中風(fēng)中醫(yī)證型動(dòng)物模型的研究概述*

范金花 胡國(guó)恒 樂金海

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

中風(fēng)中醫(yī)證型動(dòng)物模型的研究概述*

范金花1胡國(guó)恒2樂金海1

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

中風(fēng)中醫(yī)證候動(dòng)物模型綜述

中風(fēng)具有致殘率高、預(yù)后差、易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)，在全球已成為第一致殘和第二致死原因的疾病［1-2］，給社會(huì)和家庭造成巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。長(zhǎng)期以來(lái)中風(fēng)的西醫(yī)治療措施雖多，但尚缺乏理想的、安全的藥物［3］。隨著現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)探索中醫(yī)藥的作用機(jī)理已成為一個(gè)重要方法，亦是熱點(diǎn)。目前，中醫(yī)藥研發(fā)及中醫(yī)基礎(chǔ)研究所用的動(dòng)物模型仍以疾病動(dòng)物為主，與中醫(yī)的辨證論治理論不全相符，因此迫切需要具有中醫(yī)特色的病證結(jié)合動(dòng)物模型出現(xiàn)，研究制備中醫(yī)病證結(jié)合動(dòng)物模型顯得尤為重要。筆者就中風(fēng)臨床常見的5種中醫(yī)證型動(dòng)物模型制備方法闡述如下，以期為中醫(yī)藥辨證治療中風(fēng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究提供方法和依據(jù)。

1 中醫(yī)分型模型制作法

1.1氣虛血瘀證趙輝等提出的多因素復(fù)合制作氣虛血瘀證腦缺血模型制作方法，采用月齡（18±3）個(gè)月的大鼠分別予以饑餓、疲勞、寒濕、驚慌憂恐、高脂飲食處理，連續(xù)刺激10 d，第11日采用結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈制成大鼠腦缺血模型。造模后大鼠出現(xiàn)氣虛癥狀、血瘀癥狀［4］。張?jiān)蕩X等參照趙輝等提出的多因素復(fù)合制作氣虛血瘀證腦缺血模型制作方法，并根據(jù)中醫(yī)“勞則氣耗”的理論，以勞為主，采用大鼠負(fù)重后分批放入圓形游泳池，水溫控制在（20±1）℃，強(qiáng)迫其不停游泳直至力竭后撈出，每天力竭性游泳1次，持續(xù)21 d。然后采用改良Z-longa線栓法建立MCAO局灶性腦缺血再灌注模型。模型動(dòng)物表現(xiàn)出少動(dòng)或不動(dòng)，無(wú)力抵抗，偏癱，舌色紫黯、舌下絡(luò)脈青紫粗長(zhǎng)等腦缺血?dú)馓撗鲎C的表征，血液流變學(xué)檢測(cè)提示模型大鼠血液黏度增高、血小板聚集性增高，腦組織形態(tài)學(xué)符合腦缺血改變特征［4-6］。徐亞林等［7］采用每只大鼠每天喂食高膽固醇飼料同時(shí)按給予強(qiáng)地松口服，按此方法喂養(yǎng)4周，第3周時(shí)大鼠出現(xiàn)精神委頓，背毛枯槁、豎立、脫落，尾巴遠(yuǎn)端

