HPLC法測(cè)定氟他胺片含量的不確定度分析

李 靜，朱靜毅，聞琍毓

（揚(yáng)州市藥品檢驗(yàn)所，江蘇揚(yáng)州225009）

HPLC法測(cè)定氟他胺片含量的不確定度分析

李 靜，朱靜毅，聞琍毓

（揚(yáng)州市藥品檢驗(yàn)所，江蘇揚(yáng)州225009）

目的建立高效液相色譜法測(cè)定氟他胺片含量的不確定度分析方法。方法通過建立高效液相色譜法含量測(cè)定法的數(shù)學(xué)模型，找出影響不確定度的因素并對(duì)各個(gè)不確定度分量進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果計(jì)算各變量的不確定度，由此計(jì)算合成不確定度，最終給出測(cè)定結(jié)果的擴(kuò)展不確定度。結(jié)論建立的方法可用于高效液相色譜法測(cè)定藥物含量的不確定度分析。

不確定度；高效液相色譜法；含量測(cè)定；氟他胺

測(cè)量不確定度是“表征合理地賦予被測(cè)量值的分散性，與測(cè)量結(jié)果相關(guān)聯(lián)的參數(shù)”，它是被測(cè)量客觀值在某一量值范圍內(nèi)的一個(gè)評(píng)定，是對(duì)測(cè)量結(jié)果質(zhì)量和水平的定量表征。不確定度越小，測(cè)量結(jié)果的質(zhì)量越高，使用價(jià)值越大。

本文根據(jù)《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》中有關(guān)規(guī)定［1］，并參考《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》［2］，采用HPLC法測(cè)定氟他胺片的含量，以期找出影響不確定度的因素，對(duì)不確定度進(jìn)行評(píng)估，為評(píng)價(jià)檢測(cè)報(bào)告提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC－20AD高效液相色譜儀，SPD－10A紫外檢測(cè)器，LC Solution化學(xué)工作站；瑞士Mettler公司AG135型電子分析天平。

1.2 試藥 氟他胺對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定研究院，批號(hào)：100598－200601，含量測(cè)定用，使用前不需干燥處理）；氟他胺片（上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司，批號(hào)：130303，規(guī)格：0.25 g）；甲醇為色譜純，水為純化水。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Extend－C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－水（60∶40）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：30℃；流速：1.00 mL·min－1；進(jìn)樣量：20μL。理論板數(shù)按氟他胺峰計(jì)不低于2 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取氟他胺對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，振搖使氟他胺溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于氟他胺0.1 g），置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，振搖使氟他胺溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 含量測(cè)定結(jié)果 氟他胺片含量為標(biāo)示量的98.3%。

3 不確定度的評(píng)估

3.1 建立數(shù)學(xué)模型含量計(jì)算公式為：

式中：Q：氟他胺片標(biāo)示百分含量（%）；Ay：供試品溶液的峰面積；Ad：對(duì)照品溶液的峰面積；Wd：對(duì)照品稱樣量（mg）；Wy：供試品稱樣量（g）；P：對(duì)照品的純度；Vd：對(duì)照品的稀釋體積（mL）；Vy1：供試品的初次稀釋體積（mL）；Vy2：供試品稀釋時(shí)移液管取樣體積（mL）；Vy3：供試品的末次稀釋體積（mL）；ˉW：供試品的平均片重（g）；0.25：供試品的規(guī)格（g）；1 000：由g轉(zhuǎn)化為mg的換算系數(shù)。

3.2 不確定度分量來源的分析（因果圖）

3.3 計(jì)算各分量的不確定度

3.3.1 對(duì)照品純度引起的相對(duì)不確定度urel（P）氟他胺對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定研究院提供，使用前不需干燥處理，純度為100%，由于目前尚未給出不確定度，暫假定其分散區(qū)間的半寬度α＝0.25%，按矩形分布計(jì)算，取包含因子，則

3.3.2 對(duì)照品質(zhì)量引起的相對(duì)不確定度urel（Wd）

主要有兩個(gè)來源：第一，天平校準(zhǔn)的不確定度。依據(jù)說明書，校準(zhǔn)的線性為±0.03 mg，按矩形分布計(jì)算，取包含因子對(duì)照品取樣量為9.59 mg，則相對(duì)不確定度第二，天平稱量重復(fù)性的不確定度。天平說明書中標(biāo)明u（m）＝0.02 mg，則10－3。故對(duì)照品質(zhì)量引起的相對(duì)不確定度urel（Wd）

3.3.3 對(duì)照品稀釋引起的相對(duì)不確定度urel（Vd）對(duì)照品溶液由對(duì)照品稀釋而成，玻璃儀器引入的不確定度應(yīng)計(jì)算在內(nèi)。第一，容量瓶體積校準(zhǔn)的不確定度。根據(jù)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定［3］，A級(jí)100 mL容量瓶的容量允差為±0.10 mL，按矩形分布計(jì)算，取包含因子10－4。第二，試驗(yàn)溫度與校準(zhǔn)溫度的差異。由于本試驗(yàn)溫度為20℃，與校準(zhǔn)溫度相同，所以此項(xiàng)可忽略。綜上對(duì)照品稀釋引起的相對(duì)不確定度urel（Vd）＝5.77×10－4。

