yáng)性對(duì)照習(xí)慣度值的比值，比值小于1表示陽(yáng)性）近似于1的陽(yáng)性樣本，予以一系列的稀釋。同時(shí)，重復(fù)性檢測(cè)稀釋以后的樣本，直至產(chǎn)生陰性、陽(yáng)性的機(jī)率均是50%的情況，次濃度就是本組檢測(cè)方法的臨界值濃度。通過(guò)以上試驗(yàn)研究得出的臨界值，計(jì)算得出臨界值樣品±20%濃度的稀釋倍數(shù)，并且對(duì)其重復(fù)檢測(cè)20次，將其檢測(cè)結(jié)果詳細(xì)做好記錄。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS17.0對(duì)兩組檢測(cè)者試驗(yàn)數(shù)據(jù)予以統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用t對(duì)兩組檢測(cè)者的計(jì)量資料進(jìn)行檢驗(yàn)，運(yùn)用X2對(duì)兩組酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的試驗(yàn)計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)作最終檢驗(yàn)。如果組間差異P<0.05，則說(shuō)明本次研究比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

對(duì)觀察組乙型肝炎的44例患者進(jìn)行近似臨界值分析物的重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果顯示：+20%濃度時(shí)，臨界值分析物檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率大于等于95%；-20%濃度時(shí)，臨界值分析物檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性率小于等于5%。觀察組44例患者中，43例患者檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率是97.73%；1例患者檢測(cè)結(jié)果為陰性，陰性率是2.27%；對(duì)照組44例檢測(cè)者中，1例檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，陽(yáng)性率是2.27%；43例檢測(cè)結(jié)果為陰性，陰性率是97.73%。由此可見(jiàn)，兩組檢測(cè)者陽(yáng)性率比較差異P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。靈敏度情況：觀察組中43例患者乙型肝炎呈陽(yáng)性，靈敏度約為97.73%；對(duì)照組中43例乙型肝炎呈陰性，靈敏度約為97.73%。

3討論

乙型肝炎感染是一種世界性流行疾病，現(xiàn)階段國(guó)內(nèi)乙型肝炎病毒的攜帶率約為7.18%。通常乙型肝炎病毒的攜帶者均是慢性乙型肝炎患者，急性乙型肝炎成年患者一般情況下是能夠自愈的。乙型肝炎病毒主要作用于肝細(xì)胞，屬于一種嗜肝病毒，能夠?qū)Ω渭?xì)胞造成損傷，從而引起肝細(xì)胞炎癥、壞死以及纖維化等。乙型肝炎表面抗原是乙型肝炎病毒表面外殼蛋白，其自身沒(méi)有傳染性。但是HBsAg一般會(huì)隨著乙型肝炎病毒的產(chǎn)生而存在，所以其可作為判斷是否受到乙型肝炎病毒所感染的重要標(biāo)志。HBsAg能夠在患者體內(nèi)的精液、陰道分泌物、鼻咽分泌物、乳汁、淚水、唾液、汗液以及血液等體液中被檢測(cè)出來(lái)[3]。如果感染了乙型肝炎病毒有2至6個(gè)月的時(shí)間，并且丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶增高前的2至8周，血清檢測(cè)的結(jié)果便會(huì)顯示陽(yáng)性。慢性乙型肝炎患者此項(xiàng)指標(biāo)表現(xiàn)呈持續(xù)性陽(yáng)性，而絕大部分急性乙型肝炎患者可以在疾病病程早期由原來(lái)的陽(yáng)性轉(zhuǎn)變成陰性。因此，乙型肝炎表面抗原檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性是判斷HBV感染的關(guān)鍵標(biāo)志。

酶聯(lián)免疫技術(shù)，即為ELISA，是在1971年時(shí)由瑞典學(xué)者研究的一種特殊試劑分析方法，也是目前酶免疫測(cè)定技術(shù)中臨床應(yīng)用最為廣泛的一種方法。其基本方法為把已知抗原、抗體依附于固相載體的表面，讓酶具體標(biāo)記的抗原抗體發(fā)生的反應(yīng)可以在固相表面上進(jìn)行，再把液相內(nèi)的游離成分予以洗除。本組研究選取了乙型肝炎的44例患者與同期檢查的44例健康者，同時(shí)應(yīng)用酶聯(lián)免疫技術(shù)對(duì)兩組檢測(cè)者血清加以乙型肝炎表面抗原的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示乙型肝炎表面抗原的分析物重復(fù)性檢測(cè)，臨界濃度在+20%時(shí)，檢測(cè)陽(yáng)性率大于等于95%，而臨界濃度在-20%時(shí)，檢測(cè)陽(yáng)性率小于等于5%，因此酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的臨界濃度值，即為±20%。如果檢測(cè)標(biāo)本在這個(gè)值域范圍之內(nèi)，均能夠獲得可靠、準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。觀察組、對(duì)照組兩組檢測(cè)的靈敏度均是97.73%，說(shuō)明酶聯(lián)免疫技術(shù)檢測(cè)的靈敏度比較高，且比較穩(wěn)定。總之，酶聯(lián)免疫技術(shù)應(yīng)用于乙型肝炎表面抗原的檢測(cè)，分析物濃度臨界值為±20%，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性較高，并且靈敏度較高，具有極高的臨床應(yīng)用推廣價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1]李鳳俠，范亞敏，范永利.酶聯(lián)免疫法和膠體金法聯(lián)合檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的結(jié)果分析[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志，2009，9（33）：8135-8136.

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