PI3K、p-AKT和P27在子宮內膜癌組織中的表達及意義

姜艷艷 張連民

1.東莞市厚街醫院婦產科，廣東東莞 523960；2.東莞市沙田醫院婦產科，廣東東莞 523000

PI3K、p-AKT和P27在子宮內膜癌組織中的表達及意義

姜艷艷1張連民2

1.東莞市厚街醫院婦產科，廣東東莞 523960；2.東莞市沙田醫院婦產科，廣東東莞 523000

目的研究子宮內膜癌中PI3K、p-AKT、P27的表達規律,探討三者與子宮內膜癌發生發展的關系。 方法應用免疫組化SP法檢測正常子宮內膜、子宮內膜增生癥、子宮內膜癌中PI3K、p-AKT、P27的表達，分析它們與各項臨床病理參數之間的關系及三者之間的關系。 結果PI3K、p-AKT、P27的表達在3組間比較均有顯著差異（P＜0.05），PI3K、p-AKT的表達與子宮內膜癌的臨床分期和組織學分級有關（P＜0.05），P27的表達與子宮內膜癌的組織學分級有關（P＜0.05）。P27與PI3K、P27與p-AKT均呈負相關（P＜0.01）。結論PI3K、p-AKT、P27的表達與子宮內膜癌的發生和發展有關，三者的表達異常參與了子宮內膜癌的發生。

子宮內膜癌；PI3K；p-AKT；P27；免疫組化

子宮內膜癌(endometrial carcinoma)，是指原發于子宮內膜的一組上皮性惡性腫瘤，是一種常見的婦科惡性腫瘤，其發生率約占女性總癌瘤的7%，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%。其確切病因及發病機制尚不清楚。研究表明PI3K/AKT信號通路異常與許多惡性腫瘤的發生發展有關。該研究2009—2013年間通過測定子宮內膜癌中PI3K、p-AKT、P27的表達規律、臨床意義及三者之間的關系,探討三者與子宮內膜癌發生發展的關系?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

子宮內膜癌標本取自東莞市厚街醫院婦產科和病理科2009—2013年手術切除的子宮內膜樣腺癌標本55例（術前均未接受化療及激素治療，且不合并其他惡性腫瘤），按FIGO進行臨床分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期19例，Ⅲ期14例；組織學分級：G1級29例，G2級14例，G3級12例；無肌層浸潤20例，淺肌層浸潤(＜1/2)16例，深肌層浸潤(＞1/2)19例；無淋巴結轉移46例，有淋巴結轉移9例：患者年齡38～70歲，平均54.3歲。選取同期因功能失調性子宮出血行子宮切除術或診刮術病人的異常子宮內膜30例：標本用10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，有完整的臨床和病理資料。選取同期因宮頸CIN行子宮全切術的20例患者的正常子宮內膜組織作為正常對照。

1.2 試劑

兔抗人PI3K、p-AKT、P27單克隆抗體，免疫組化SP試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 結果判定

以細胞漿或細胞核內出現明確的棕黃色顆粒為陽性細胞。采用乳腺癌切片作為陽性對照，PBS代一抗作為陰性對照。結果判斷標準：隨機觀察 5個高倍視野，每個視野計數 100個細胞，先根據陽性細胞數所占的百分數計分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；再根據陽性細胞染色強度計分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;然后根據兩者相加所得的總分進行結果判定：0～l分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中度陽性(++)，6～7分為強陽性(+++)。該研究在此劃分類型的基礎上將結果合并為陰性(0～1分)，陽性(2～7分)。

1.4 統計方法

實驗數據應用SPSS15.0軟件進行統計分析。免疫組化實驗結果應用等級資料的秩和檢驗對相關組間進行顯著性檢驗；采用Spearman相關分析法對PI3K、p-AKT和P27蛋白表達的關系進行相關性分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 PI3K、p-AKT、P27在不同子宮內膜組織中的表達

表1 PI3K、p-AKT、P27蛋白在不同子宮內膜組織中的表達

2.2 PI3K、p-AKT和P27在子宮內膜癌組織中的表達與臨床病理參數的關系

該實驗結果顯示PI3K、p-AKT的表達與子宮內膜癌的臨床分期和組織學分級有關，差異有統計學意義(P＜0.05)，與患者年齡、淋巴結轉移和肌層浸潤深度無關，差異無統計學意義(P＞0.05)。P27的表達與子宮內膜癌的組織學分級有關，差異有統計學意義（P＜0.05），與臨床分期、患者年齡、淋巴結轉移和肌層浸潤深度無關，差異無統計學意義(P＞0.05)。

