中國雞群禽呼腸孤病毒抗體的檢測與分析

靳繼惠，文 楚，邵夢瑜，趙 燁，于曉慧，袁希民，張立新，張嘉棟，鹿建山，張洪昌，甘孟侯，趙繼勛，呂春梅，何 佩，趙麗莉，秦秀慧，才學鵬，張國中

（1.中國農業大學動物醫學院，北京 海淀100193；2.北京康牧獸醫藥械中心，北京 海淀100085；3.中國動物疫病預防控制中心，北京 朝陽100125）

禽呼腸孤病毒屬于呼腸孤病毒科（Reovir?dae）、正呼腸孤病毒（Orthoreovirus），為分節段的雙鏈RNA病毒。病毒粒子無囊膜，呈二十面體對稱并具有雙層衣殼結構。1954年，Fahey和Craw?ley首次從患慢性呼吸道病的雞呼吸道內分離到病毒。ARV感染呈全球性分布，可感染雞、火雞及其他多種禽類[1]。ARV主要引起肉雞的病毒性關節炎和腱鞘炎，還可致患雞生長抑制、飼料轉化率低以及免疫抑制造成繼發感染增加等[2-3]。

1985年王錫堃證實了我國雞群發生由ARV引起雞病毒性關節炎[4]。近年來國內外ARV的感染情況呈現加重趨勢，臨床癥狀越來越多樣化，不同類型雞群均有疑似ARV感染情況存在，主要表現為腿和關節疾病、生長不良、腺胃腫等，ARV感染雞群引起的經濟損失越來越受到養禽業者的廣泛關注[5-6]。近幾年國內對部分省市ARV的血清學調查有一些報告[7-11]，而在全國范圍內大規模的進行ARV抗體檢測卻鮮有報道。對我國雞群開展較全面的ARV抗體監測、了解其抗體變化及感染情況十分必要。

國內目前普遍采用ELISA方法檢測ARV抗體，該方法敏感性高、特異性強，適合大規模血清樣本的檢測。為了解我國雞群的ARV抗體水平及其變化規律，本研究應用商品化的ARV抗體ELISA檢測試劑盒對我國19個省市的不同類型雞群進行了ARV抗體的檢測與分析，以期為養禽生產中正確認識和科學防控ARV感染奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 血清樣本 2010年1月至2013年6月間來自全國19個省市393個不同類型（肉雞、肉種雞、蛋雞、蛋種雞）雞群的血清樣本17 058份，包括商品肉雞血清3 497份、肉種雞血清12 424份、商品蛋雞血清91份、蛋種雞血清514份、麻雞血清93份、父母代麻雞血清190份、父母代蘆花雞血清121份、三黃雞血清60份、嶺南黃種雞血清48份和土雞血清20份。

1.2 檢測試劑盒 禽呼腸孤病毒ELISA抗體檢測試劑盒為美國IDEXX公司產品，購自北京愛德士元亨生物科技有限公司，檢測結果以ELISA抗體效價大于396判為ARV抗體陽性。

1.3 血清抗體的檢測 所有血清樣品均利用ARV抗體檢測試劑盒進行檢測，具體操作方法和判定標準均按參照試劑盒說明書進行，樣品檢測工作由中國農業大學畜禽疫病診斷中心完成。

2 結果與分析

2.1 ARV抗體檢測總體情況 本次檢測的393個雞群包括106個非免疫雞群和287個免疫雞群，共檢測樣本17 058份，其中陽性樣本15 680份，總體陽性率為92.83%。非免疫雞群共3 965份血清樣本檢測出2 963份為陽性，陽性率為74.72%。免疫雞群共13 093份血清樣本檢測出12 897份血清為陽性，陽性率為98.50%，具體檢測結果如表1所示。

檢測的非免疫雞群血清樣品中ARV抗體陽性率較高，表明在非免疫雞群中ARV感染較為普遍。圖1顯示的是某非免疫商品肉雞群不同日齡ARV抗體變化，該雞群ARV抗體呈現明顯的高-低-高的典型變化，1日齡時由于母源抗體的普遍存在，雞群ARV抗體水平較高，21日齡時母源抗體已逐漸消失，雞群ARV抗體多為陰性，隨后在35日齡和42日齡雞群ARV抗體水平呈現逐漸上升趨勢，表明該雞群發生了ARV感染。圖2顯示有ARV感染臨床表現（腿和關節疾?。┎糠址敲庖唠u群的抗體檢測情況。

