燈盞細(xì)辛藥材的薄層色譜鑒別

王彥青

鄭州市第八人民醫(yī)院藥劑科,河南鄭州 450000

燈盞細(xì)辛是一種傳統(tǒng)的中藥材，為菊科飛蓬屬短葶飛蓬的干燥全草，又名燈盞花，主要分布在我國(guó)的云南、廣西、貴州、四川等西南地區(qū)，其中有98%左右分布在云南[1]。燈盞花具有消炎止痛、祛風(fēng)除造詞濕、活血化瘀、驅(qū)寒解表、通經(jīng)活絡(luò)的作用，自20世紀(jì)70年代開始廣泛的應(yīng)用于臨床，主要用于冠心病、心絞痛、缺血性心腦血管疾病[2-3]。目前，燈盞花在老年糖尿病、癡呆等疾病的治療方面也得到了一定的肯定。隨著對(duì)燈盞細(xì)辛有效成分的不斷深入研究，發(fā)現(xiàn)除了黃酮類的野黃岑苷具有良好的藥效外，燈盞細(xì)辛中的咖啡酸酯類及酚酸類化合物也是不可忽視的活性成分，這些化合物不僅具有良好的抗氧化活性，同時(shí)還具有一定的擴(kuò)張血管和抑制血栓形成的作用，且活性與野黃芩苷相當(dāng)[4]。因此，全面評(píng)價(jià)燈盞細(xì)辛藥材質(zhì)量是一項(xiàng)非常有意義的工作[5]，為了有效鑒別燈盞細(xì)辛中的多種有效成分，該研究于2012年10月—2013年6月采用薄層色譜法鑒定此藥材的野黃岑苷、3,5-O-二咖啡酰奎寧酸、咖啡酸和1,3-O-二咖啡酰奎寧酸，以為其質(zhì)量控制及評(píng)價(jià)提供參考和依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

全自動(dòng)薄層鋪板器，超級(jí)循環(huán)水箱，臺(tái)式超聲波清洗器，1/10萬分析天平。

1.2 試藥

硅膠G薄層板；聚酰胺薄膜；3，5-O-二咖啡酰奎寧酸對(duì)照品、野黃芩苷對(duì)照品、1，3-O-二咖啡酰奎寧酸對(duì)照品、咖啡酸對(duì)照品、燈盞細(xì)辛對(duì)照藥材，燈盞細(xì)辛藥材，其他所用試劑均為分析純。

2 方法

2.1. 對(duì)照品溶液的配制

對(duì)照品溶液1：稱取3，5- O-二咖啡酰奎寧酸對(duì)照品5 mg，置于10 mL的容量瓶中，加適量甲醇溶解后，繼續(xù)加甲醇定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液1，于冰箱中冷藏保存，備用。

對(duì)照品溶液2：稱取野黃芩苷對(duì)照品、咖啡酸對(duì)照品、1，3-O-二咖啡酰奎寧酸對(duì)照品各10 mg，置于5 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解后，繼續(xù)加甲醇定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液2，于冰箱中冷藏保存，備用。

2.2 供試品溶液的配制

供試品溶液1：取燈盞細(xì)辛粉末0.5 g，加甲醇10 mL，加熱回流30 min，濾過，蒸干濾液，將3滴鹽酸加入到殘?jiān)校賹? mL乙酸乙酯加入其中，超聲處理5 min，濾過，蒸干濾液，加1 mL甲醇溶解殘?jiān)吹霉┰嚻啡芤?。

供試品溶液2：取燈盞細(xì)辛粉末1 g，加0.2%的碳酸氫鈉溶液10 m L，浸泡過夜，濾過，用稀硫酸調(diào)濾液pH至3.0， 將無水甲醇20 mL加入，加熱回流30 min，濾過，蒸干濾液，加10 mL 水溶解殘?jiān)? mL正丁醇振搖提取，蒸干正丁醇液，加1 mL甲醇溶解殘?jiān)吹霉┰嚻啡芤?。

2.3 對(duì)照藥材溶液的配制

對(duì)照藥材溶液1：取燈盞細(xì)辛對(duì)照藥材0.5 g，按供試品溶液1的方法制備，即得。

對(duì)照藥材溶液2：取燈盞細(xì)辛對(duì)照藥材1.0 g，按供試品溶液2的方法制備，即得。

2.4 陰性對(duì)照品溶液的配制

不加供試品，分別按照供試品溶液1和2的方法制備，得陰性對(duì)照品溶液1和2。

2.5 薄層色譜的點(diǎn)樣、展開及處理[6]

鑒別一：分別精密量取上述供試品溶液1以及對(duì)照品藥材溶液1各5 μL，對(duì)照品溶液1取2 μL，陰性對(duì)照品溶液1取5 μL，點(diǎn)在同一硅膠薄層板上，展開劑為甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1∶7∶1），展距 8 cm，取出后，晾干。噴上 1% 的 Fecl3乙醇溶液，在日光下檢視，見圖1。