及四肢發(fā)涼、蜷縮，活動(dòng)減少，耐疲勞時(shí)間減少，攻擊性及對(duì)抗性減弱，舌體胖大等氣虛癥狀。同時(shí)出現(xiàn)舌質(zhì)暗紅、四肢爪甲青紫、皮膚出現(xiàn)絲狀紅縷等血瘀癥狀，然后采用線栓法制造局灶性腦缺血?dú)馓撗鲎C動(dòng)物模型，模型動(dòng)物通過對(duì)神經(jīng)功能缺損征的判斷及對(duì)大鼠腦經(jīng)TTC染色，出現(xiàn)邊界清楚、范圍較恒定的蒼白色梗死灶，示造模成功［7］。多數(shù)文獻(xiàn)都是利用激素具有刺激骨髓造血的功能，使紅細(xì)胞和血紅蛋白含量增加，大劑量也可使血小板增多，提高纖維蛋白原濃度，縮短凝血時(shí)間等作用制造動(dòng)物血瘀模型，如苗明三等采用注射地塞米松的方法制造大鼠血瘀模型，每日于大鼠后腿內(nèi)側(cè)肌注地塞米松溶液，連續(xù)注射10 d。實(shí)驗(yàn)表明全血黏度值顯著增高，血液凝聚時(shí)間明顯縮短提示大鼠血瘀模型復(fù)制成功，然后麻醉動(dòng)物分離兩側(cè)頸總動(dòng)脈作結(jié)扎術(shù)，造腦缺血血瘀模型［8］。氣虛血瘀證是臨床諸多疾病的常見證型，在缺血性中風(fēng)中表現(xiàn)尤為突出，此類模型在制作缺血性中風(fēng)模型運(yùn)用最多，研究亦是最多，被認(rèn)為是經(jīng)典的中風(fēng)模型，趙輝的多因素復(fù)合制作氣虛血瘀證腦缺血模型制作方法應(yīng)用最多。如徐丹等參照趙輝多因素復(fù)合制作此證型的中風(fēng)模型探討復(fù)元膠囊對(duì)氣虛血瘀證大鼠血栓前狀態(tài)的調(diào)節(jié)作用［9］。根據(jù)中醫(yī)病因病機(jī)來(lái)造模，人工模擬了可致氣虛血瘀的因素，如“人過四十，陰氣自半”，大鼠月齡為18個(gè)月相當(dāng)于人類45～60歲，故使用此月齡的大鼠，符合中醫(yī)的辨證思維及臨床實(shí)際情況，但其優(yōu)劣沒有設(shè)置對(duì)比實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)。

1.2 肝陽(yáng)化風(fēng)證謝映等采用灌附子湯4周，然后采用（1）線栓法造成大腦中動(dòng)脈阻塞，復(fù)制缺血性肝陽(yáng)化風(fēng)模型；（2）RoSenberg方法誘導(dǎo)腦出血復(fù)制成腦出血肝陽(yáng)化風(fēng)模型［10］。但此法沒有宏觀觀察肝陽(yáng)化風(fēng)的表現(xiàn)，亦沒有行微觀指標(biāo)的觀察，模型的成功率、死亡率及重現(xiàn)率亦沒有體現(xiàn)。熊新貴等認(rèn)為高鹽飲食復(fù)制的高血壓動(dòng)物模型在許多方面與人類高血壓相似，且近

年研究表明附子有明顯的升壓作用，故采取飲用高滲鹽水同時(shí)灌服附子湯的方法復(fù)制血壓肝陽(yáng)上亢證模型，從激惹程度的觀察，旋轉(zhuǎn)時(shí)間的測(cè)定，血壓測(cè)定等幾個(gè)方面觀察，發(fā)現(xiàn)模型動(dòng)物出現(xiàn)煩躁易激惹、互相打斗、毛色逐漸失去光澤，甚至部分大鼠雙眼結(jié)膜顏色加深變紅，消瘦、口渴、飲水量明顯增多（提示口渴），大便干結(jié)，旋轉(zhuǎn)時(shí)間明顯縮短（提示頭暈），血壓增高，肝陽(yáng)上亢證造模完成的第7周用Ⅶ型膠原酶誘導(dǎo)腦出血，其具體操作方法參照Rosenberg方法制成肝陽(yáng)化風(fēng)型出血性中風(fēng)模型。模型動(dòng)物具有與人類肝陽(yáng)上亢證相似的某些臨床特征，腦內(nèi)注入膠原酶后，出現(xiàn)偏癱等神經(jīng)缺損癥狀，在光鏡和電鏡檢查下，顯示腦組織呈出血性損傷改變，與臨床上高血壓腦出血患者病理改變和神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)都非常類似［11］。中風(fēng)肝陽(yáng)化風(fēng)證型在臨床上出現(xiàn)較多，一般患者素體肝旺，或是情志不遂，肝郁化火，或是嗜食辛辣刺激之品，而致肝陽(yáng)上亢，陽(yáng)亢化風(fēng)則可見半身不遂，言語(yǔ)不利，口舌歪斜，易怒，便結(jié)尿黃等癥狀，據(jù)筆者查閱文獻(xiàn)情況來(lái)看肝陽(yáng)化風(fēng)中風(fēng)動(dòng)物模型研究不多。

