兩種細胞輔助脂肪移植隆乳的臨床效果觀察

王 琳 陸 毅 傅敏剛 何繼銀 黃一雄 范志宏

兩種細胞輔助脂肪移植隆乳的臨床效果觀察

王 琳 陸 毅 傅敏剛 何繼銀 黃一雄 范志宏

目的觀察兩種細胞輔助脂肪移植技術（Cell-assisted lipotransfer，CAL）隆乳的臨床療效。方法CAL技術隆胸30例，根據術中提取的基質血管成分細胞（Stromal vascular fraction，SVF）來源分為兩組，來源于脂肪組織的稱為固相組（S組，n=24），來源于吸脂液的為液相組（L組，n=6）。術后均隨訪12個月。流式細胞儀檢測兩種來源SVF中脂肪干細胞（Adipose-derived stem cells，ADSCs）比例，MRI檢測術前及術后6、12個月的乳房體積，計算移植脂肪組織的吸收率。結果兩組新鮮分離的SVF細胞群中，ADSCs平均比例分別為S組40.73%、L組3.75%。MRI測量及統計結果顯示，S組術后6、12個月時乳房體積均明顯大于術前（P＜0.05），術后6個月與12個月時無明顯差異（P＞0.05）。12個月時脂肪吸收率為（51.83±15.28）%，與6個月時相比無明顯差異（P＞0.05）；L組12個月時脂肪吸收率為（75.47±12.20）%，與6個月時相比無明顯差異（P＞0.05）；MRI影像見囊腫2例，均來自S組。結論脂肪組織相比吸脂液，其SVF細胞群中ADSCs含量明顯更高；CAL輔助脂肪移植技術隆乳術安全有效，術后6個月乳房體積即可保持基本穩定。

細胞輔助脂肪移植技術隆乳術乳房體積

2008年,細胞輔助的脂肪移植技術（Cell-assisted lipotransfer，CAL）隆乳被首次報道。此技術旨在利用基質血管成分（Stromal vascular fraction，SVF）中含有的脂肪干細胞（Adipose derived stromal/stem cells，ADSCs）降低移植脂肪組織的吸收率。根據術中SVF來源于固相的脂肪組織或液相的吸脂液，可分為固相CAL和液相CAL[1]。我科自2009年6月至2014年5月共進行了CAL隆胸30例，我們通過MRI測量術后6、12個月的乳房體積，計算移植脂肪組織的吸收率，對比手術前后乳房MRI影像的變化，對兩種CAL隆乳術的臨床效果進行觀察比較。

1 一般資料

共30例健康女性，按術中提取SVF細胞來源分為固相組（S組，n=24）（離心后脂肪組織250 mL）和液相組（L組，n=6）（靜置后吸脂液500 mL）。無其他乳房疾病。手術在全麻下進行，供脂部位為大腿后方、側腰和下腹部。所有患者隨訪12個月。

主要試劑和儀器：0.075%膠原酶（Wako Pure Chemical Industries，日本）；CD29、CD34、CD31、CD73、CD105、CD45、CD90及IgG同型對照（eBioscience公司，美國）；Lipokit吸脂離心機（韓國）。

2 方法

2.1 SVF成分的獲取

取常規吸脂術中的離心后脂肪組織250 mL或靜置后吸脂液500 mL送細胞分離室。0.075%膠原酶消化脂肪組織45 min，離心，棄上層液，DMEM重懸下層混合的細胞沉淀。離心，重懸，反復洗滌3次去除膠原酶。吸脂液500 mL經800 g離心5 min，棄上層液，吹打，加生理鹽水200 mL，震蕩30 sec，22.2 mL的10×PBS恢復等張，離心，重懸，共3次。每組各取50 μL，加M199培養基200 μL，100目濾網過濾，細胞計數，調整細胞數至1×107cells/mL。

2.2 SVF中ADSC的含量檢測

獲取的細胞數達1×107cells/mL的SVF留樣每組各1 mL，分為每份1～3×105個細胞，加抗體CD29 -PE、CD34-PE、CD31-FITC、CD73-FITC、CD105-FITC、CD45-APC、CD90-PECy5，IgG同型對照。4℃孵育30 min，含4%FBS的PBS洗滌后用流式細胞儀進行分析檢測，結果取平均值。

2.3 CAL技術隆胸

脂肪組織700 g離心3 min，收集中間部分的脂肪于合適的無菌容器中，置于冰水混合物中保存。將2.1中提取的SVF成分與離心后脂肪組織充分混勻，靜置15 min，吸去表面油脂，剪碎條索，移入18 g內徑1 mm的特制注射針管中。以乳房外下象限6、7、8、9點為進針點，多隧道注射，注射平面和體積比例為深層的胸大肌內∶淺層皮下=1∶1，避免刺穿胸膜。

