中性粒細胞CD64定量檢測在感染性疾病檢測中的應用

蔡鵬威

(福建醫科大學省立臨床醫學院福建省立醫院檢驗科，福建福州350001)

·檢驗與臨床·

中性粒細胞CD64定量檢測在感染性疾病檢測中的應用

蔡鵬威

(福建醫科大學省立臨床醫學院福建省立醫院檢驗科，福建福州350001)

目的探討中性粒細胞CD64定量檢測在感染性疾病檢測中的應用。方法選取382例ICU住院患者，將其分為非細菌感染組、局部感染組和膿毒血癥組，同期選取30例健康體檢，應用流式細胞儀檢測中性粒細胞CD64，同時檢測外周血白細胞計數(WBC)及中性粒細胞比例(NE%)、C反應蛋白(CRP)和降鈣素原(PCT)。結果局部感染組和膿毒血癥組的中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%均高于健康對照組及非細菌感染組(P＜0.05)，膿毒血癥組的中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%高于局部感染組(P＜0.05)，中性粒細胞CD64的ROC曲線下面積最大(0.903)，當其臨界值取1500 MESF時，敏感性為94.5%，特異性為90.6%。結論與PCT、CRP、WBC及NE%相比，中性粒細胞CD64可作為檢測和監測感染性疾病的敏感指標。

CD64；中性粒細胞；C反應蛋白；降鈣素原；感染性疾病；流式細胞術

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.025

感染性疾病是臨床最常見的疾病之一，也是導致ICU病人死亡的主要原因之一，而在臨床診療過程中，細菌感染和非細菌感染性疾病常依靠外周血白細胞計數(WBC)及中性粒細胞比例(NE%)、C反應蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)等實驗室檢查加以判斷。近年來，多項研究發現中性粒細胞CD64定量分析是早期診斷和鑒別細菌感染的可靠的敏感指標。本研究通過對本院重癥ICU 382例標本的中性粒細胞CD64進行定量分析，探討中性粒細胞CD64對細菌感染的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象選取本院2013年8月至2014年6月入院48 h內ICU住院患者為研究對象，共382例，依據臨床癥狀和血培養結果分為3組：⑴非細菌感染組123例，男75例，女48例，年齡19～68歲；⑵局部感染組174例，男100例，女74例，年齡16～70歲，平均年齡44.1±10.3歲；⑶膿毒血癥組85例，年齡20～73歲，平均年齡43.7±12.5歲。正常對照組為我院健康體檢者30例，男18名，女12名，年齡16～69歲，平均年齡40.7±10.5歲。

1.2 標本采集清晨采集空腹靜脈血4ml，其中2 ml于促凝管中，3000r/min離心10min，分離血清用于檢測CRP和PCT；采集2ml EDTA－K2抗凝靜脈血用于進行血常規和中性粒細胞CD64的測定。

1.3 儀器與試劑中性粒細胞CD64檢測使用美國BD FACS Calibur流式細胞儀；CRP檢測使用西門子公司BNⅡ全自動特定蛋白儀；血常規采用日本Sysmex公司XE 5000型血液分析儀進行分析，PCT檢測使用法國梅里埃公司的mini-VIDAS。QuantiBRITE PE標準微球和中性粒細胞CD64檢測試劑由美國BD公司生產；CRP檢測試劑為西門子公司配套試劑；血常規試劑為日本Sysmex公司配套產品，PCT為法國梅里埃公司配套試劑，都嚴格按照操作說明書操作。

1.4 中性粒細胞CD64的檢測方法QuantiBRITE PE標準微球是用PE標記使用的，當在同一臺流式細胞儀檢測QuantiBRITE PE標準微球后，因為已知每個抗體上和微球上標記PE熒光分子的數量，就可將FL2坐標軸上的熒光強度換算為每個細胞所結合PE分子的數量，故可通過每個細胞上PE熒光分子的數量而得出每個細胞結合抗體的數量，即單個細胞抗原結合數量(ABC)。

