中晚期結直腸癌化療中ATP-TCA技術的應用效果觀察

孔玉蓮 李肇彥 孔金燕 楊會燕 劉 莉 楊宏煜

河南省鄧州市人民醫院，河南鄧州 474150

近幾年來，結腸癌的發病率在逐漸增加，并且發病年齡也逐漸趨向老齡化，發病多在60～70歲，男性多于女性。結腸癌的治療一直是一個具有挑戰性的臨床問題，據相關文獻研究[1]，手術后進行化療能夠延長患者的生存期，提高生活質量。為探討分析中晚期結直腸癌化療中ATP-TCA技術的應用效果,該研究選取該院自2009年3月—2013年3月這4年以來收治的100例中晚期結直腸癌患者標本進行ATP-TCA技術體外檢測，根據檢測結果指導患者臨床化療，取得了顯著效果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的100例中晚期結直腸癌患者標本，所有患者均經過電子結腸鏡以及臨床病理診斷后進行手術治療。其中男性患者有54例，女性患者有46例，年齡范圍為63～79歲，平均年齡為(71±8)歲。其中高分化腺癌有17例，中分化腺癌有18例，低分化腺癌有37例，未分化癌15例，管狀腺癌有8例，粘液腺癌有5例。所有患者沒有嚴重的心、腎以及肝功能不全現象，沒有腸梗阻，預計生存期＞3個月，血小板大于100×109/L,白細胞大于4×109/L。

1.2 抗癌藥物

所有抗癌藥物均在該院臨床使用，主要包括氟尿嘧啶(5-FU)、奧沙利鉑(L-OHP)、絲裂霉素(MMC)以及伊立替康(SN-38)等，其中奧沙利鉑主要采用糖水稀釋，其余藥物采用生理鹽水溶解稀釋，在-20℃的溫度下保存備用。

1.3 檢測方法

所有患者取新鮮腫瘤組織之后侵入到裝有培養液的無菌液瓶中，進行侵泡15 min，然后剪成大小為0.6～1 mm的3個碎塊，將腫瘤組織轉移到含有組織消化液的離心管中，放置37℃的孵育箱中進行孵育2～3 h，每隔15～30 min震蕩1次，充分消化后，采用160目篩網濾得單細胞懸液，然后加入25 mL培養基，混勻，400 g離心10 min，棄上清。若有明顯紅細胞沉淀，則需要進行去除紅細胞的操作，最后將細胞濃度調整為3×109/mL-4×109/m L.

將培養板置于37℃、5%的二氧化碳飽和溫度的細胞培養箱內，培養5 d，然后每孔加入50 μL的ATP提取液，吸出50 μL的上清液于檢測板中，每孔加入50 μL的TAP熒光素-熒光酶，震蕩10 s，采用熒光測定儀自帶分析軟件計算各個測試濃度抑制率以及各種藥物的IC50(抑制50%腫瘤細胞生長藥物濃度)和IC90(抑制90%腫瘤細胞生長藥物濃度)。

1.4 統計方法

采用SPSS 13.0統計學軟件對數據進行分析，其中檢測后與標準樣品采用t檢驗，臨床治療效果采用χ2檢驗。當P＜0.05，表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 結直腸癌細胞對各種抗癌藥物的敏感度

100例結腸癌組織標本中有2例因為細菌污染而放棄，實驗的可評價率為98%。5-FU、L-OHP、MMC以及SN-38體外抗敏度之間沒有明顯的差異，不具有差異統計學意義(P＞0.05)，5-FU+ L-OHP、5-FU+MMC以及5-FU+SN-38體外抗敏度之間也沒有明顯的差異，不具有差異統計學意義(P＞0.05)，4組單藥與3組聯合藥物在體外抗敏度上有著明顯的差異，具有差異統計學意義(P＜0.05)。

2.2 ATP-TCA檢測結果與近期療效之間的關系

根據ATP-TCA檢測結果指導化療，結果表明98例結腸癌患者中有效例數達到59例(60.20%)，ATP-TCA總預測準確率為64.29%(63/98)，陽性符合率為、54.08%(53/98)。

3 討論

結腸癌作為常見的消化道惡性腫瘤，其治療一直以來是臨床中具有挑戰性的問題。目前，隨著ATP生物熒光法的發展，在腫瘤化療藥物敏感性檢測中有著重要作用，其檢測原理為當細胞受損時，ATP合成下降，細胞死亡時，ATP迅速水解消失，然后通過測定細胞內源性ATP的含量，就能夠反映出細胞活性以及細胞數量[2]。國外學者已經對ATP-TCA檢測法進行了多方面研究，并且在一定程度上也提高了臨床治療的可行性[3]。據我國文獻報道[4]，由于腫瘤的異質性應該對結腸癌患者進行ATP腫瘤化療藥物的敏感性分析實驗，有利于指導患者后期化療。

表1 98例結腸癌患者體外抗癌藥物敏感度比較

在該研究中，所使用的抗癌藥物主要有氟尿嘧啶(5-FU)、奧沙利鉑(L-OHP)、絲裂霉素(MMC)以及伊立替康(SN-38)，通過藥物敏感度實驗表明，結腸癌細胞對3組聯合藥物的敏感度并沒有明顯的差異，差異無統計學意義(P＜0.05)。3組聯合藥物的敏感度與4組單藥物有著明顯的差異，并且，使用5-FU+L-OHP藥物的敏感度最高，達到55.10%，與相關文獻報道相一致[5-6]。由于腫瘤的異質性存在不同，就致使不同腫瘤患者對于同一化療藥物的敏感性就不同，因此，必須建立個性化治療方案，以免出現藥物導致的不良反應現象[7]。應采用ATP-TCA檢測法對常用化療藥物的敏感性以及耐藥性進行提前檢測，從而為臨床化療提供一定的依據。

綜上所述，采用ATP生物熒光體外藥敏檢測法能夠有效的檢測化療藥物的敏感性，指導中晚期結腸癌患者化療有著重要價值，值得臨床推廣應用。

[1] 金啟成，楊薏帆，閆涵.化學藥物治療及其聯合靶向治療對中國人群晚期結直腸癌療效與安全性的Meta分析[J].國際病理科學與臨床雜志，2013(1)：45-46.

[2] Cho YB，Lee WY，Song SY，et aL.In vitro chem0sensitivity based on depth of invasion in advanced colorectal cancer using ATPbased chemotherapy response assay(ATP—CRA)[J].Eur J Surg Oncol,2009,35(9)：951-956.

[3] 蔣松琪，何松，江曉暉.ATP生物熒光體外藥敏檢測在中晚期結直腸癌化療藥物篩選中的應用[J].臨床腫瘤學雜志,2011(6)：56-57.

[4] 吳學勇，謝芳，張正華.熱療同CapeOx化療治療晚期結直腸癌臨床研究[J].中國癌癥雜志,2009(3)：1023-1024.

[5] 劉天舟，王瑞.結直腸癌患者血清中IGF-1、MMP-7和IGFBP-3水平分析[J].鄭州大學學報(醫學版),2011(5)：45-47.

[6] 盧星榕，李紹堂，池畔.結直腸癌并同時性肝轉移化療敏感預測模型的建立[J].中華實驗外科雜志,2013(7)：120-122.

[7] 郭洪斌，劉意，郭春芳，等.ATP生物熒光法體外藥敏試驗在結腸癌化療中的臨床應用[J].中國老年學雜志,2008,28(1)：41-43.