2.4 療效觀察

①大體觀察：查體并參照術前術后照片，對乳房體積改變、組織柔軟度、有無硬結、供脂區有無凸凹不平等方面進行綜合評估；②MRI測量乳房體積：術前、術后6、12個月行雙側乳房平掃，由本院放射科3位專業技師對所得影像資料進行體積測量，反復3次，取平均值，分別記為V（S/L）0、V（S/L）6及V（S/L）12。按公式計算吸收率，記為R（S/L）6及R（S/ L）12；數據采用Student's t-test進行分析，P＜0.05為差異具有統計學意義；③評價乳房MRI影像的變化：主要觀察有無結節、囊腫或鈣化。

R=1-(V6/12-V0)/注入脂肪體積×100%

3 結果

3.1 流式細胞檢測結果

S組SVF中ADSCs相關表面標志CD29、CD34、CD73、CD90、CD105高表達，而內皮細胞表面標志CD31及造血細胞表面標志CD45低表達（圖1A），ADSCs平均占40.73%（圖1B）。L組SVF中ADSCs相關表面標志低表達，而內皮細胞及造血細胞表面標志高表達（圖2A），ADSCs平均僅占3.75%（圖2B）。

3.2 MRI測量及統計結果

S組和L組的脂肪注射體積分別為每側（253.67±17.40）mL和每側（208.37±13.38）mL。MRI測量及統計結果顯示，術后12個月，兩組移植脂肪吸收率分別為（51.83±15.28）%和（75.47±12.20）%。S組術后6個月乳房體積較術前明顯增大，但術后6～12個月間，乳房體積無顯著變化。L組各時間點間乳房體積無顯著變化。術后6個月MRI檢測，S組2例患者檢測到囊腫，直徑分別約1.2 cm和0.7 cm，術后12個月MRI未見囊腫增大，密切隨訪中。所有患者未見鈣化改變（表1、圖3、圖4）。

圖1 S組SVF的細胞成分Fig.1 The components of SVF in group S

圖2 L組SVF的細胞成分Fig.2 The components of SVF in group L

表1 兩組各時間點MRI測量的乳房體積及移植脂肪吸收率Table1 Breast volume and the resorption rate of transplanted adipose tissue at each time point of the 2 groups

圖3 典型病例Fig.3 Typical case

圖4 MRI影像Fig.4 MRI images

4 討論

研究表明，以ADSCs為主的活性細胞成分的缺乏和丟失，是傳統脂肪移植成活率低的主要原因[2]。Sterodimas等[3]認為，與完整脂肪組織相比，抽吸得到的脂肪組織中ADSCs的數量只有原來的一半。盡管大量動物實驗研究已經證明，ADSCs能增加游離移植脂肪組織內的血管密度，提高移植物的成活率[4]，但由于ADSCs無特異性的表面標志，而高純度的ADSCs的富集需要經過體外培養、擴增和誘導鑒定等步驟，臨床應用的安全性和可行性無法保障。

CAL技術因無需體外培養擴增即能提供含有ADSCs的SVF成分，因此具有較高的臨床應用價值。根據術中SVF來源于固相的脂肪組織或液相的吸脂液，可分為固相CAL和液相CAL[1]。其中液相CAL技術有望將以往廢棄的吸脂液“變廢為寶”，成為ADSCs的來源之一，但由于所獲得的ADSCs含量較低，液相CAL技術用于較大體積的脂肪移植（如隆胸）的效果尚有待評估。

