頂空氣相色譜法測定達托霉素中有機溶劑殘留量

劉世娟，郝貴周，徐 健

（魯南制藥集團股份有限公司，山東臨沂276006）

頂空氣相色譜法測定達托霉素中有機溶劑殘留量

劉世娟，郝貴周，徐 健

（魯南制藥集團股份有限公司，山東臨沂276006）

目的建立頂空氣相色譜法測定達托霉素中有機溶劑乙醇、乙腈含量的方法。方法以DB－WAX毛細管柱為分離柱，采用程序升溫，檢測器為FID。結果線性關系良好，方法精密度、重復性均符合要求。結論該方法可用于達托霉素原料中殘留溶劑乙醇和乙腈的含量測定。

頂空氣相色譜法；達托霉素；溶劑殘留量；測定

達托霉素由Lilly公司研發，從玫瑰孢鏈霉菌發酵液中提取得到的一個環脂肽類抗生素。它不僅具有新穎的化學結構，而且其作用機制特殊：達托霉素可擾亂細胞膜對氨基酸的轉運，從而阻礙細菌細胞壁肽聚糖的生物合成，改變細胞質膜的性質；另外，它還能通過破壞細菌的細胞膜，使其內容物外泄而達到殺滅細菌的目的。達托霉素除了能作用于大多數臨床相關革蘭氏陽性菌外，更重要的是它在體外對已呈現甲氧西林（methicillin）、萬古霉素和利奈唑烷等耐藥性質的分離菌株具有強力活性［1］。在生產過程中會用到乙醇和乙腈，為控制藥品質量，需要對其殘留溶劑進行測定和控制。按照《中國藥典》2010年版［2］中對殘留溶劑的要求，乙醇含量不得過0.5%，乙腈含量不得過0.041%。筆者在本試驗中建立了頂空毛細管氣相色譜法［3，4］，測定乙醇和乙腈在達托霉素中的殘留量，方法靈敏、準確。

1 儀器與試藥

Agilent7890A型氣相色譜儀，FID檢測器，化學工作站和CTC Analytics型頂空進樣器，DB－WAX毛細管色譜柱。達托霉素原料（山東新時代藥業有限公司，批號：120901、120902、121001）。乙醇與乙腈為色譜純，N，N－二甲基甲酰胺為色譜純。

2 方法

2.1 供試品溶液及對照品溶液的配制 精密稱取本品約0.5 g，置20 mL頂空瓶中，精密加N，N－二甲基甲酰胺5mL使溶解，密封，作為供試品溶液；分別精密稱取乙醇499.9 mg、乙腈40.6 mg，置同一100 mL量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液5 mL，置50 mL量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2 色譜條件 頂空進樣條件：頂空平衡溫度85℃，平衡時間30 min，采樣針溫度90℃。

氣相色譜條件：DB－WAX毛細管柱（30 m×0.53 mm，1μm），進樣口溫度：200℃，檢測器溫度：250℃；柱溫：40℃，保持14 min，以40℃·min－1升溫至200℃，保持7 min。載氣為氮氣；柱流量：3 mL·min－1，分流比：1∶1；進樣量：1 mL。兩個主峰的理論板數及分離度均符合《中國藥典》2010年版的有關規定，結果見如圖1。

圖1 GC色譜圖

2.3 線性關系考察 分別精密量取“2.1”項下的對照品儲備液3、4、5、6、7 mL，分別置50 mL量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，得系列濃度溶液。分別精密量取5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，按“2.2”項下色譜條件測定。分別以濃度C（mg·mL－1）為橫坐標，峰面積A為縱坐標進行線性回歸，兩組分在其濃度范圍內線性關系良好，結果見表1。

2.4 精密度試驗 取對照品溶液5 mL，置20 mL頂空瓶中，按“2.2”項下色譜條件測定，連續進樣6次，乙醇與乙腈峰面積的RSD分別為1.22%、2.96%。

2.5 檢測限試驗 將對照品溶液濃度逐級降低后，依法測定，直至信噪比接近3∶1，計算最低檢測濃度，結果見表1。

表1 兩組分回歸方程，線性范圍（n＝5），最低檢測濃度

2.6 回收率試驗 取已知溶劑殘留量的達托霉素（批號：120901）約0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，共9份，按照各種溶劑殘留限度的80%、100%、120%3個水平對9份樣品進行加標，即加入0.4、0.5和0.6 mL對照品儲備液，并加N，N－二甲基甲酰胺使成5 mL，每個水平重復3次，按“2.2”項下的色譜條件進行測定，計算乙醇的平均回收率為98.3%，乙腈的平均回收率為105.6%，RSD分別為1.49%和3.32%。

2.7 樣品測定 分別量取對照品溶液與供試品溶液各5 mL，置于20 mL頂空瓶中，按“2.2”項下色譜條件測定。記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算供試品中各溶劑的殘留量，結果3批樣品（批號：120901、120902、121001）的乙醇濃度分別為0.06%、0.05%和0.08%，乙腈均未檢出。

3 討論

使用頂空進樣法，考察了頂空平衡溫度分別為80℃、85℃和90℃，平衡時間分別為15 min、30 min和45 min時各成分的出峰情況，結果見表2，結果表明頂空溫度85℃，頂空平衡時間30 min時效果理想；比較了DB－624毛細管柱和DB－WAX毛細管柱，DB－WAX毛細管柱峰形好并且理論板數高，因此選用DB－WAX毛細管柱，結果見圖2。通過對3批達托霉素原料中溶劑殘留量的測定，結果均符合《中國藥典》2010年版要求。

表2 頂空溫度與時間選擇試驗結果

圖2 DB－624色譜柱對照品溶液GC色譜圖

［1］Debono M，Abbott BJ，Molloy RM，et al.Enzymatic and chemical modifications of lipopeptide antibiotic A21978C：the synthesis and evaluation of daptomycin（LY146032）［J］.JAntibiot（Tokyo），1988，41（8）：1093－1105.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（二部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄ⅧP.

［3］任英，劉延鳳.頂空氣相色譜法測定吡非尼酮中有機溶劑殘留量［J］.藥學研究，2013，32（5）：271－272.

［4］許國旺.現代實用氣相色譜法［M］.北京：化學工業出版社，2004：25－42.

Determination of residual organic solvents in daptomycin by headspace gas chromatography

LIU Shi-juan，HAO Gui-zhou，XU Jian
（Lunan Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Linyi276006，China）

ObjectiveTo establish amethod for the determination of residualethanol and acetonitrile in daptomycin by headspace gas chromatography.MethodsThe DB－WAX capillary column was adopted，temperature programming and FID detector was used.ResultsThe two compositions had good linear relationship and the precision and reproducibility of themethod were in accord with the requests.ConclusionThismethod could be used to determine residual ethanol and acetonitrile in daptomycin.

Headspace gas chromatography；Daptomycin；Residual solvents；Determination

R927.11

：A

2095－5375（2014）07－0389－003

劉世娟，女，研究方向：藥物分析，E－mail：13666398795＠163.com