一起香菇菌棒品種混雜事故的鑒定分析

宋小亞 劉 昆 曾凡清 鄭巧平

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一起香菇菌棒品種混雜事故的鑒定分析

宋小亞 劉 昆 曾凡清 鄭巧平

（麗水市農業科學研究院，浙江 麗水 323000）

菌種質量；拮抗試驗；分子標記；成因

香菇是麗水市食用菌產業的主導產品，菌種質量的好壞直接關系到香菇產業的是否可持續健康發展。近年來由菌種質量問題引發的生產事故時有發生。由于菌種無性繁殖的特點，食用菌產業有“一支母種影響一個食用菌產業”的說法，種源的重要性不言而喻。

2012年5月，麗水市某香菇產區菇農在生產過程中發現菌棒有易斷的現象，與往年有明顯的不同。經調研發現，部分香菇菌棒有一兩條甚至三條拮抗線，菌棒在拮抗線部位容易斷裂，疑似有不同品種的香菇菌種混雜。筆者選取了典型的有三條拮抗線的菌棒進行試驗研究，探究其成因，為有針對性地開展后期栽培管理提供技術支撐，以期在今后生產中避免或減少出現類似的生產事故。

1 試驗材料和方法

1.1 試驗材料 選取有4個接種孔、3條拮抗線的香菇菌棒。以拮抗線為界劃分為4個樣品，取各樣品中間部位進行菌株分離。自袋口開始，4個分離菌株依次編號為A、B、C、D。菌棒、拮抗線及分離部位如圖1所示。依據調研情況，以事故發生地菇農主栽的高溫品種香菇931和香菇9319為對照菌株。

圖1 菌株分離示意圖

1.2 試驗方法

（1）拮抗試驗。①在PDA平板培養基上接種菌株A、B、C、D，進行培養，觀察各菌株菌落交界處是否產生拮抗反應。各菌株交換位置重復驗證。②在PDA平板培養基上接種菌株A、B、C、D于對照菌株周圍進行培養，觀察各菌株與對照菌株菌落交界處是否產生拮抗反應。培養條件、拮抗反應的觀察和判斷方法參照國家農業行業標準NY/T 1845-2010 食用菌菌種區別性鑒定拮抗反應［1］。

（2）菌種真實性鑒定。通過ISSR和RAPD兩種分子標記對菌株A、B、C、D及對照菌株香菇931和9319進行遺傳分析，作出菌株真實性鑒定。鑒別4個分離菌株是否一致，以及與對照菌株之間的關系。菌絲體培養、DNA模板制備、引物、反應體系、反應條件、PCR產物的電泳檢測、數據記錄及結果分析方法，分別參照國家農業行業標準NY/T 1730-2009 食用菌菌種真實性鑒定 ISSR法［2］和NY/T 1743-2009 食用菌菌種真實性鑒定 RAPD法［3］。

2 試驗結果

2.1 拮抗試驗 如圖2所示，分離菌株A與C、B與D菌落兩兩之間無拮抗線；A與B、B與C、C與D、D與A菌落交界處菌絲隆起，表現出典型的拮抗反應，說明菌株A與B、C與D兩兩之間應為不同品種。A與C、B與D兩兩之間可能為同一品種。

圖2 拮抗試驗1

圖3 拮抗試驗2

如圖3所示，分離菌株A、C與對照菌株香菇931之間無拮抗反應，而與對照菌株香菇9319之間有明顯的拮抗反應；分離菌株B、D與對照菌株香菇9319之間無拮抗反應，而與對照菌株香菇931之間有明顯的拮抗反應。由此可知，菌株A、C和香菇931可能為同一品種，而菌株B、D和香菇9319可能為同一品種。

2.2 菌株真實性鑒定 從ISSR標記對各菌株的擴增結果（圖4）可以發現，菌株A、C與香菇931（CK1）的DNA擴增條帶高度一致，菌株B、D與香菇9319（CK2）的DNA擴增條帶高度一致；菌株A、C、香菇931與菌株B、D、香菇9319的電泳譜帶存在明顯差異。由此說明，菌株A、C與香菇931的遺傳相似性極高，而菌株B、D與香菇9319的遺傳相似性極高。

圖4 菌株ISSR標記圖譜（CK為空白對照，CK1為香菇931，CK2為香菇9319）

從RAPD標記得到的分析結果與ISSR標記一致。

綜合拮抗試驗和菌株真實性鑒定試驗的分析結果可以判斷，分離菌株A、C與香菇931應為同一品種，菌株B、D與香菇9319應為同一品種。由此認定，該菌棒上的4個接種孔應為香菇931和9319間隔接種，發菌之后由于交界部位菌絲體互相不親和而產生拮抗，因此出現了3條拮抗線。

3 小結與討論

試驗表明，問題菌棒混雜了香菇931和9319兩個品種。對同批次菌棒的抽樣試驗發現兩種情況，一種為同一菌棒接種同一個品種，結果表現為沒有拮抗線，另一種為同一菌棒四個接種孔接種了上述兩個品種，結果表現為菌絲交界處出現一到三條拮抗線，且部位不一。經調研發現，菇農在開放式接種過程中普遍采用一人打穴兩人接種的協作模式，如果兩人所拿菌種為同一品種，則菌棒不表現拮抗，如果非同一品種，則視兩人接種速度以及交叉或順序接入種穴情況，菌棒培養后出現一到三條拮抗線。

一般來說，因錯種引發的香菇生產問題不會導致毫無收益，一旦出現，應根據菌棒表現進行初步甄別篩選，技術人員加強后期栽培技術指導，依據不同品種的特性進行分類出菇管理，盡量提高香菇產量和收益，將損失降到最低限度。

目前，麗水市部分香菇主栽品種名稱較為相似，如931、939和9319，808和868等，一不小心，菌種標記就很容易混淆，建議育種單位在品種命名時予以區分；同時，菌種企業在菌種保藏和生產過程中做好標記、分類存放，并開展菌種預檢送檢工作，在生產季節前對食用菌菌種質量進行檢測鑒別，以保證所用種源的質量，盡量規避可控風險，預防菌種事故的發生，為食用菌產業健康發展提供保障。

[1] NY/T 1845-2010 食用菌菌種區別性鑒定拮抗反應. 中國農業出版社：中華人民共和國農業行業標準.

[2] NY/T 1730-2009 食用菌菌種真實性鑒定 ISSR法. 中國農業出版社：中華人民共和國農業行業標準.

[3] NY/T 1743-2009 食用菌菌種真實性鑒定 RAPD法. 中國農業出版社：中華人民共和國農業行業標準.

S646.1

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2095-0934（2014）01-043-02