1.5 統計學方法所有數據采用SPSS 13.0統計軟件進行處理。結果以x±s表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。繪制受試者工作特征(ROC)曲線，計算感染指標的敏感性和特異性。

2 結果

2.1 非細菌感染組、局部感染組、膿毒血癥組及健康對照組中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%檢測結果見表1。

局部感染組和膿毒血癥組的中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%均高于健康對照組及非細菌感染組(P＜0.05)，膿毒血癥組的中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%高于局部感染組(P＜0.05)，非細菌感染組的WBC、NE%高于健康對照組(P＜0.05)。

2.2 繪制中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%評價感染性疾病的ROC曲線圖見圖1。

表1 非細菌感染組、局部感染組、膿毒血癥組及健康對照組中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%檢測結果s)

表1 非細菌感染組、局部感染組、膿毒血癥組及健康對照組中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%檢測結果s)

注：與健康對照組及非細菌感染組比較，*P＜0.05；非細菌感染組與健康對照組比較；**P＜0.05，膿毒血癥組組與局部感染組比較，▲P＜0.05。

組別n C D 6 4 / ( M E S F ) P C T / ( n g / m l ) C R P / ( m g / L ) W B C / ( 1 0 × 1 09/ L ) N E / ( % )健康對照組非細菌感染組局部感染組膿毒血癥組3 0 1 2 3 1 7 4 8 5 5 0 9 . 5 ± 2 8 4 . 2 5 2 5 . 5 ± 3 5 5 . 7 3 1 1 3 . 8 ± 3 7 1 0 . 7*4 8 5 4 . 9 ± 4 5 8 2 . 2*▲0 . 1 7 ± 0 . 2 6 0 . 2 1 ± 0 . 1 3 5 . 5 0 ± 2 6 . 6 7*1 3 . 8 9 ± 2 9 . 1 1*▲2 . 3 ± 1 . 7 3 4 . 8 ± 3 8 . 3 7 4 . 8 ± 6 6 . 3*1 3 2 . 3 ± 8 4 . 7*▲5 . 9 6 ± 1 . 9 1 9 . 9 5 ± 4 . 1 5**1 1 . 3 ± 5 . 7 8*1 3 . 9 ± 7 . 9 8*▲5 5 . 0 5 ± 2 . 2 7 6 . 2 ± 9 . 9**7 8 . 3 ± 1 2 . 8*8 3 . 3 ± 1 1 . 3*▲

圖1 中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%評價感染性疾病的ROC曲線圖

從ROC曲線圖中可以計算出中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC及NE%曲線下面積分別為0.903、0.896、0.816、0.618及0.677。

2.3 分別計算中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%評價感染性疾病的敏感性和特異性結果見表2。

表2 中性粒細胞CD64、PCT、CRP、WBC、NE%評價感染性疾病的敏感性和特異性

3 討論

感染性疾病可以分為細菌感染和非細菌感染，細菌感染是ICU病人常見的病因之一，也是ICU病人常見的并發癥之一。細菌培養是診斷細菌感染的金標準，但由于細菌培養檢測周期較長，敏感性較低，加之現在抗生素的廣泛使用，細菌培養的陽性率都比較低，因此，臨床迫切需要新的細菌感染檢測指標，CRP、PCT和中性粒細胞CD64先后應用于臨床，為細菌感染診斷提供了較好的實驗依據。

CRP是由肝細胞合成的，能與肺炎鏈球菌C多糖反應形成復合物的急性時相反應蛋白，半衰期為5～7h，CRP在感染后6～12h升高，48h左右達到高峰，炎癥消退后迅速下降，因此CRP水平與炎癥反應程度呈正相關，本研究顯示：膿毒血癥組和局部感染組的CRP高于健康對照組和非細菌感染組(P＜0.05)，而且膿毒血癥組的CRP也高于局部感染組(P＜0.05)。此外CRP不受性別、年齡、抗生素等其它因素影響，因此常作為細菌感染的診斷和療效判定的指標之一，雖然CRP敏感性較高，但特異性有限[1]。本研究顯示：當CRP的臨界值定為5 mg/ L時，敏感性為88.3%，高于WBC和NE%，卻低于PCT和中性粒細胞CD64；特異性為76.5%，僅高于WBC，卻低于NE%、PCT和中性粒細胞CD64，CRP的ROC曲線下面積為0.816，也比PCT和中性粒細胞CD64低，因此CRP作為細菌感染檢測的指標不如PCT和中性粒細胞CD64好。