圖1 薄層色譜鑒別

鑒別二：吸取上述對(duì)照藥材溶液2、供試品溶液2各2 μL，陰性對(duì)照品溶液2取2 μL，對(duì)照品溶液2取1 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，展開劑為冰醋酸，展距8 cm，取出后，晾干。噴上1%的Fecl3乙醇溶液，在日光下檢視，見圖2。

圖2 薄層色譜鑒別二

3 結(jié)果

鑒別一：由圖1可以看出，在供試品溶液的薄層色譜圖中，于對(duì)照品溶液或?qū)φ账幉娜芤旱纳V圖相應(yīng)的位置上，均存在相同顏色的斑點(diǎn)，且在相應(yīng)的位置上陰性對(duì)照品溶液無斑點(diǎn)。

鑒別二：由圖2可知，在供試品溶液的薄層色譜圖中，于對(duì)照品溶液或?qū)φ账幉娜芤旱纳V圖相應(yīng)的位置上，均存在相同顏色的斑點(diǎn)，且在相應(yīng)位置上陰性對(duì)照品溶液無斑點(diǎn)。

4 討論

在該研究的薄層色譜鑒別預(yù)實(shí)驗(yàn)中，曾將按樣品加三氯甲烷后的溶液、甲醇溶解的溶液以及樣品直接回流獲得的溶液進(jìn)行索氏提取，加熱回流該3種提取液直至無綠色，然后除去三氯甲烷溶液，揮干溶劑，干燥藥渣，并連同濾紙一起轉(zhuǎn)移到具塞的錐形瓶中，加入30 mL甲醇并水浴回流1.5 h，過濾后，加2 mL甲醇使殘?jiān)芙猓瑢@得的溶液作為供試品溶液進(jìn)行薄層色譜分析，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)與對(duì)照品溶液相對(duì)應(yīng)位置上的斑點(diǎn)。

除此之外，在進(jìn)行鑒別一時(shí)，曾以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（2∶7∶1）為展開劑，但結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離效果不夠明顯，故將展開劑比例調(diào)整為甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1∶7∶1）；預(yù)實(shí)驗(yàn)中，供試品溶液和對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量分別為10 μL和5 μL，發(fā)現(xiàn)點(diǎn)樣量為5 μL時(shí)，分離效果好且斑點(diǎn)清晰，因此最終確定供試品及對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量為5 μL，而3，5-O-二咖啡酰奎寧酸對(duì)照品溶液的點(diǎn)樣量在4和2 μL時(shí)，發(fā)現(xiàn)2 μL更合適，所以最終確定其點(diǎn)樣量為2 μL。

而鑒別二時(shí)，供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液的初始點(diǎn)樣量均為0.5 μL，但結(jié)果發(fā)現(xiàn)斑點(diǎn)顏色較淺，不易區(qū)分。經(jīng)試驗(yàn)后，供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液的點(diǎn)樣量最終分別確定為2 μL、2 μL和1 μL。同時(shí)在顯色時(shí)，由于對(duì)照品溶液2中1，3-O-二咖啡酰奎寧酸受溫度的影響較大，其在較低溫時(shí)不顯色，因此可將其放置烘箱中加熱 1 min 后再進(jìn)行顯色，且在進(jìn)行鑒別二的過程中，應(yīng)注意使展開后的薄層板保持干透。

綜上，該研究通過采用多種提取方法將燈盞細(xì)辛的有效成分 提取分離并鑒別，操作可行，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，可作為燈盞細(xì)辛藥材的定性鑒別方法。

[1] 劉勤, 張紅宇,王璐.燈盞花藥理作用研究進(jìn)展[J].云南中醫(yī)中藥 雜志,2013, 34(2): 61-64.

[2] 劉俊.中藥飲片調(diào)劑中審方的作用分析與改進(jìn)策略[J].中醫(yī)臨床研究,2012, 4(2): 44.

[3] 甄君,孔梅,李振東,等.燈盞細(xì)辛注射液對(duì)急性腦梗死患者血清S100B蛋白表達(dá)及神經(jīng)功能恢復(fù)的影響[J].中藥材,2011,34(10):1642-1644.

[4] 鄭林,喬希,黃勇,等.貴州產(chǎn)燈盞細(xì)辛藥材超高效液相指紋圖譜研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2011, 22(5): 1117-1119.

[5] 梅艷, 馮春, 李俊,等.HPLC 同時(shí)測(cè)定燈盞細(xì)辛合劑中 4 種有效成分的含量[J].中藥材, 2013(4): 665-667.

[6] 于玲,邱鵬.燈盞細(xì)辛藥材的薄層色譜鑒別[J].中國(guó)藥業(yè), 2011,20(16):75-76.