HPLC法同時測定腹瀉康片中秦皮甲素和秦皮乙素的含量

宋 純

（湘潭市中心醫院，湖南湘潭411100）

HPLC法同時測定腹瀉康片中秦皮甲素和秦皮乙素的含量

宋 純

（湘潭市中心醫院，湖南湘潭411100）

目的建立同時測定腹瀉康片中秦皮甲素和秦皮乙素含量的方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱：Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：乙腈－0.1%磷酸（8∶92）；檢測波長：334 nm；流速：1 mL·min－1；柱溫：30℃。結果秦皮甲素線性范圍為47.2～472 ng，r＝0.999 0，秦皮乙素線性范圍為45.6～456 ng，r＝0.999 2，秦皮甲素和秦皮乙素平均加樣回收率分別為101.09%和100.51%。結論本方法簡便、準確、可靠，適用于腹瀉康片中秦皮甲素和秦皮乙素的質量控制。

高效液相色譜法；腹瀉康片；秦皮甲素；秦皮乙素

隨著社會生活節奏的加快，飲食失調和不潔引起胃腸功能紊亂，導致感染性腹瀉的現象日益增加，目前臨床采用抗生素治療感染性腹瀉比較普遍，不合理使用、濫用抗生素導致耐藥菌株不斷增多，治療難度加大［1，2］，而運用中藥治療感染性腹瀉可減少抗生素使用量，一定程度上能緩解抗生素耐藥問題。腹瀉康片處方由秦皮、木香等四味藥材組成，源自臨床應用多年的方劑，對感染性腹瀉有很好的治療效果，具有清熱燥濕，行氣止痛，澀腸止瀉之功效。主要用于感染性腹瀉，癥見瀉下急迫或瀉下不爽，大便色黃穢臭，肛門灼熱。現代藥理研究表明秦皮主要有效成分秦皮甲素、秦皮乙素具有明顯的鎮痛抗炎作用［3～6］，現參考文獻方法［7～12］建立了HPLC法同時測定腹瀉康片中秦皮甲素和秦皮乙素的含量，以建立產品質量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC－20A高效液相色譜儀，Mettler AE－200型電子分析天平，TDZ4－WSD低速臺式離心機（長沙湘儀），HS－2060超聲清洗器（上?？茖В?/p>

1.2 試藥 秦皮甲素對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110740－200104），秦皮乙素對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110741－200506），腹瀉康片（自制，0.45 g／片，批號：20130406、20130408、20130410）。乙腈色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18柱（4.6 mm× 250 mm，5μm）。流動相：乙腈－0.1%磷酸（8∶92）。檢測波長：334 nm。流速：1mL·min－1。柱溫：30℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的配制 精密稱取秦皮甲素對照品11.8 mg、秦皮乙素對照品11.4 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密吸取2 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得含秦皮甲素47.2μg·mL－1、秦皮乙素45.6 μg·mL－1的對照品溶液。

2.2.2 樣品溶液的制備 取本品適量，除去包衣，研細，取細粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50 mL，密塞稱定重量，加熱回流60 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過0.45μm微孔薄膜作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備 取按處方除秦皮外的其他藥材，照“2.2.2”項下的制備方法處理，即得陰性對照品溶液。

2.3 線性關系的考察 精密吸取秦皮甲素、秦皮乙素對照品混合溶液（濃度分別為47.2、45.6μg·mL－1）1、2、4、6、8、10μL進樣，測定其峰面積積分值，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。秦皮甲素回歸方程為：Y＝963.16X＋2 863.1，r＝0.999 0，表明秦皮甲素在47.2～472 ng范圍內具有良好的線形關系；秦皮乙素回歸方程為：Y＝1 636.2 X＋5 842.6，r＝0.999 2，表明秦皮乙素在45.6～456 ng范圍內具有良好的線形關系。