PCT是降鈣素的前肽物質，是無激素活性的糖蛋白，由116個氨基酸組成，相對分子量為13× 103，PCT在甲狀腺C細胞中生成并裂解出降鈣素，正常人體含量極低。當機體受到非細菌感染時，體內的PCT不升高或僅輕度升高，但當機體受到細菌感染時，體內的PCT可迅速升高，而且感染程度越重，升高越明顯，其機制可能是細菌內毒素脂多糖或細胞因子等誘導體內甲狀腺外組織產生大量的PCT，因而，PCT是一種較為敏感和特異的細菌感染檢測指標[2-4]。本研究顯示：局部感染組和膿毒血癥組的PCT高于健康對照組及非細菌感染組(P＜0.05)，而且膿毒血癥組的PCT高于局部感染組(P＜0.05)，故PCT與細菌感染的程度呈正相關。PCT的ROC曲線下面積為0.896，僅次于中性粒細胞CD64，但優于CRP、WBC、NE%，其診斷的敏感性(89.2%)和特異性(87.3%)也較高，故PCT是一種不錯的細菌感染檢測指標，但目前PCT檢測的費用還比較高，限制了其應用。

CD64即IgG受體Fcγ RI，是Fc受體之一，Fc受體屬于免疫球蛋白超家族，分布于白細胞表面，它們參與先天及后天免疫應答。它們在吞噬細菌和免疫復合物的過程起著非常重要的作用。FcγR (CD64)Ⅰ為一種相對分子量為72000的跨膜糖蛋白，屬Ig超家族，是IgG高親和力受體，是介導體液免疫和細胞免疫的橋梁。正常生理情況下CD64表達于巨噬細胞、單核細胞和樹突狀細胞表面，中性粒細胞不表達或低表達。而當中性粒細胞受到微生物細胞壁成份(如：脂多糖、補體物質)和某些細胞因子(如：IFN-γ，TNF-α，IL-8，IL-12)刺激4～6h后，CD64表達就會增加，增加的程度與細胞因子刺激的強度相關，而且CD64的表達量與細菌感染的嚴重程度、預后及患者的死亡密切相關，同時CD64表達水平不受性別和年齡等因素影響[5-12]。因此，中性粒細胞CD64是細菌感染檢測的理想指標。本研究結果表明：局部感染組和膿毒血癥組的中性粒細胞CD64高于健康對照組及非細菌感染組(P＜0.05)，而且膿毒血癥組的中性粒細胞CD64高于局部感染組(P＜0.05)，故細菌感染的程度越重，中性粒細胞CD64表達量越高，而且中性粒細胞CD64的ROC曲線下面積最大，達到0.903，說明中性粒細胞CD64的診斷價值最高，加上中性粒細胞CD64的敏感性(94.5%)和特異性(90.6%)優于其它指標，所以中性粒細胞CD64是檢測細菌感染的最佳指標。

綜上所述，中性粒細胞CD64在細菌感染的檢測和監測中具有重要的作用，其ROC曲線下面積、敏感性和特異性均優于PCT、CRP、WBC和NE%。因此，對ICU患者進行中性粒細胞CD64檢測，能夠較早判斷和發現細菌感染，及時采取合理的治療措施，改善ICU患者的預后，也有助于防止因濫用抗生素而導致耐藥菌的產生。臨床上應將以上幾個項目進行聯合檢測，以提高陽性率，同時還需結合臨床表現綜合加以評價。由于所選病例均為ICU患者，故中性粒細胞CD64對臨床其它疾病患者的應用價值還需進一步研究。

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R446.62,R446.11+1

A

1674-1129(2014)06-0719-03

2014-08-06；

2014-09-19)