Immuknow檢測在腎臟移植方面的應用

滕昊林,趙 軍,李丹丹,于金宇,張文嵐,薛立娟

(1.吉林大學第一醫院 泌尿系統疾病診治中心，吉林 長春130021；2.長春市寬城區疾病預防控制中心 檢驗科，吉林 長春130051)

隨著腎臟移植的發展，大量新型免疫抑制劑的廣泛應用，使得移植患者存活率明顯提高。目前，對移植患者血液中免疫抑制劑濃度的檢測，是一個普遍控制劑量的依據，但血藥濃度檢測雖然能較準確反映受者免疫抑制劑代謝狀態，卻不能準確評估受者免疫功能，可能出現感染和排斥等問題，一定條件下影響了腎臟移植患者的生存狀況。

由于免疫抑制劑個體應用的差異較大，而這種差異主要表現為患者免疫狀態，這就需要對腎移植患者進行有效、準確的免疫功能檢測，作出正確評估，對患者合理監測，提高長期生存率。因此建立一種能檢測腎移植患者免疫狀態的方法，并配合免疫抑制劑藥物濃度的檢測就顯得十分必要。為了達到這一目標，很多檢測方法大量的應用，但是由于都不能標準化，室間比對差異限制了他們的應用。

隨著移植免疫的深入研究，Kowalski確定了T淋巴細胞在移植中的調節作用[1]，CD4+T淋巴細胞的活化是核心環節，調節機體多種免疫反應，且ATP為CD4+T淋巴細胞免疫的能量基礎，檢測CD4+T細胞內ATP含量可以了解細胞活化程度，反映出機體的免疫功能狀態[2]。

1 Immuknow檢測免疫狀態的界定

ImmuknowTM-Cylex通過使用PHA刺激全血淋巴細胞增殖，培養15-18個小時，用抗CD4+T淋巴細胞的單克隆抗體包被的磁珠選擇性結合CD4+T淋巴細胞，并加入發光試劑檢測裂解后淋巴細胞釋放的ATP值來評價細胞免疫活化程度，進而評價免疫狀態。

FDA[1]對155名正常人和127名生存良好的器官移植患者進行Immuknow分析，將免疫狀態分為三個參考區間，即ATP≤225 ng/ml為低免疫， 226 ng/ml≤ATP≤524 ng/ml為中度免疫，≥524 ng/ml為高免疫。其中健康兒童(12歲以下)，參考區間略有減少，即低免疫為≤175 ng/ml，中免疫為175 ng/ml≤ATP≤395 ng/ml，高免疫為≥395 ng/ml；12歲以上兒童參考范圍與成人無差異；穩定成人腎移植患者為258 ng/ml，兒童則為165 ng/ml[3]。器官移植患者免疫狀態維持在中免疫時，相對穩定。

Kowalski[4]等對美國504名器官移植(心、肝、腎、小腸)患者進行1833次Immuknow分析，證實移植患者CD4+T淋巴細胞ATP在280 ng/ml時是控制感染和排斥風險的平衡點。

Zhou[5]等對我國259例腎移植患者Immuknow檢測結果顯示238 ng/ml≤ATP≤497 ng/ml為中度免疫，與國外比較有些許差異。且腎移植術前患者普遍Immuknow檢測結果低于正常人，而在術后一周左右，ATP含量最低，兩周左右開始上升，但四周時仍然低于術前水平[6]。術后短時間內ATP降低這可能與接受移植手術前誘導及早期免疫抑制治療方案有關。

隨著感染、排斥、臨床指標、個體免疫狀態相關性的分析，Immuknow結果參考區間意義逐步明確，但對于理想的控制范圍、依據以及個體間的差異，仍需更多的臨床檢測數據予以完善。

2 檢測Immuknow對感染與排斥的意義

腎移植術后患者面臨的主要威脅是感染和排斥，而且嚴重影響患者生存狀態。免疫狀態過高，可能導致器官發生排斥反應，而免疫狀態過低，又可加大感染的發生幾率。無論是免疫水平過高還是過低，最終都會影響到移植腎的長期存活，甚至還會威脅到患者的生命。

Immuknow的檢測價值在于能夠早期預測感染和排斥的發生[7]，如果能夠定時定期地對術后患者進行Immuknow檢測，提早給予治療，可減少相應并發癥的發生，可以避免不必要的風險，更好地延長患者和移植腎臟壽命。當患者免疫狀態在低免疫或高免疫時，較同期處于中免疫狀態患者發生感染或排斥發生的風險增加十幾至幾十倍[4]，且臨床意義更加明顯。當術后ATP≤100 ng/ml時，幾乎都會存在一定的感染[8]。

對同一患者來講，動態監測不同時期的檢測結果，對其自身的免疫狀態評估更有意義。Cadillo-Chavez[9]等通過對個體的動態檢測，發現腎臟移植患者在術后兩周時Immuknow檢測結果比術前有所升高，提示有發生排斥的可能，檢測結果比術前有所降低可提示感染風險加大，亦可能存在免疫抑制過度，應加以注意。尤其對術后重癥感染的發生有一定預知性，為臨床抗感染治療和適時調整免疫抑制劑提供依據。據報道，重癥肺感染一般在腎移植術后半年內[10]，急性排斥反應多發生在術后1個月內，術后半年內進行Immuknow動態監測具有重要臨床應用價值。