1.3 痰瘀互結(jié)型李衛(wèi)民等根據(jù)缺血性中風(fēng)的病因，此病的發(fā)病與年齡、高脂飲食有密切關(guān)系，選用中老齡大鼠，采用高脂飲食，具體方法為采用高脂飼料喂養(yǎng)，同時(shí)予以脂肪乳劑灌胃1個(gè)月，次日結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈的方法，制作缺血性中風(fēng)痰瘀互結(jié)證模型［12］。模型動(dòng)物出現(xiàn)同側(cè)面癱、對(duì)側(cè)偏癱、偏身感覺障礙等是模型成功的主要標(biāo)志，且出現(xiàn)體質(zhì)量明顯增加，活動(dòng)減少，毛發(fā)失去光澤，反應(yīng)遲鈍，舌有瘀點(diǎn)瘀斑，尾巴呈紫色等為痰瘀的部分證候，與此證候臨床表現(xiàn)基本接近。同時(shí)檢測(cè)血脂、血液黏度、血漿纖維蛋白原、血沉等指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)其均明顯升高，表明模型大鼠血液流變性下降，痰瘀癥狀客觀存在，且發(fā)現(xiàn)TXB2升高與痰瘀互結(jié)證缺血性中風(fēng)以TXB2升高為特征認(rèn)識(shí)基本一致。由于現(xiàn)代多數(shù)人過食肥甘厚味，影響脾胃運(yùn)化，脾失健運(yùn)，聚濕生痰致使痰濁內(nèi)生，氣機(jī)受阻，阻滯脈絡(luò)導(dǎo)致血液運(yùn)行遲緩，最終痰濁瘀血互結(jié)而發(fā)本病。痰瘀互結(jié)是缺血生中風(fēng)的主要病機(jī)，貫穿本病的全過程［13］，中風(fēng)病臨床辨證中痰瘀互結(jié)型亦是多見。建立最利于研究的痰瘀互結(jié)模型不可或缺，在研究中應(yīng)用時(shí)應(yīng)根據(jù)疾病的特點(diǎn)、不同的情況選用最適合的方法對(duì)其進(jìn)行改進(jìn)。

1.4 腎虛痰瘀型何華等先參照略作改進(jìn)的Longa等的線栓法制作腦梗死模型，術(shù)后24 h對(duì)模型動(dòng)物采用貓嚇鼠法及高脂飲食造模，具體方法為：術(shù)后24 h將鼠籠直接置于中間僅僅隔一層鐵絲網(wǎng)的貓籠下，貓有時(shí)可觸及到大鼠，同時(shí)播放有兇狠貓叫聲的磁帶，每日上、下午各恐嚇2 h，同時(shí)術(shù)后24 h喂高脂飼料20g，火腿腸14g，連用25 d，模型動(dòng)物除了出現(xiàn)對(duì)側(cè)前肢內(nèi)收，無(wú)力，爬行時(shí)向左側(cè)傾斜等偏癱癥狀外，還出現(xiàn)毛發(fā)卷曲黯淡無(wú)澤、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、嗜睡、表情驚恐，飲食減少，二便失禁等腎虛痰瘀的證候表現(xiàn)［14］。何華等采用自然衰老大鼠（22月齡）按Tamura的方法稍加改進(jìn)，行右側(cè)大腦中動(dòng)脈近端電凝術(shù)，制成缺血性腦缺血模型［15］。且用青齡大鼠做對(duì)比，自然衰老大鼠除了出現(xiàn)典型的偏癱癥狀外可見毛稀豎立、黯淡無(wú)澤、弓背、懶動(dòng)、對(duì)抗性減弱、精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、采食飲水明顯減少、睡眠增多、陰囊皺縮、睪丸回升、舌質(zhì)及尾部皮色暗或紫、眼球暗紅等腎虛痰瘀證候，然而青齡大鼠未見上述腎虛痰瘀證候；表示本造模方法成功。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為腎為先天之本，主持人體生長(zhǎng)發(fā)育、生殖及調(diào)節(jié)機(jī)體代謝，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫、生殖等多個(gè)系統(tǒng)有密切關(guān)系。臨床上與腎虛相關(guān)的疾病較多，選擇合適的方法制造腎虛模型必然會(huì)對(duì)相關(guān)疾病的研究提供很大的幫助［16］。隨著人口老齡化程度加速，即自然衰老，臟氣虧損，腎精暗耗，精血虧乏，髓海不足，腦脈虛損，易陰虛生風(fēng)夾痰瘀阻脈絡(luò)；近年來(lái)此型在中風(fēng)發(fā)病和轉(zhuǎn)歸中的作用，愈來(lái)愈受到人們的重視。為深入研究中風(fēng)后遺癥腎虛痰瘀病機(jī)，建立良好穩(wěn)定的腎虛痰瘀病證模型在中醫(yī)藥現(xiàn)代化發(fā)展中非常重要。