2.4 陰性對照品溶液的考察 分別吸取一定體積的陰性對照品溶液、樣品溶液和對照品溶液進行測定。結果表明陰性對照品溶液對樣品溶液的測定無干擾，見圖1～3。

圖1 對照品溶液色譜圖 1.秦皮甲素；2.秦皮乙素

2.5 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液10 μL，重復進樣6次，測定其峰面積積分值，結果秦皮甲素RSD為1.46%，秦皮乙素RSD為1.67%。

2.6 重復性試驗 取同一批號樣品（批號：20130406），按“2.2.2”項下的方法分別制備6份樣品溶液進樣10μL，秦皮甲素和秦皮乙素RSD分別為1.32%和1.05%。

圖2 樣品溶液色譜圖

圖3 陰性對照品溶液色譜圖

2.7 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、24 h進樣10μL，秦皮甲素和秦皮乙素RSD分別為0.97%和0.94%，表明該方法穩定性良好。

2.8 回收率試驗 精密稱取秦皮甲素23.42 mg和秦皮乙素30.86 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得儲備液。精密稱取已知含量的樣品約0.25 g，共6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入1.0 mL儲備液（秦皮甲素對照品0.468 4 mg，秦皮乙素對照品0.617 2 mg），然后按上述方法制備供試品溶液，并測定含量，計算回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗結果（n＝6）

2.9 樣品測定 取3批不同批號樣品，按“2.2.2”項下的方法分別制備樣品溶液，進樣10μL，樣品含量測定結果見表2。

表2 含量測定結果

3 討論

3.1 樣品前處理方法 對比了回流提取和超聲提取兩種方法，回流提取法對秦皮甲素和秦皮乙素提取率略高于超聲法；對比了回流40、60、80 min提取效果，60min基本提取完全，故樣品前處理方法定為回流提取60 min。

3.2 色譜條件 色譜條件參照《中國藥典》2010年版（一部）秦皮的含量測定方法，陰性對照液未見干擾，秦皮甲素、秦皮乙素色譜峰與樣品中其他組分色譜峰可達基線分離，理論板數按秦皮乙素峰計算在5 000以上，因此上述色譜條件可用于本品中秦皮甲素、秦皮乙素的含量測定。

3.3 含量限度 測定3批樣品中秦皮甲素與秦皮乙素的總量，分別為1.768、1.764、1.782 mg／片，其平均值為1.771 mg／片。根據藥材中秦皮甲素和秦皮乙素的含量（秦皮甲素0.43%、秦皮乙素0.59%，合計1.02%）計算轉移率，3批樣品秦皮甲素轉移率分別為：53.50%、53.08%、53.92%，3批樣品秦皮乙素轉移率分別為51.17%、51.28%、51.58%?？紤]中藥材的含量波動較大及大生產時的轉移率（按50%計），結合《中國藥典》對秦皮藥材的含量限度規定（不少于0.80%），暫定本品限度為每片含秦皮以秦皮甲素與秦皮乙素的總量計不得少于1.3 mg。3.4 小結 實驗結果表明，該法簡便可行，重現性好，可作為本品的質量控制方法。

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Determ ination of esculin and esculetin in Fuxiekang Tablets by HPLC

SONG Chun
（Xiangtan Center Hospital，Xiangtan 411100，China）

ObjectiveTo establish a determination method of esculin and esculetin in Fuxiekang Tablets by HPLC.M ethodsHPLCmethod was set up，column was Kromasil C18，themobile phase was acetonitrile－0.1%phosphate acid solution（8∶92），with the flow rate of 1.0 mL·min－1，the detection wavelength was 334 nm，column temperature was 30℃.ResultsThe linear range of esculin was 47.2～472 ng，r＝0.999 0，the average recovery was 101.09%.The linear range of esculetin was 45.6～456 ng，r＝0.999 2，the average recovery was 100.51%.ConclusionThemethod was simple，accurate and stable，which can be used for the quality control of Fuxiekang Tablets.

HPLC；Fuxiekang Tablets；Esculin；Esculetin

R927.2

A

2095－5375（2014）11－0628－003

宋純，女，副主任藥師，研究方向：藥物分析，E－mail：16945548＠qq.com