益氣活血、通陽化痰法對實驗性動脈粥樣硬化家兔血清對氧磷酶1活性的影響

楊軍輝 張 靜 周小青

（湖南中醫(yī)藥大學，長沙410007）

益氣活血、通陽化痰法對實驗性動脈粥樣硬化家兔血清對氧磷酶1活性的影響

楊軍輝 張 靜 周小青

（湖南中醫(yī)藥大學，長沙410007）

目的觀察益氣活血、通陽化痰法對實驗性動脈粥樣硬化（AS）家兔血清對氧磷酶1（PON-1）活性的影響。方法將54只家兔隨機分為6組，每組9只。分為空白對照組、模型對照組、辛伐他汀組、中藥大、中、小劑量組。除空白對照組外其余各組給予高脂飼料喂養(yǎng)4周后開始灌胃給藥，1次／d，連續(xù)4周后處死動物，測定血清PON-1活性。結果模型組的PON-1活性較空白對照組明顯降低（P＜0.01）。中藥各劑量組可以有效地升高血清PON-1活性，其中5g／kg劑量組和模型組比較差異十分明顯（P＜0.01），2.5g／kg劑量組和模型組比較差異也有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論益氣活血、通陽化痰法可通過升高血清PON-1活性來防治AS。

益氣活血；通陽化痰；動脈粥樣硬化；對氧磷酶1

動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是引起冠心病等心腦血管疾病的主要病理基礎［1-3］。因于年老久病，臟腑功能虛損，正氣虧虛，氣虛血瘀，痹阻胸中。胸陽不振，痰濁內生，痰瘀痹阻心脈而發(fā)生AS［4］。益氣活血、通陽化痰法切中AS之病機［5］，可作為其基本治法。本文旨在通過運用益氣活血、通陽化痰法對實驗性AS家兔血清PON-1活性的影響，以探討其對AS形成的影響。

1 材料與方法

1.1藥品、試劑和儀器辛伐他汀（成都華宇制藥有限公司生產，批號：H19990002）；中藥方（以補陽還五湯合瓜蔞薤白半夏湯進行化裁，組成：黃芪20g，赤芍15g，川芎15g，桃仁12g，紅花12g，薤白12g，瓜蔞15g，半夏12g）均購自湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院中藥房；高脂飼料（北京科澳協力飼料有限公司生產）；乙酸苯脂（PA）（由北京百靈威化學技術有限公司提供，批號：A0220142）；338453型紫外可見分光光度計（美國Agilent公司）。

1.2實驗動物日本大耳白家兔54只，雄性，體重2.0～2.5kg，由湖南中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供，動物許可證號：SYXK（湘）2009-0001。

1.3分組給藥及模型的建立將日本大耳白兔54只隨機分為6組。①空白對照組：普通飼料，生理鹽水灌胃，10ml／d；②模型對照組：按文獻指導方法［6］，實驗前4周以79.5%基礎飼料加15%蛋黃粉、0.5%膽固醇和5%豬油喂食，后4周將膽固醇去掉，給予80%基礎飼料加15%蛋黃粉和5%豬油喂食，生理鹽水灌胃，10ml／d；③辛伐他汀組：模型組＋辛伐他汀2mg／kg；④中藥方大劑量組：模型組＋中藥方5g／kg；⑤中藥方中劑量組：模型組＋痰瘀同治方2.5g／kg；⑥中藥方小劑量組：模型組＋痰瘀同治方1.25g／kg。各給藥組把藥物溶于10ml蒸餾水中，在4周時開始分別灌胃給藥持續(xù)4周，均1次／d，于末次給藥后第2日晨空腹頸總動脈取血，凍存。

1.4 PON-1的測定采用338453型紫外可見分光光度計進行測定。測定原理是：PON-1可將乙酸苯脂（PA）水解為乙酸和苯酚（Phenol），苯酚在270nm波長處有強吸收峰，在一定濃度內，其濃度與吸光度呈線性關系，單位時間內生成的苯酚量可反應PON-1的活性。

1.5統(tǒng)計學方法實驗結果均采用均數±標準差±s）表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件處理。資料的統(tǒng)計學分析用單因素方差分析，方差齊性用Student-New-man-Keuls檢驗，方差不齊用Tamhane's T2檢驗。P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

益氣活血、通陽化痰法對家兔血清PON-1活性的影響。見表1。

表1 益氣活血、通陽化痰法對家兔血清PON-1活性的影響±s，U／ml）

表1 益氣活血、通陽化痰法對家兔血清PON-1活性的影響±s，U／ml）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01

