改良離心柱法檢測ALP-L3在原發性肝細胞癌診斷中的應用研究

肖九長，謝海燕，肖小惠

(贛州市人民醫院、南昌大學附屬贛州醫院檢驗科，江西贛州341000)

改良離心柱法檢測ALP-L3在原發性肝細胞癌診斷中的應用研究

肖九長，謝海燕，肖小惠

(贛州市人民醫院、南昌大學附屬贛州醫院檢驗科，江西贛州341000)

目的探討甲胎蛋白異質體(AFP-L3)在診斷原發性肝細胞癌中的臨床意義。方法選擇原發性肝細胞癌(HCC)患者117例、肝硬化患者46例、慢性肝炎患者58例，采用改良離心柱法分離血清AFP-L3，電化學發光法檢測甲胎蛋白(AFP)和AFP-L3，并計算AFP-L3與AFP含量比值[AFP-L3/AFP(%)]，以比值≥10%作為陽性判斷標準，分析AFP-L3(%)水平與原發性肝細胞癌的關系。結果HCC患者血清中AFP-L3(%)明顯高于其它肝病患者(P＜0.001)，靈敏度為83.8%；不同濃度AFP的HCC患者之間，AFP-L3(%)的濃度差異無統計學意義，但隨著AFP濃度的升高，AFP-L3的陽性率也逐慚升高。結論改良離心柱法檢測AFP-L3對HCC和良性肝病的診斷具有重要意義，尤其是在低濃度AFP的原發性肝細胞癌和良性肝病的鑒別診斷方面。

原發性肝細胞癌；甲胎蛋白異質體；改良離心柱法

原發性肝細胞癌(HCC)是我國常見惡性腫瘤之一，死亡率高，死亡率居惡性腫瘤的第二位，占全世界肝癌死亡人數的45%。HCC的實驗室診斷指標以AFP的特異性和敏感性最高，通常認為AFP大于400 ng/ml可以診斷為HCC，但陽性率約為64%[1]，而且部分肝炎、肝硬化、孕婦、轉移性肝癌等也可測出小量AFP，少數病例甚至大于400 ng/ml。AFP異質體或稱AFP亞型，為肝細胞癌所特有，本研究通過改良離心柱法分離AFP-L3，并用電化學發光法檢測221例原發性肝細胞癌、肝硬化、慢性肝炎患者的AFP及AFP-L3，以探討AFP-L3在HCC診斷及鑒別診斷中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料2011年12月至2013年6月的本院住院患者和門診患者，包括原發性肝細胞癌患者117例，確診符合國家衛計委《原發性肝細胞癌診療規范(2011年版)》的診斷標準，男77例，女40例，年齡31～74歲，平均55歲；肝硬化患者46例，男34例，女12例，年齡26～67歲，平均48歲；慢性肝炎患者58例，男41例，女17例，年齡24～62歲，平均43歲；肝硬化及慢性肝炎患者經臨床結合檢驗、影像、病理等進行診斷。另外，選擇本院健康體檢者40名，男30例、女10例，年齡20～58歲，排除心、肝、肺、腎功能異常。

1.2 標本采集采集受檢者空腹靜脈血3ml分離血清待檢。

1.3 檢測方法AFP-L3的分離采用改良微量離心柱法，試劑盒由北京熱景生物技術有限公司提供，分離AFP-L3時嚴格按照試劑盒中操作說明書進行。最后離心洗脫后獲得的AFP-L3及患者血清總AFP，使用羅氏公司Cobas e601電化學發光儀及該公司生產的配套試劑盒[國食藥監械(進)字2011第3401508]進行檢測，并計算AFP-L3占總AFP的百分比，以AFP-L3/AFP(%)≥10%作為AFP-L3異常升高標準。

1.4 統計學分析用SPSS11.5軟件進行統計分析，計量資料以(x±s)表示，計數資料χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組患者AFP-L3檢測結果原發性肝細胞癌組血清中AFP-L3(%)明顯高于肝硬化組和慢性肝炎組(P＜0.01)；原發性肝細胞癌組AFP-L3(%)陽性率明顯高于肝硬化組和慢性肝炎組(P＜0.001)；AFP-L3(%)診斷HCC的敏感性為83.8%，見表1。

2.2 原發性肝細胞癌患者不同AFP濃度的AFPL3測定結果比較見表2。

3 討論

甲胎蛋白是一種單鏈糖蛋白，在凝膠電泳中具有不同的遷移率，依其分子在糖鏈部分的不同亞結構，甲胎蛋白可分為AFP-L1、AFP-L2、AFPL3，這種分子結構上的差異可通過與外源性植物凝集素親和力的不同將其檢出。目前AFP-L3的檢測方法有免疫交叉電泳技術、親和印跡法、植物凝集素親和層析等，但上述方法由于技術要求較高、操作繁瑣、試劑昂貴等，限制了它們在臨床上的使用。本研究采用國產的微量凝柱法試劑，結合羅氏電化學發光檢測方法，可以快速、簡便、經濟地獲得AFP、AFP-L3的含量及AFP-L3與AFP比值。

表1 各組患者AFP-L3檢測結果比較

表1 各組患者AFP-L3檢測結果比較

注：與原發性肝細胞癌相比，*P<0.001。

組別總例數AFP-L3陽性例數陽性率(%)原發性肝細胞癌肝硬化慢性肝炎健康體檢者117 46 58 40 19.52±10.25 9.24±4.84*7.45±4.21*4.15±4.85*98 660 83.8 13.0*10.3*0