在預防和治療感染、排斥方面，發生感染的患者CD4+T細胞內ATP含量低于非感染者，感染加重時，CD4+T細胞內ATP含量顯著下降，且感染程度與免疫力低下程度有關。CD4+T淋巴細胞的ATP含量降低基本早于臨床感染的發生，對術后感染有良好的預警作用。因此相對排斥而言，Immuknow更能有效地預測感染的發生[11，12]。也有學者認為Immuknow對于移植術后患者的排斥缺少預見性[13]。

統計分析證實，腎移植術后穩定組ATP值可在(310.19±147.12)ng/ml，而術后感染可在(142.41±118.26)ng/ml，多數排斥組與穩定組無統計學意義。最新研究表明，ATP在(627.07±149.85) ng/ml會發生排斥反應，且明顯高于同期穩定組(320.48±149.11) ng/ml[8,14,15]。

3 Immuknow檢測結果與臨床免疫抑制治療的調整

T淋巴細胞是免疫應答的主要細胞，大多數免疫抑制劑主要作用于T淋巴細胞[16]，而CD4+T淋巴細胞在移植免疫過程中發揮重要作用，故通過測定CD4+T淋巴細胞內ATP含量可以檢測移植患者細胞免疫功能，為免疫抑制劑的調整提供依據。

通常采用FK506的患者Immuknow檢測結果較同期環孢素A患者低，可能與FK506比環孢素A免疫抑制作用較強有關[6]。

目前，臨床多以患者服用免疫抑制劑后的血藥濃度與臨床表現作為調節基礎，但血液藥物濃度與機體免疫的實際情況存在差異，且不同個體之間藥物代謝動力學和藥物效應也存在較大差異。能否全面、準確的估計腎臟移植患者免疫狀態就顯得格外重要。

通過Immuknow對患者免疫功能的實時監測，了解腎移植患者免疫狀態，彌補免疫抑制劑血藥濃度監測的不足，準確給藥，實現真正意義的依據免疫功能施行個體化調節，減少不必要的感染與排斥的發生，在免疫不足和免疫過度之間求得平衡。有效預防感染和免疫排斥發生的同時，盡可能使用少量的免疫抑制劑，減少患者藥物代謝所帶來的不良反應和經濟負擔。

4 Immuknow檢測在腎移植的臨床應用價值

Moyer[17]等于1983年最早提出了內源性ATP數量能反映細胞活化程度的理論。Sottong[18]等在2000年應用ATP生物發光法檢測多種抗原刺激后淋巴細胞內ATP的量來評估細胞免疫，并用于檢測移植、腫瘤治療等患者。 2002年，美國食品與藥品管理局批準Cylex公司的Immuknow作為免疫細胞功能檢測技術用于臨床，這是唯一經FDA批準的細胞免疫功能測定方法，是目前最為快速、成熟的檢測免疫功能的方法。其相對MLR、淋巴細胞增殖等傳統方法，可以獲得更多更加準確的信息[19]，且利用了抗體包被的磁珠，24 h即可作出診斷，特異性，準確性、重復性均很穩定。能快速準確的體現患者整體免疫功能狀態。

Immuknow的檢測較準確地評價人體的免疫狀態，做到科學適量地應用免疫抑制劑，最大程度抑制排斥的發生，盡量減少免疫抑制劑的使用量，同時降低感染和其他不良反應發生的幾率，以達到個體化治療的目的。

通過檢測腎臟移植患者術前、術后的CD4+T淋巴細胞內ATP的濃度水平，客觀地反映細胞免疫的功能，并討論其在腎臟移植前后相應的免疫狀態的動態變化，評價機體免疫狀態，以分析患者術后感染、排斥的發生機率，并且指導合理應用免疫抑制劑。多個移植中心數據顯示，Immuknow檢測能有效評估同種異體器官移植前后的機體免疫功能狀態[4]，并且在一些移植中心依據Immuknow檢測結果調整個體治療方案取得了初步成果[20]。Immuknow檢測已經在肝移植中成為一種能夠降低和預防感染、排斥發生的有效工具[21]。

目前國內各大移植研究中心越來越重視Immuknow檢測在腎移植中的應用，對腎臟移植患者術前、術后的免疫功能進行測定，將術前ATP含量作為基礎，動態監測術后ATP的變化，實時監測CD4+T細胞活化程度、經系統分析，建立一種符合中國人及個體化腎移植患者的CD4+T細胞ATP含量的參考范圍，更準確的判斷患者的免疫移植狀態，成為臨床腎移植制定和調節免疫治療方案及預測感染和排斥預警的科學依據。

5 小結

近期通過對我院腎移植患者進行的術前、術后全血的動態檢測，取得了一部分可靠的檢測結果，基本與文獻相符，提示Immuknow檢測可以作為臨床一個監測移植患者免疫狀態的可靠指標。綜上所述， Immuknow檢測在腎移植免疫監測方面具有一定的指導作用。

作者簡介：滕昊林(1985-)，男，碩士，技師，主要從事器官移植組織配型及臨床免疫相關檢測工作。

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