MRI技術對軟組織分辨率高，且三維實體的計算機數字化取樣已臻完備[5]。本研究采用MRI為檢測手段，測量乳房體積，通過對比手術前后乳房軟組織的影像學變化并觀察有無結節、囊腫、鈣化等并發癥的發生，評估兩種CAL技術隆乳的安全性和有效性。本研究結果顯示，術后6、12個月時乳房體積均明顯大于術前（P＜0.05），術后6個月與術后12個月時無明顯差異（P＞0.05），說明與術前相比，S組術后乳房體積明顯增大，外觀有明顯改善。但L組各時間點乳房體積差異無統計學意義，說明液相CAL技術未能有效增大乳房體積。術后6、12個月的移植脂肪吸收率均無明顯差異（P＞0.05），說明術后6～12個月間，乳房體積未見明顯縮小，結果與大體觀察一致，即至術后6個月乳房體積基本穩定。MRI影像未見鈣化，但2例S組患者于皮下脂肪層內發現直徑1 cm左右的囊腫，未見增大趨勢，予以密切隨訪。上述研究結果表明，固相CAL技術隆乳安全有效，但仍有約（51.83±15.28）%的吸收率，相較于傳統脂肪移植隆乳術40%～60%的吸收率[6]，未見明顯優勢。主要原因可能是：相較于較大的注射脂肪體積每側（253.67±17.40）mL，ADSCs的數量仍不足夠。盡管S組SVF中的ADSCs占40.73%，遠高于L組的3.75%，但250 mL脂肪獲得的ADSCs數量僅為107～108個[7]。動物實驗發現，移植后4周，固相CAL組的移植物重量高于單純脂肪移植組，并有較好的血管化，但提供SVF的脂肪體積：注射脂肪體積為4∶1[8]。按此體積比計算，相對于S組平均每側約250 mL的注射脂肪，用于提取SVF的脂肪體積將達2 000 mL，而本研究中僅為250 mL。可見，應用固相CAL技術隆乳時，提供SVF的脂肪與注射脂肪的體積比應盡可能增大。對于脂肪儲備充足的患者，有望獲得1∶1甚至是2∶1的體積比。L組乳房體積無顯著改善，術后12個月時的脂肪吸收率為（75.47±12.20）%，除液相CAL技術提取的SVF中ADSCs含量較低外，還可能的原因是，相較于S組患者，L組患者均為體型偏瘦者，乳房皮膚張力較高，加重了移植脂肪的缺血缺氧情況。與單純脂肪移植技術相似，對于脂肪儲備不足、乳房發育較差的患者，液相CAL隆乳術有一定的局限性。

本研究證實了固相CAL技術隆胸的有效性，為CAL技術的臨床應用提供了一定的參考。但如何進一步降低術后移植脂肪的吸收率，尚需大量深入的基礎及臨床研究。

[1]Yoshimura K,Sato K,Aoi N,et al.Cell-assisted lipotransfer (CAL)for cosmetic breast augmentation:supportive use of adiposederived stem/stromal cell[J].Aesthetic Plast Surg,2008,32(1):48-55.

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Evaluation on Two Kinds of Cell-assisted Lipotransfer for Breast Augmentation

WANG Lin,LU Yi,FU Mingang,HE Jiyin,HUANG yixiong,FAN Zhihong.

Department of Aesthetic and Plastic Surgery,Renji Hospital,Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai 200127,China.Corresponding author:FAN Zhihong(E-mail:fanzhihong0815@163. com).

ObjectiveTo evaluate the effect of two kinds of cell-assisted lipotransfer for breast augmentation.Methods Thirty patients accepted breast augmentation using cell-assisted lipotransfer(CAL),and completed 12-month follow-up. According to the stromal vascular fraction(SVF)distilled from adipose tissue or aspirated liquid,the patients were divided into 2 groups:S group and L group.Flow-cytometry was used to detect the percentage of adipose-derived stem cells(ADSCs) in distilled SVF.The breast volumes and images were evaluated by MRI pre-operative,6 and 12 months post-operative.The data of breast volume were markedandthe resorption rate of transplanted adipose tissue was calculated.Results Averagely,the percentage of ADSCs in freshly distilled SVF in S group is 40.73%and 3.75%in L group.MRI showed that the breast volume 6－month post-operative and 12－month post-operative were both larger than that of preoperative in S group (P＜0.05),while no significant difference between the breast volume 6－month post-operative and 12－month post-operative were observed(P＞0.05),neither the resorption rate of 6 and 12-month post-operative(P＞0.05),and the resorption rate of transplanted adipose tissue 12－month post-operative in S group was(51.83±15.28)%.However,there were no significant difference of breast volume among three time points in L group(P＞0.05),neither the resorption rate of 6 and 12-month postoperative(P＞0.05),and the resorption rate of transplanted adipose tissue 12－month post-operative in L group was(75.47± 12.20)%.In addition,no calcification was seen in all MRI images but cysts were found in two cases of S group.Conclusion In process of breast augmentaion using cell-assissted lipotransfer,the distilled SVF from adipose tissue contains more ADSCs than that from aspirated liquid.The cell-assisted lipotransfer for breast augmentation is effective,safe,and the shrinkage stalls at 6-month post-operative.

Cell-assissted lipotransfer;Breast augmentation;Breast volume

R622

A

1673－0364（2014）06－0339－04

2014年7月4日；

2014年8月13日）

10.3969/j.issn.1673-0364.2014.06.010

200127上海市上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院整形外科。

范志宏（E-mail：zhihongfan0815@163.com）。