丹皮酚對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠抗氧化作用研究

王 惠，騫秀芳，朱 哲，李 燦

（武警北京總隊(duì)第二醫(yī)院藥劑科，北京 100027）

丹皮酚對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠抗氧化作用研究

王 惠，騫秀芳，朱 哲，李 燦

（武警北京總隊(duì)第二醫(yī)院藥劑科，北京 100027）

目的：研究丹皮酚對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化（AS）大鼠的抗氧化作用。方法：用高脂飼料喂養(yǎng)和維生素D3腹腔注射的方法建立大鼠AS模型，然后分為正常組、模型組、陽性組（辛伐他汀10 mg/kg）、丹皮酚3個(gè)劑量組（20、10、5mg/kg），每組10只。灌胃給藥4周后各組取主動(dòng)脈，在光鏡下進(jìn)行病變分級(jí)評(píng)分。取血清測(cè)定SOD活力和MDA含量。結(jié)果：丹皮酚能改善AS大鼠的主動(dòng)脈病變，高劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。與模型組比較，丹皮酚各劑量組AS大鼠血清SOD活性顯著升高（P＜0．01），血清MDA含量降低（P＜0．05或P＜0．01）。結(jié)論：丹皮酚治療AS作用可能與增強(qiáng)SOD活性、減少M(fèi)DA含量、減輕氧自由基的損傷有關(guān)。

丹皮酚；大鼠；動(dòng)脈粥樣硬化；超氧化物歧化酶；丙二醛

丹皮酚（paeonol，PA）是毛茛科植物牡丹的根皮及蘿摩科植物徐長(zhǎng)卿的根或全草中的活性成分之一，具有改善血流、神經(jīng)保護(hù)、抑制脂質(zhì)過氧化、抗炎鎮(zhèn)痛等作用，臨床多用于治療心腦血管、炎癥及免疫系統(tǒng)等疾病［1，2］。有報(bào)道證實(shí)丹皮酚可用于防治家兔動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）［3，4］。我們建立AS大鼠模型，對(duì)丹皮酚抗氧化作用進(jìn)行了研究，總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物和飼料

SD大鼠，雄性，體質(zhì)量（200±20）g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK（冀）2008-1-003。

1.2 藥品和試劑

丹皮酚（純度99%），由Sigma公司提供，用0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）配成適當(dāng)濃度的混懸液。辛伐他汀片由魯南貝特制藥有限公司提供，藥片粉碎后以生理鹽水配成所需濃度。維生素D3注射液由上海通用藥業(yè)股份有限公司提供。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和考馬斯亮藍(lán)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 主要儀器

KDC-160HR型高速離心機(jī)（中國(guó)科大創(chuàng)新股份有限公司生產(chǎn)），CHK-213型光學(xué)顯微鏡（日本奧林巴斯公司生產(chǎn)），AU400型全自動(dòng)生化分析儀（日本奧林巴斯公司生產(chǎn)），UV-2201型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司生產(chǎn)）。

1.4 方 法

建立模型、分組及給藥：取大鼠60只，隨機(jī)分為正常組、模型組、陽性組（辛伐他汀10mg/kg）、PA高劑量組（20mg/kg）、PA中劑量組（10mg/kg）、PA低劑量組（5mg/kg），每組10只。正常組給予普通飼料，其他組均給予高脂飼料喂養(yǎng)，連續(xù)8周。給藥前除正常組外，其他各組腹腔注射維生素D37×105U/kg，每天1次，連續(xù)3天［5］。之后開始灌胃給藥，給藥體積按20mL/kg，每天1次。正常組和模型組給予等體積的0.5%CMC-Na溶液。連續(xù)給藥4周，期間繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)。

指標(biāo)的檢測(cè)：末次給藥后禁食不禁水12h，腹主動(dòng)脈采血，3500r/min離心5min分離血清，采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活力，硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

主動(dòng)脈病變分級(jí)：動(dòng)物處死后，分離主動(dòng)脈周圍的結(jié)締組織，剝離全長(zhǎng)動(dòng)脈，將其固定于4%多聚甲醛液中，常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片，行HE染色，光鏡下觀察主動(dòng)脈病變，并進(jìn)行分級(jí)評(píng)分［6］。