3.3.4 對(duì)照品溶液色譜峰面積的相對(duì)不確定度urel（Ad） 色譜峰面積的不確定度主要由峰面積重復(fù)性和儀器環(huán)境、進(jìn)樣體積等因素的不確定度共同引起。由于對(duì)照品與供試品采用相同的進(jìn)樣條件，儀器環(huán)境、進(jìn)樣體積等因素引起的不確定度可相互抵消，所以此項(xiàng)可忽略不計(jì)。故對(duì)照品溶液峰面積的不確定度主要由峰面積重復(fù)性引起。

本次試驗(yàn)中，對(duì)照品溶液5次進(jìn)樣重復(fù)測(cè)量的峰面積為：2 382 732、2 389 022、2 384 930、2 381 065、2 382 417＝2 384 033，根據(jù)貝賽爾公式計(jì)算：s＝，則對(duì)照品溶液色譜峰面積的相對(duì)不確定度

3.3.5 平均片重引起的相對(duì)不確定度urel） 取供試品10片，精密稱定，求得總重為6.686 6 g，平均片重ˉW＝0.668 7 g／片，不確定度分析同“3.3.2”項(xiàng)下。由天平校準(zhǔn)引起的不確定度：urel（）1＝，由天平稱量重復(fù)性引起的不確定度2.99×10－6。故平均片重引起的相對(duì)不確定度urel

3.3.6 供試品稱量引起的相對(duì)不確定度urel（Wy）

3.3.7 供試品稀釋引起的相對(duì)不確定度urel（Vy）不確定度分析同“3.3.3”項(xiàng)下。因試驗(yàn)溫度與玻璃儀器的校準(zhǔn)溫度相同，溫度引起的不確定度可忽略不計(jì)。根據(jù)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定［3］，A級(jí)100 mL容量瓶的容量允差為±0.10 mL，A級(jí)50 mL容量瓶的容量允差為±0.05 mL，A級(jí)5 mL移液管的容量允差為±0.015 mL，按矩形分布計(jì)算，取包含因子k則供試品稀釋引起的相對(duì)不確定度。

3.3.8 供試品溶液色譜峰面積的相對(duì)不確定度urel（Ay） 供試品溶液的色譜峰面積采用雙樣兩平行進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定的結(jié)果用極差法計(jì)算，記錄雙樣測(cè)量峰面積為：2 486 485、2 485 957，2 457 573、

取n＝2時(shí)的極差系數(shù)C＝1.13，則供試品溶液色譜峰面積的相對(duì)不確定度。

3.4 計(jì)算合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度ucrel（Q）

3.5 給出擴(kuò)展不確定度U（Q） 實(shí)驗(yàn)結(jié)果一般用擴(kuò)展不確定度表示，取包含因子k＝2（置信概率約95%），則含量測(cè)定擴(kuò)展不確定度U（Q）＝2× 0.43%＝0.9%。含量測(cè)定結(jié)果可表示為Q±U（Q）：98.3%±0.9%，k＝2（95%的置信區(qū)間），即氟他胺片的含量測(cè)定結(jié)果出現(xiàn)在98.3%±0.9%區(qū)間的概率為95%。

4 討論

不確定度的測(cè)量是評(píng)定測(cè)量結(jié)果可信度的依據(jù)，對(duì)于評(píng)價(jià)分析方法、評(píng)定實(shí)驗(yàn)室及分析測(cè)試人員的技術(shù)水平和準(zhǔn)確判定藥品質(zhì)量都具有重要意義。

在評(píng)定不確定度時(shí)，應(yīng)盡量考慮到產(chǎn)生不確定度的所有來源，因?yàn)楹铣刹淮_定度的數(shù)值幾乎完全取決于重要的不確定度分量。由上述評(píng)估過程可知，天平的稱量和玻璃儀器的校準(zhǔn)是分析結(jié)果產(chǎn)生不確定度的主要原因。

本文建立的測(cè)量不確定度評(píng)定方法，可以為其他藥品高效液相含量測(cè)定結(jié)果不確定度的評(píng)定提供參考。

［1］國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.測(cè)量不確定度評(píng)定與表示（JJF1059.1－2012）［S］.北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2012.

［2］中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南［S］.北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2006.

［3］國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.常用玻璃量器檢定規(guī)程（JJG196－2006）［S］.北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2006.

Uncertainty analysis on determ ination of Flutam ide Tablets by HPLC

LIJing，ZHU Jing-yi，WEN Li-yu
（Yangzhou Institute for Drug Control，Yangzhou 225009，China）

Ob jectiveTo establish amethod for uncertainty analysis on determination of Flutamide Tablets by HPLC.MethodsA mathematic model was established by HPLC to identify the influence factors impacting uncertainty and each component of uncertainty was also evaluated.ResultsEach component of uncertainty was calculated by analyzing the various variable parameters in the procedure，the combined uncertainty and expanded uncertainty were finally obtained.ConclusionThismethod can be used for the uncertainty analysis of determination ofmedicines by HPLC.

Uncertainty；HPLC；Determination；Flutamide

R927.1

A

2095－5375（2014）05－0269－003

李靜，女，研究方向：藥品檢驗(yàn)，E－mail：lijing320323＠163.com