56例復發性自然流產患者免疫治療的臨床特征觀察與分析

劉正愛

鄒城市婦幼保健院生殖科，山東 鄒城 273500

56例復發性自然流產患者免疫治療的臨床特征觀察與分析

劉正愛

鄒城市婦幼保健院生殖科，山東 鄒城 273500

目的觀察同種免疫型復發性自然流產（RSA）淋巴細胞主動免疫治療臨床效果。方法對我院不孕不育生殖中心就診治療900余例復發性自然流產（2～5次）患者進行臨床分類和病因篩查，對資料完整的患者進行病因分析。結果56例治療后再次妊娠34人，已有活產患者19人，轉陰后成功妊娠者34人，APLA陰性成功妊娠5人。結論淋巴細胞主動免疫治療，能促使封閉抗體轉陰并提高復發性流產患者再次妊娠保胎成功率。孕前孕后淋巴細胞主動免疫治療，保胎成功率高，孕后才做淋巴細胞主動免疫治療，保胎成功率較孕前免疫治療成功率明顯降低。重點篩查流產原因，綜合保胎治療可提高保胎成功率。

復發性自然流產；封閉抗體；淋巴細胞免疫治療

1 資料和方法

1.1 臨床資料

2011年1月～2013年8月，在鄒城市婦幼保健院不孕不育生殖中心就診的免疫治療復發性自然流產的患者500例，年齡28～42歲，其中56例APLA陰性患者采用淋巴細胞免疫療法進行血清封閉抗體的檢測。本中心不孕專科門診對同種免疫型復發性流產患者給予淋巴細胞免疫治療（LIT），所有患者均自愿接受治療并簽署知情同意書。

1.2 免疫治療前檢查

雙方檢查血常規、ABO及Rh血型，丙肝lgM、乙肝二對半，HIV、RPR，供血者檢查無異常方可做免疫治療。若供血者檢查異常，選用第三方供血。

1.3 實驗試劑

檢測試劑盒由中國醫學科學院生物醫學工程研究所灝洋生物聯合實驗室監制、天津市灝洋生物制品有限責任公司提供，按試劑盒操作說明進行操作。每次間隔2～3周注射1次，3次為一療程，治療過程中囑患者避孕，療程結束后，鼓勵患者在6個月內受孕，妊娠后每周1次，繼續治療2～3次。

操作簡便，結果方便易讀，檢測位點4個，靈敏度高，特異性好，結果可靠。

1.4 方法

1.4.1 準備10 ml移液管，標注患者姓名及編號，加人淋巴細胞分離液分別注入15ml無菌離心管，每管4 ml，共5管，與血液比為1∶1。

1.4.2 在無菌條件下抽取丈夫靜脈血30 ml，肝素抗凝（10∶1）。

1.4.3 分別吸取丈夫6 ml靜脈血，傾斜離心管沿管壁緩慢加在人淋巴分離液上，注意一定要緩慢加入，以免跟分離液混勻而致分界不清，影響分離效果。

1.4.4 離心。3 000轉/10 min。

1.4.5 提取淋巴細胞洗滌。離心結束后，用吸管吸取中間層，富含淋巴細胞的細胞轉至無菌試管中，并加無菌生理鹽水至8 ml，混勻。

1.4.6 離心。進行離心洗滌。棄上清，加生理鹽水反復洗滌混勻，3 000轉/10 min進行第二次離心洗滌。

1.4.7 重復洗滌3次，3 000轉/10 min。

1.4.8 徹底棄上清，留沉渣，加入生理鹽水2 ml于離心管內輕輕吹打均勻。將全部液體轉至另一無菌的5 ml離心管內。

1.4.9 計數淋巴細胞吸取5 μl混勻提取液于一潔凈的載玻片上，蓋上，22×22 mm蓋玻片。放置1 min，在顯微鏡下計數，總放大倍數為400倍，據計數結果調整淋巴細胞濃度為（20～60）108/ml，混勻備用[1]。

1.4.10 消毒接受免疫者用1 ml無菌針管皮內注射前臂6～8個小皮丘，盡量避開血管。

2 結果

2.1 患者治療一個周期后指標變化情況分析

研究中，分別在0周、1周、3周、5周時，采丈夫靜脈血30 ml通過內注射的方式將丈夫的淋巴細胞注入到妻子體內。

2.2 患者治療3個療程后轉陽率分析

詳見表1。

表1 3個療程后轉陽率結果

2.3 患者免疫治療后相關指標分析

轉陽后妊娠率56例再次妊娠34人，妊娠率60.7% （34/56），已有活產患者19人，占33.9%（19/56），轉陽后成功妊娠者34人，占87.2%，（34/39），APLA陰性成功妊娠5人，占12.8%（5/39）。

2.4 淋巴細胞注射副作用

注射淋巴細胞后均有程度不同的注射皮丘部位發紅、瘙癢或腫大，1例過敏。1例發生全身團塊狀蕁麻疹；首次注射淋巴細胞后一周，皮膚出現數個散在淤血點，口服抗過敏藥西替利嗪后好轉；第二次淋巴細胞注射后再次出現皮膚淤血點，較第一次淤血點明顯減少；第三次注射后未發生皮膚瘀斑，未發生血液傳染病感染。

表2 免疫治療后封閉抗體轉陽后妊娠結果

3 討論

3.1 復發性流產的病因比較復雜，有學者認為：HLA抗原基因多態性與復發性自然流產關系密切的HLA基因可能是免疫治療妊娠結局有價值的預測因子。復發性流產夫婦間白細胞抗原共容性大主要在HLA-A、HLA-B、HLADR、HLA-DQA1的位點[2]。

3.2 本研究中，接受治療的56名患者中，陰性者7人，占12.5%（7/56），APLA陰性成功妊娠者5人，占8.93%（5/56），這可能是因為主動免疫治療使這些患者誘發了由細胞免疫參與的免疫抑制，使封閉效應增強反應。

3.3 有明確病因者應盡快開展相應治療，綜上所述，對于復發性自然流產患者進行APLA的檢測是非常必要的。APLA陰性的患者應常規行淋巴細胞主動免疫治療，提高APLA的陽性率及再次妊娠的成功率，淋巴細胞主動免疫治療復發性自然流產安全有效。APLA水平變化的監測，對指導復發性自然流產患者妊娠及對再次妊娠的結局有良好的指導意義。

3.4 本研究對淋巴細胞主動免疫治療能促使封閉抗體轉陽并提高復發性流產患者再次妊娠保胎成功率。孕前孕后淋巴細胞主動免疫治療保胎成功率高，表明封閉抗體陽性對復發性自然流產的必要性，但本中心接受免疫治療的患者數相對較少，今后進一步對治療的患者進行分析觀察與研究，并對患者遠期安全性進行跟蹤觀察和分析，因此對免疫治療的遠期療效有待于今后工作中進行樣本長時間觀察，進一步驗證結果，以提高妊娠保胎成功率。

[1]林其德. 現代生殖免疫學[M]. 1版. 北京：人民衛生出版社，2006：157-173.

[2]李杰蘭, 馬衛軍. 主動免疫治療不明原因復發性自然流產的臨床分析[J]. 齊齊哈爾醫學院學報, 2012, 33(14): 1865-1866.

R271.9

B

1674-9308（2014）06-0035-02

10.3969/J.ISSN.1674-9308.2014.06.023