1.5 肝腎陰虛證張娟等先采用激怒方法建立中醫(yī)肝腎陰虛模型［17］。具體方法為每日定時(shí)將實(shí)驗(yàn)大鼠均雙后肢束縛，固定于蓋網(wǎng)上，每2只一籠，以引起明顯激怒，表現(xiàn)為粗叫、扭打和嘶咬，每日1次，首次維持應(yīng)激20min，以后隔日增加10min，共20 d，對(duì)大鼠精神、毛發(fā)、大便、舌質(zhì)、眼球、尾尖等進(jìn)行評(píng)分，評(píng)定肝腎陰虛程度，如大鼠出現(xiàn)精神萎靡、閉眼或是瞇眼、低頭、縮頸、弓背、毛發(fā)豎立、身體卷曲、少動(dòng)、相互靠攏靜臥、反應(yīng)遲鈍、體重明顯減輕，提示中醫(yī)肝腎陰虛模型建立成功，然后采用線栓法［18］制作右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞模型，病與證的造模因素有機(jī)結(jié)合，體現(xiàn)了中醫(yī)病證結(jié)合的特點(diǎn)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為肝腎精血之盛衰與神經(jīng)元密切相關(guān)，中醫(yī)范疇的“腦髓”似應(yīng)涵蓋神經(jīng)元、神經(jīng)細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、胞外基質(zhì)等腦內(nèi)基本結(jié)構(gòu)和功能單位［19］。中藥“補(bǔ)肝腎益髓”是否能促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞能量代謝和利用，激活內(nèi)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子生成增多及促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞再生，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究必不可少，此證型動(dòng)物模型良好的建立可為肝腎精血之盛衰與神經(jīng)元之間的關(guān)系探討提供重要的平臺(tái)。

2 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，建立病證結(jié)合動(dòng)物模型使其不再只使用疾病模型，且需符合具有中醫(yī)特色證型的造模方法。筆者總結(jié)了中風(fēng)臨床上常見證型的動(dòng)物模型制備法，發(fā)現(xiàn)目前針對(duì)中醫(yī)證型中風(fēng)模型研究存在幾個(gè)方面的問題。第一，造模過程中人為因素占的比例大，且受各種不可避免飼養(yǎng)環(huán)境因素影響及倫理學(xué)的制約，不完全符合人類疾病發(fā)展的規(guī)律；第二，近年來(lái)病證結(jié)合模型研究少，且中醫(yī)各家分型不統(tǒng)一，給造模帶來(lái)不便；第三，大多以主觀檢測(cè)指標(biāo)為主，模型缺乏造模成功的客觀檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，且其優(yōu)劣缺乏對(duì)比。劉會(huì)賢等總結(jié)出：第一，中醫(yī)要堅(jiān)持中醫(yī)自己的發(fā)展規(guī)律，病證結(jié)合動(dòng)物模型有篩選模擬研究的病機(jī)特異性指標(biāo)，建立評(píng)價(jià)體系，使病證結(jié)合模型有理有據(jù)；第二，利用已制備完善的動(dòng)物模型進(jìn)行藥物治療干預(yù)或?qū)χ兴幮滤庍M(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)，亦可借鑒這些特異性指標(biāo)［20］。

在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)，使觀察指標(biāo)量化及標(biāo)準(zhǔn)化，對(duì)證深入研究，逐步完善研究制備中醫(yī)病證結(jié)合動(dòng)物模型，并嘗試進(jìn)行其他病證結(jié)合動(dòng)物模型的研制，滿足基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)研究的需求，為中醫(yī)科研的發(fā)展提供了廣闊的前景，讓中醫(yī)藥更好地為人類服務(wù)。

［1］范學(xué)聰.缺血性腦卒中的中醫(yī)藥治療研究進(jìn)展［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，13（2）：217-219.