組別劑量（kg）n PON-1 activit y空白對照組—9 244.90±18.79＃＃模型對照組—9 128．01±25．43**辛伐他汀組2mg 9 175．59±50．71*中藥方大劑量組5g 9 218．80±40．84＃＃中藥方中劑量組2．5g 9 180．68±48．34＃中藥方小劑量組1．25g 9 167．16±62．68**

由表1可知，實驗結束時，模型組的PON-1活性較正常對照組明顯降低（P＜0.01）。中藥方各劑量組可以有效地升高血清PON-1活性，其中5g／kg劑量組和模型組比較差異十分明顯（P＜0.01），2.5g／kg劑量組和模型組比較差異也有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

3 討論

動脈粥樣硬化（AS）的發(fā)病過程十分復雜，其確切的病因尚未完全闡明，一般認為由多個遺傳和環(huán)境因素相互作用所致。大量流行病學調查揭示不少遺傳或環(huán)境因素與AS的發(fā)生存在明顯的相關性，但未必一定具有直接的因果關系。由于這些因素尚不能作為確切的病因，習慣上被稱為動脈粥樣硬化的危險因素［7］。

對氧磷酶l（PON-1）是高密度脂蛋白（HDL）顆粒中的一種抗氧化酶。氧化修飾低密度脂蛋白（ox-LDL）是AS發(fā)生發(fā)展的始動因素，PON-1可水解特異性膽固醇脂和磷脂等脂質過氧化物，保護LDL和HDL免受氧化修飾。PON-1通過促進已被氧化的LDL上特定的脂質分解、抑制巨噬細胞對膽固醇攝取、抑制巨噬細胞膽固醇的生物合成以及促進由HDL介導的膽固醇從巨噬細胞中流出等方面的作用從而達到抑制巨噬細胞形成，防止動脈硬化。研究發(fā)現［8］：PON-1基因被敲除的鼠巨噬細胞與提純的人類PON-1共同培養(yǎng)，在巨噬細胞膽固醇合成方面呈現出劑量依賴性抑制效應高達80%，這些作用與PON-1處理后巨噬細胞溶血磷脂酸膽堿形成有關。PON-1可能還通過降低脂質過氧化物在血管壁的沉積，影響冠狀動脈粥樣硬化的進程。近年來研究發(fā)現［9，10］：PON-1具有抗低密度脂蛋白氧化作用，在抑制慢性心血管疾病尤其冠心病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。Mackness等［11］在動物模型體內，發(fā)現消融的PON-1基因具有抗炎、抗AS的活性，而在人類過表達的PON-1具有抗炎、抗AS的活性。楊麗霞等［12］通過測定300例冠心病患者血清中的PON-1水平，表明PON-1水平與冠心病及其嚴重程度密切相關，其參與了AS的發(fā)生發(fā)展。

動脈粥樣硬化可歸屬中醫(yī)“痰濁”、“胸痹”等病癥的范疇。其發(fā)病系因臟腑功能失調，氣血津液運行不暢，產生痰濁、瘀血、氣滯等病邪，其病性為本虛標實。脂質代謝異常是動脈粥樣硬化發(fā)病的最重要危險因素，而痰瘀互結是脂質異常的主要病理基礎［13］。痰來自津，瘀本于血，生理上屬“津血同源”，病理上為“痰瘀同病”。津液虧虛，生瘀生痰；津運障礙，因痰致瘀；血運失調，因瘀致痰，均可形成痰瘀互結為病［14，15］。正如《明醫(yī)雜著》曰：“若血濁氣滯則凝聚為痰，氣虛死血痰飲為言。”明確提出了痰瘀相關。益氣活血、通陽化痰法切中AS之病機，是治療AS的基本方法。方中黃芪益氣，意在氣旺血行，瘀去絡通；赤芍、川芎、桃仁、紅花活血化瘀，與黃芪相配，有益氣活血、祛瘀通絡之功；薤白通陽化痰，瓜蔞滌痰散結，半夏燥濕化痰，三者相伍，有通陽化痰散結之效。諸藥合用，共奏益氣活血、通陽化痰之功。李磊等［16］經實驗表明，給予痰瘀同治方的家兔，其PON-1活性較模型組明顯升高，從而起到抗AS的作用。本研究結果顯示，益氣活血、通陽化痰法可升高血清PON-1的活性，而PON-1可保護LDL免受氧化，防止AS的形成，為益氣活血、通陽化痰法進一步用于冠心病的臨床治療提供了實驗依據。

［1］楊翠玲．心腦血管病的預防與治療探討［J］．中國現代藥物應用，2010，3（3）：226．

［2］王宏宇．血管醫(yī)學未來發(fā)展的方向是滿足全身血管病變綜合防治需要［J］．心血管病學進展，2013，34（4）：15-18．

［3］彭紹杰，楊俊．中醫(yī)藥治療頸動脈粥樣硬化臨床研究近況［J］．中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2013，11（3）：347-349．