表1 免疫和非免疫雞群ARV抗體檢測結果

圖1 白羽商品肉雞ARV抗體檢測情況

圖2 部分發病雞群ARV抗體檢測情況

檢測免疫雞群的ARV抗體陽性率為98.50%，并且存在一定比例的免疫雞群抗體水平偏高的現象。雞群免疫抗體ELISA滴度通常介于2 000～15 000之間，監測結果顯示，部分雞群ELISA抗體滴度值可達到20 000以上并且臨床存在ARV感染的臨床表現，表明部分免疫雞群仍存在ARV感染情況。圖3顯示免疫肉種雞群ARV抗體的消長情況。

圖3 白羽肉種雞群ARV抗體消長情況

2.2 不同地區雞群ARV抗體檢測結果分析 對來自不同地區的血清樣本檢測結果分別進行分析表明，除了山東省和廣東省外，其他各個省市的樣本陽性率均在90%以上，其中黑龍江和寧夏兩省的樣本陽性率均達到了100%，而陽性率最低的山東和廣東兩省也分別達到了75.31%和87.87%，具體結果如表2所示。結果表明，我國不同地區雞群中ARV抗體的陽性率普遍較高。

表2 不同地區雞群ARV抗體檢測結果

2.3 不同類型雞群ARV抗體檢測結果分析 商品肉雞、肉種雞、商品蛋雞和蛋種雞的ARV抗體陽性率分別為72.66%，98.48%，93.40%和95.53%，結果如表3所示，結果表明，我國不同類型雞群均具有較高的ARV抗體陽性率，其中商品肉雞群和部分商品蛋雞群均為非免疫雞群，同樣表明不同類型雞群ARV感染較為普遍。

表3 不同類型雞群ARV抗體檢測結果

2.4 部分地方品種雞群ARV抗體檢測結果分析

我國不同地區的鐵腳麻雞、黃雞、土雞和嶺南黃雞ARV抗體平均ELISA滴度均在2 000以上，其中廣西省黃雞的ARV平均ELISA抗體滴度達到了12 000以上，具體檢測結果如圖4所示。結果表明，我國地方品種雞群也普遍存在ARV感染。

圖4 部分地方品種雞群ARV抗體檢測情況

3 討論

2006年崔治中等采用ELISA方法對山東、吉林、北京、河南、遼寧5個省市8個公司不同品種不同日齡雞群進行了ARV抗體檢測，在檢測的75個雞群中有74個雞群為ARV抗體陽性（96%），其中1 764份雞血清的ARV平均抗體陽性率為75.1%，研究表明，我國多數雞群中都存在著ARV的感染[9]。2011年，趙圓圓等采用ELISA方法進行了安徽省ARV感染的血清學調查，結果表明，所有被檢的雞群都存在不同程度的抗體陽性率，ARV感染在安徽雞群中已經普遍存在[11]。

本研究首次在全國范圍內對不同類型雞群ARV抗體進行大規模檢測，所有的血清樣本都來自中國大陸的主要養禽生產地區。檢測結果表明，采樣的19個省市、393個雞群的17 058份雞血清中，共檢測出15 680份ARV抗體陽性血清，平均陽性率為92.83%，其中免疫雞群的陽性率為98.50%，非免疫雞群的陽性率為74.72%。部分免疫雞群存在的抗體偏高現象、非免疫雞群存在較高的抗體陽性率表明我國雞群ARV感染普遍存在。臨床上也存在部分雞群有疑似ARV感染的表現，比如生長不良、腿和關節疾病等，并且分離出了病原，分離的病原和臨床發生疾病的關系問題還需要進一步分析和探討[8]。在我們采樣的省份中，除了山東省和廣東省外，其他各個省市的血清陽性率均在90%以上，并且不同類型雞群的血清陽性率及部分地方品種雞群的ARV抗體水平也較高。這些結果表明，ARV抗體水平與雞群的地域分布、雞群類型和品種關系不大，ARV感染在我國雞群中較為普遍。

ARV可水平傳播亦可經卵垂直傳播，雞群由于感染了ARV會導致機體的免疫功能降低、對其他傳染病的易感性增加，同時該病毒在感染雞群后多呈現亞臨床感染，誘發非特異性并發癥或免疫抑制，導致其處于免疫抑制狀態，當對雞群進行新城疫和高致病性禽流感等疫苗免疫時易于造成免疫失敗[12]。本研究表明，我國雞群中ARV的感染可能普遍存在，并且可能潛在對我國的養禽業構成了威脅。本研究僅對國內雞群ARV抗體情況進行了檢測分析，從血清學水平了解了我國雞群的ARV感染的初步情況，要想進一步搞清楚ARV在我國雞群的危害和流行狀況，還應繼續開展ARV感染的分子流行病學調查及免疫保護分析研究。

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