2.3 PI3K、p-AKT和P27在子宮內膜癌組織中表達的相關性

55例子宮內膜癌病例中，PTEN、p-AKT表達同為陽性者8例，同為陰性者3例，Spearman相關分析表明二者呈顯著負相關，差異有統計學意義（r=-0.480,P＜0.01）。P27、p-AKT表達同為陽性者6例，同為陰性者4例，Spearman相關分析表明二者呈顯著負相關，差異有統計學意義（r=-0.403,P＜0.01）。

3 討論

PI3K／Akt與子宮內膜癌PI3K／Akt通路廣泛存在細胞中，參與細胞生長、增殖、分化調節等各方面。磷脂酰肌醇-3羥基激酶（PI3K）是一個酯酶，當細胞受生長因子等刺激因子刺激后，細胞內PI3K可被G蛋白偶聯受體、蛋白酪氨酸激酶受體或Ras蛋白激活，激活后的 PI3K對磷脂酰肌醇環上的3位羥基進行磷酸化從而產生磷酸化的磷脂酰肌醇.AKT是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶又稱蛋白激酶B，對細胞存活有重要作用。AKT轉位到細胞膜以及AKT活化所需的308位蘇氨酸 (Thr308)和473位絲氨酸(Ser473)磷酸化是AKT活化的關鍵環節，都是依賴于 PI3K完成的[1-2]。PI3K突變促使惡性腫瘤的發生[3]，磷酸化的AKT通過作用于多種下游分子，影響細胞周期進展，促進細胞增殖，抑制細胞凋亡，從而導致腫瘤發生與發展。該研究結果顯示PI3K、p-AKT在子宮內膜癌組織中呈高表達，明顯高于正常子宮內膜和子宮內膜增生癥，差異有統計學意義（P＜0.05）。因此推測PI3K過度激活，AKT磷酸化增加，活性增強可能促使子宮內膜癌的發生，此外該研究顯示PI3K、p-AKT的表達與子宮內膜癌的臨床分期和組織學分級有關，但與患者年齡、淋巴結轉移和肌層浸潤深度無關，表明PI3K、p-AKT的表達異常與子宮內膜癌的發展有關。

P27與子宮內膜癌 P27是一種非特異的CDKIs，調節細胞由Gl-S期轉變，主要抑制cyclinE-CDK2和cyclinA-CDK2復合物。P27在G0和G1期表達并在細胞開始進入S期時降低，其在組織和腫瘤的非增殖部分呈現強陽性表達，因此P27蛋白的穩定對于維持細胞的穩態和穩定性方面非常重要。P27蛋白的低表達在人類多種腫瘤中均有發現，包括乳腺癌、卵巢癌、胃癌、結直腸癌、前列腺癌和宮頸癌，在許多惡性腫瘤中其降解增強提示腫瘤的預后不良[4]，P27基因缺陷小鼠表現軀體龐大、多個器官增生、垂體腫瘤發生率增高[5]。P27降解減少伴隨著子宮內膜細胞增生減少[6]，表明其在人類惡性腫瘤發病機制中的重要性。該研究結果顯示 P27在正常子宮內膜 （85.00%）、子宮內膜增生癥（58.82%）、子宮內膜癌（21.43%）中的陽性表達率呈逐漸下降趨勢，差異有統計學意義（P＜0.01）。P27的表達與子宮內膜癌的組織學分級有關（P=0.02），與臨床分期、患者年齡、淋巴結轉移和肌層浸潤深度無關，證實了P27蛋白缺失在子宮內膜癌發病機制中的重要性。但有研究表明P27表達與肺癌的分期及淋巴結轉移有關，與該研究結果不同，可能是不同腫瘤之間的差異造成的[7]。

PKB是PI3K下游的重要靶點，它通過磷酸化細胞周期相關蛋白如P27、cyclin D、凋亡前蛋白等介導細胞事件。PI3K抑制者LY294002阻止細胞增殖，導致G1期細胞積累，P27表達增加，提示P27是PI3K/AKT通路的下游效應點[8]。該實驗發現子宮內膜癌中P27蛋白表達明顯下降，而PI3K、p-AKT表達明顯增加，P27與PI3K、p-AKT蛋白表達存在明顯的負相關，提示PI3K激活導致p-AKT活化增加，活化的AKT可能通過下調 P27的表達，使子宮內膜細胞逃離凋亡，不斷增生，導致子宮內膜癌的發生，三者的共同作用促使了子宮內膜的發生發展。已有研究表明PI3K抑制劑 LY294002、硫利達嗪通過PI3K/AKT通路抑制腫瘤的生長，為惡性腫瘤的治療提供了新的思路[9]。