2 結(jié) 果

丹皮酚對(duì)AS大鼠主動(dòng)脈病變分級(jí)的影響見表1。

表1 各組大鼠主動(dòng)脈病變分級(jí)比較 只

各組大鼠SOD活性和MDA含量見表2。

表2 各組大鼠血清SOD活性和MDA含量比較 （±s）

表2 各組大鼠血清SOD活性和MDA含量比較 （±s）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別 n 劑量（mg/kg） SOD（U/mL） MDA（nmol/mL）正常組 10 - 96.58±12.77 8.05±1.13模型組 10 - 40.92±10.45**19.24±4.00**PA高劑量組 10 20 69.31±18.02△△14.02±3.16△△PA中劑量組 10 10 70.88±19.94△△14.36±2.21△△PA低劑量組 10 5 59.63±13.45△△15.93±2.07△陽性組 10 10 106.26±27.08△△12.89±2.07△△

3 討 論

AS是引起多種心腦血管疾病的病理生理基礎(chǔ)。氧化應(yīng)激在AS的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，通過氧化作用、誘導(dǎo)血管基因表達(dá)、促進(jìn)局部炎癥反應(yīng)和細(xì)胞增殖，從多方面參與AS的病理進(jìn)程［7］。MDA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，其含量變化反映了機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，從而間接反映機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度［8］。SOD是機(jī)體內(nèi)主要的抗氧化酶-超氧自由基清除劑，其活性高低代表了組織清除自由基的能力［9］。

觀察顯示丹皮酚可減弱脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，增加氧自由基清除能力，從而能夠拮抗AS時(shí)產(chǎn)生的氧自由基對(duì)機(jī)體細(xì)胞的損害。此外，丹皮酚能夠抑制AS大鼠的主動(dòng)脈粥樣病變。

丹皮酚對(duì)大鼠早期AS具有一定的治療作用，其作用可能與增強(qiáng)SOD活性、減少M(fèi)DA含量，減輕自由基的損傷、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞有關(guān)。

［1］ 楊正生，彭振輝，姚青海，等．丹皮酚的藥理作用研究進(jìn)展［J］．中國(guó)藥物與臨床，2011，11（5）：545-547．

［2］ Liu J，Wang S，F(xiàn)eng L，et al．Hypoglycemic and antioxidant activities of paeonol and its beneficial effect on diabetic encephalopathy in streptozotocin-induced diabetic rats ［J］．J Med Food，2013，16（7）：577-586．

［3］ 劉瑾．丹皮酚干預(yù)兔實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化的實(shí)驗(yàn)研究［D］．濟(jì)南：山東中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文，2009．

［4］ Li H，Dai M，Jia W．Paeonol attenuates high-fat-dietinduced atherosclerosis in rabbits by anti-inflammatory activity ［J］．Planta Med，2009，75（1）：7-11．

［5］ 周紅，吳曉燕，袁藝標(biāo)，等．三種劑量維生素D3結(jié)合高脂飼料建立大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型的比較［J］．中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志，2012，20（11）：995-998．

［6］ 王偉，楊濱，王嵐，等．丹參山楂藥對(duì)對(duì)大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響［J］．中國(guó)中藥雜志，2011，36（6）：784-789．

［7］ Yokoyama M．Oxidant stress and atherosclerosis［J］．Curr Opin Pharmacol，2004，4（2）：110-115．

［8］ Viigimaa M，Abina J，Zemtsovskaya G，et al．Malondialdehyde-modified low-density lipoproteins as biomarker for atherosclerosis［J］．Blood Press，2010，19（3）：164-168．

［9］ Huang TT，Zou Y，Corniola R．Oxidative stress and adult neurogenesis--effects of radiation and superoxide dismutase deficiency［J］．Semin Cell Dev Biol，2012，23（7）：738-744．

Objective：To investigate the anti-oxidative stress effect of paeonol （PA） against atherosclerosis（AS）in rats.Methods：Rats model of AS was established by administration of high-fat diet and vitamin D3（i.p.）.Rats were divided into 6 groups（n = 10）at random，namely normal，model，positive（simvastatin，10 mg/kg）and PA high，medium and low dose groups（20，10 and 5 mg/kg，respectively）. After 4 weeks of oral treatment，the aortic pathologic changes were observed under microscope and graded.The sera of all rats were collected to determine the SOD activities and MDA contents.Results：Administration of PA improved the severity of aortic pathology in AS rats，and the pathologic grade of PA high dose group showed a significant difference compared with that of model group（P＜0.05）.PA （20，10 and 5 mg/kg）significantly increased the SOD activities（P＜0.01）and reduced the MDA contents（P＜0.05 or P＜0.01）in serum of AS rats compared to the model group.Conclusion：Therapeutic effect of PA against AS maybe due to its action on SOD activities and MDA contents.

paeonol；atherosclerosis；SOD；MDA

R255.741.4

B

1004-2814（2014）11-0988-03

2014-07-02

騫秀芳