［2］秦驥，張運(yùn)克.不同年齡組缺血性中風(fēng)患者證候分布規(guī)律分析［J］.河南中醫(yī)，2007，27（12）：37-38.

［3］潘紅，孫芳玲，王文，等.缺血性腦卒中的治療藥物及其有效治療時(shí)間窗的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐，2013，19（3）：201-203.

［4］趙輝，王鍵，李凈，等.多因素復(fù)合制作氣虛血瘀證腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ腕w會(huì)［J］.河南中醫(yī)，2010，33（22）：41-43.

［5］張?jiān)蕩X，張錦，扈新剛，等.制作缺血性中風(fēng)氣虛血瘀證大鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，29（4）：343-346.

［6］李勝，雷征霖.大鼠大腦中動(dòng)脈阻斷可逆性局灶腦缺血模型的研究［J］.腦與神經(jīng)疾病雜志，1997，5（6）：341-343.

［7］徐亞林，李承晏，王鵬.局灶性腦缺血?dú)馓撗鲎C動(dòng)物模型的構(gòu)建［J］.湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，6（3）：16-18.

［8］苗明三，程再興，宰炎冰，等.大鼠血瘀合并腦缺血模型的建立［J］.中藥新藥與臨床藥理，2007，18（1）：1-5.

［9］徐丹，李榮亨，李學(xué)榮.復(fù)元膠囊對(duì)氣虛血瘀證模型大鼠血栓前狀態(tài)的影響［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2011，31（21）：4167-4169.

［10］謝映，梁清華，熊新貴，等.泛素羧基末端水解酶在肝陽(yáng)化風(fēng)證中的表達(dá)［J］.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，14（2）：270-272.

［11］熊新貴，梁清華，陳疆，等.高血壓性腦出血肝陽(yáng)化風(fēng)證大鼠模型的建立［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，27（6）：11-14.

［12］李衛(wèi)民，池建淮.缺血性中風(fēng)痰瘀互結(jié)證動(dòng)物模型的初步探討［J］.實(shí)驗(yàn)中醫(yī)藥學(xué)，2012，13（1）：15-18.

［13］林心君，梁暉.缺血性中風(fēng)痰瘀相關(guān)機(jī)制的理論探析［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2004，22（11）：2099-2100.

［14］何華，王桂香，鐘士江，等.中風(fēng)后遺癥腎虛痰瘀大鼠模型的建立［J］.中國(guó)行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2005，14（14）：1124-1126.

［15］何華，王桂香，馮勛剛，等.試用自然衰老大鼠建立中風(fēng)后遺癥腎虛痰瘀病證模型［J］.中國(guó)行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2006，15（12）：1072-1075.

［16］杜江，李楠，王和鳴.腎虛模型造模方法及相關(guān)指標(biāo)［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14（50）：9433-9436.

［17］張涓，劉邦民，袁有才，等.養(yǎng)陰通絡(luò)方對(duì)腦缺血損傷的保護(hù)作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2011，27（4）：83-85.

［18］劉運(yùn)泉，戴穎.線栓法大鼠局灶性腦缺血模型的改進(jìn)［J］.中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志，2005，23（2）：222-223.

［19］熊露，田少霞，范吉平，等.中醫(yī)藥治療缺血性中風(fēng)研究探討［J］.中醫(yī)雜志，2004，45（1）：5-7.

［20］劉會(huì)賢，劉敬霞，劉洋，等.中風(fēng)病證結(jié)合動(dòng)物模型制備的現(xiàn)狀與思考［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2012，27（8）：2126-2131.

R255.2

A

1004-745X（2014）01-0090-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.01.043

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81273751）

2013-07-20）

·綜述·