綜上，PI3K/PK通路在子宮內膜癌中的研究剛剛起步,有關該通路及其上游刺激因子、下游信號因子與子宮內膜癌發生發展的關系將成為未來研究的熱點，為子宮內膜癌病因學研究及尋找新的治療靶點提供新思路。

[1]Hanada M,Feng J,Hemmings BA,et al.Structure,regulation and function of PKB/AKT–a major therapeutic target[J].Biochim Biophys Acta，2004，1697(1-2):3-16.

[2]Datta SR，Brunet A，Greenberg ME.Cellular survival:a play in three AKTs[J].Genes Dev,1999,13:2905-2927.

[3]Kang S,BaderAG,Vogt PK.Phosphatidylinositol 3-kinase mutations identified in human cancer are oncogenic[J].Proc Natl Acad Sci USA, 2005,102(3):802-807.

[4]Schmider-Ross A,Pirsig O,Gottschalk E,et al.Cyclin-dependant Kinase inhibitors CIP(p21)and KIP1(p27)in ovarian cancer[J].Cancer Res Clin Oncol,2006,132(3):163-170.

[5]Vuocolo S,Soprano DR,Soprano KJ.p27/Kip1 mediates retinoic acidinduced suppression of ovarian carcinoma cell growth[J].Cell Physiol, 2004,199(2):237-243.

[6]Pavlides SC1,Huang KT,Reid DA,et al.Inhibitors of SCF-Skp2/Cks1 E3 ligase block estrogen-induced growth stimulation and degradation of nuclear p27kip1:therapeutic potential for endometrial cancer[J].Endocrinology,2013,154(11):4030-4045.

[7]王富強,許志洋,胡凡,等.非小細胞肺癌組織磷酸化蛋白p27和鈣網蛋白的水平研究[J].中外醫療,2013(29):46-47.

[8]Guo RX,WeiLH,Qiao YH,et al.Blockage of PI3K/PKB/P27kip1 signaling pathway can antagonize 17 beta-estradiol-induced Ishikawa proliferation and cell cycle progression[J].Chin Med J(Engl),2006,119: 242-245.

[9]Kang S1,Dong SM,Kim BR,et al.Thioridazine induces apoptosis by targeting the PI3K/Akt/mTOR pathway in cervical and endometrial cancer cells[J].Apoptosis.2012,17(9):989-997.

Expression and Significance of PI3K,p-AKT and P27 in Endometrial Carcinoma

JIANG Yanyan1ZHANG Lianmin2
1.Department of Obstetrics and Gynecology,Dongguan Houjie Hospital,Dongguan,Guangdong Province,523960,China; 2.Department of Obstetrics and Gynecology,Shatian Hospital of Dongguan City,Guangdong Province,523000,China

Objective To study the expression pattern of PI3K,p-AKT and P27 in endometrial carcinoma,and investigate the correlation of which with the occurrence and development of endometrial carcinoma.Methods Immunohistochemical SP method was used to detect the expression of PI3K,p-AKT,P27 in the normal endometria,endometrial hyperplasia and endometrial carcinoma. And the relationship between the three,the correlation of them with the clinical pathological parameters were analyzed.Results There was a significant difference in the expression of PI3K,p-AKT and P27 between the three groups(P＜0.05).The expression of PI3K and p-AKT was related to the clinical stage and histological grade of endometrial carcinoma(P＜0.05).The expression of P27 was associated with the histological grade of endometrial carcinoma (P＜0.05).The expression of P27 was negatively correlated to the PI3K and p-AKT expression (P＜0.01).Conclusion The expressions of PI3K,p-AKT and P27 are correlated with the occurrence and development of endometrial carcinoma.Their abnormal expressions involve the occurrence of endometrial carcinoma.

Endometrial carcinoma;PI3K;p-AKT;P27;Immunohistochemistry

R4

A

1674-0742（2014）10（a）－0057-02

2014-06-20）

姜艷艷（1979.11-），女，廣東東莞人，碩士研究生，主治醫師，研究方向：婦科腫瘤。

張連民（1974.5-），男，廣東東莞人，碩士研究生，副主任醫師，研究方向：婦科腫瘤。