［4］王椿野，趙振武，李新龍，等．基于現代文獻的動脈粥樣硬化中醫(yī)病機研究［J］．環(huán)球中醫(yī)藥，2013（2）：92-95．

［5］劉秀美，張艷，于睿，等．淺談心主血脈與動脈粥樣硬化的相關性［J］．世界中西醫(yī)結合雜志，2010，5（003）：190-191．

［6］施新猷．現代醫(yī)學實驗動物學［M］．北京：人民軍醫(yī)出版社，2000：470．

［7］楊永宗，阮長耿，唐朝樞，等．動脈粥樣硬化性心血管病基礎與臨床［M］．北京：科學出版社，2004：10．

［8］ROZENBERGO，SHINDM，AVIRAMM．Human serum paraoxonasel（PON1）dreasesmaerophage cholesterol biosynthesis：a possible role for its Phosphor-lipase-A2 ativity and lysophosphatidylcholine formation［J］．Arterioseler Thromb Vasc Bio，2003，23：461-467．

［9］唐三華，匡希斌．對氧磷酶生物學特性與心血管疾病研究進展［J］．社區(qū)醫(yī)學雜志，2012，10（003）：14-16．

［10］王帆，白濤，李鵬鵬，等．對氧磷酶的結構，活性及基因多態(tài)性與冠心病的關系［J］．中國老年學雜志，2013，33（005）：1203-1205．

［11］Mackness B，Mackness M．Anti-inflammatory properties of paraoxonase-1 in atherosclerosis／／Paraoxonases in Inflammation，Infection，and Toxicology［M］．Humana Press，2010：143-151．

［12］楊麗霞，陳文山，齊峰，等．血漿髓過氧化物酶和對氧磷酶水平與冠心病及其嚴重程度的相關性［J］．中華老年多器官疾病雜志，2012，11（9）：686-689．

［13］馮純慧，呂建衛(wèi)，潘科廷，等．痰瘀同治法在心血管疾病治療中的研究現狀［J］．疑難病雜志，2008，7（2）：126-127．

［14］房肖曼，陳曉．中醫(yī)辨治痰瘀互結型冠心病研究進展［J］．遼寧中醫(yī)雜志，2008，36（8）：1272-1274．

［15］呂翠芬，劉玉珍，呂信慶．中醫(yī)對冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（胸痹）的理論研究及治療探討［J］．中國醫(yī)藥指南，2012，10（17）：294-294．

［16］李磊，劉建勛，李欣志，等．痰瘀同治方對兔動脈粥樣硬化對氧磷酶活性及炎癥因子的影響［J］．中國實驗方劑學雜志，2009（008）：53-56．

Effect on the Enzyme Activity of Paraoxonase 1（PON-1）in the Experimental Atheroscler osis Rabbits Serum by Method of the Qi-Replenishing，Blood-Activating，Yang-Invigorating and Phlegm-resolving

Yang Junhui Zhang Jing Zhou Xiaoqing
（Hunan university of traditional Chinese medicine,Changsha,410007,China）

ObjectiveTo observe the effect of qi-replenishing，blood－activating，yang－invigorating and phlegm－resolving method on serum paraoxonase 1（PON-1）activity of rabbits with experimental arteriosclerosis（AS）．Methods54 rabbits were randomized equally into 6 groups，including blank control group，modeling group，therapy group with Simvastatin，and other 3 therapy groups with high，medium，low dosage of Chinese medicinal respectively．Rabbits from all groups，except blank control group，were fed with high fat diet for 4 weeks，and received intragastric administration of medication afterwards，once daily for 4 consecutive weeks．Then all groups of rabbits were killed and tested for serum PON-1 activity．ResultsSerum PON-1 activity of modeling group were significantly decreased（P＜0.01），compared with blank control group．All therapy groups with different dosage of Chinese medicinal can effectively rise serum PON－1 activity，thereamong，highly significant difference（P＜0.01）was found between 5g／kg dosage group and modeling group，whereas there was also significant difference（P＜0.05）between 2．5g／kg dosage group and modeling group．Conclusionqi-replenishing，blood-activating，yang-invigorating and phlegm-resolving method can control AS via its elevation of serum PON-1 activity．

Qi-replenishing and blood-activating；Yang-invigorating and phlegm-resolving；Arteriosclerosis；Paraoxonase 1

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.06.094

：1672-2779（2014）-06-0148-02

蘇 玲 本文校對：蘇 玲

2013-12-28）