表2 原發性肝細胞癌患者不同AFP濃度的AFP-L3測定結果比較

表2 原發性肝細胞癌患者不同AFP濃度的AFP-L3測定結果比較

注：各組間比較，*P>0.05，**P<0.001。

組別(ng/ml)總例數AFP-L3陽性例數陽性率(%)≥400 200～400≤200合計66 28 23 117 19.94±11.74*18.26±10.69*17.25±9.76*66 21 11 98 100**75**47.8**

肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，在惡性腫瘤中的死亡率排第三，僅次于胃癌和肺癌，我國每年因患肝癌死亡的人數占全世界肝癌死亡人數的40%，是一種嚴重威脅人民生命健康的疾病[2]。肝癌起病隱匿，癌細胞形成到發展成有自覺癥狀，約需2年，在此期間，患者可無任何癥狀和體征，相當部分患者是在肝病隨訪或健康體檢的時候，通過影像法如B超、CT偶然發現的。患者一旦出現癥狀，大部分患者已到了肝癌的中晚期。

治療肝癌患者的關鍵是早發現、早診斷、早治療。AFP作為原發性肝細胞癌的診斷標志物，盡管在臨床上已應用多年，也得到了廣大臨床工作者的普遍認可，但它也存在著不足：肝炎、肝硬化等良性肝病患者及胃癌、肺癌、胰腺腫瘤等非HCC患者，AFP會升高；臨床上有30%～40%的HCC患者血清AFP含量在正常范圍內[3]。這給用AFP作為HCC患者的早期實驗室診斷帶來困難，從而延誤病情。

2005年，美國FDA批準將AFP-L3應用于HCC的診斷，并將10%作為診斷閾值，即使患者血清AFP只有輕微的升高但AFP-L3≥10%，也高度提示HCC發生的可能[4]。本結果顯示,以AFP-L3/ AFP(%)≥10%作為HCC的陽性診斷標準，其敏感性為83.8%，均值為19.9，HCC患者的AFP-L3均值及陽性率均顯著高于肝硬化組、慢性肝炎組，差別具有統計學意義，提示檢測AFP-L3有助于鑒別HCC與非HCC患者。

按不同的AFP濃度，將117例原發性肝細胞癌患者分成三組，分別檢測AFP-L3。由表2可見，當AFP≤200ng/ml時，AFP-L3的陽性率為47.8%；當AFP的濃度在200ng/ml及400ng/ml之間時，AFP-L3的陽性率為75%；當AFP濃度大于400ng/ ml時，AFP-L3的陽性率為100%，即在原發性肝細胞癌患者中，隨著AFP濃度的升高，AFP-L3的陽性率也逐慚升高，三者之間存在統計學差異，與胡敏華等[5]報道存在差異，可能是本研究AFP低濃度HCC患者的病例過少所致。不同AFP濃度HCC患者的AFP-L3濃度差異無統計學意義(P>0.05)，HCC患者的AFP-L3濃度與AFP濃度無相關性，因此，AFP-L3更適用于AFP低濃度陽性良、惡性肝病的鑒別診斷，與曹立等[6]報道一致。

文獻報道，AFP-L3陽性對HCC的正確預警率達94%，在臨床診斷、影像學檢查尚未發現肝癌特征性占位病變時，對AFP低濃度陽性病例進行AFP-L3檢測，可以早期預警肝癌的發生，使HCC患者的診斷可提前3～28個月[4，7]。

因此，作者認為臨床上檢測AFP-L3對于鑒別良惡性肝臟病變是很有幫助的，特別對于小肝癌的早期診斷及在低AFP含量肝病患者的鑒別診斷中，具有重要的臨床應用價值。

[1]唐菁娟.聯合檢測血清ALP，GGT和AFP對肝癌的診斷價值[J].實驗與檢驗醫學,2010,28(5):495.

[2]彭承宏,李松崗,劉穎斌,等.肝癌研究現狀[J].肝膽外科雜志,2001,9 (5):386.

[3]殷正豐.甲胎蛋白異質體作為肝癌標志物的臨床應用[J].實用腫瘤雜志,2004,19(1):1-4.

[4]李冰,范公忍,曹建彪.甲胎蛋自異質體對肝細胞癌早期診斷的臨床意義[J].醫學綜述,2012,18(19):3284-3286.

[5]胡敏華,陳燕,梁亞,等.新微量離心柱法測定甲胎蛋白異質體對原發性肝細胞癌診斷的價值(附297例分析)[J].福建醫藥雜志, 2009,31(4):95-96.

[6]曹立,孫華寶,敖琴芳,等.ROC曲線評價甲胎蛋白異質體對原發性肝細胞癌的診斷價值[J].實驗與檢驗醫學,2010,28(5):465-467.

[7]何蘭香,毛智趣,黃海深,等.AFP-L3對肝癌鑒別診斷的臨床價值[J].實驗與檢驗醫學,2013,31(3):258-259.

R735.7，R446.62

A

1674-1129(2014)05-0536-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.05.016

2014-06-03；

2014-06-30)

江西省贛州市科技局2011年指導性課題項目(編號：2011127)

肖久長，男，1969年9月生，學士學位，副主任技師，研究方向為臨床生物化學及腫瘤標志物。