卵巢上皮癌組織Id-1和HO-1表達及臨床意義

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(青島大學醫學院附屬醫院婦科，山東 青島 266003)

卵巢癌發現時多為晚期，死亡率位居婦科惡性腫瘤首位。分化抑制因子-1(Id-1)能阻礙DNA與轉錄因子結合，調控細胞增殖分化[1]，與腫瘤血管生成和腫瘤的發生、發展及侵襲密切相關。血紅素加氧酶(HO)作為一種誘導型蛋白存在于哺乳動物體內，當機體器官受損時誘導HO-1表達發揮抗氧化作用[2],HO-1過表達不僅能刺激腫瘤細胞生長,增強腫瘤細胞抗氧化及抗凋亡能力,而且能促進腫瘤血管生長和腫瘤細胞轉移等。本文采用免疫組化方法檢測了Id-1和HO-1在卵巢上皮癌、卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織表達情況，探討兩種因子在卵巢上皮癌發生、發展中可能的作用。

1 材料與方法

1.1 標本及其來源

2010年1月—2012年2月，收集我院婦科病人的手術組織標本，其中卵巢上皮癌組織標本50例(均行卵巢癌腫瘤細胞減滅術，術前均未行化療或放療,術后病理確診為卵巢上皮癌),良性卵巢腫瘤標本45例及正常卵巢組織標本15例。卵巢癌病人年齡27～73歲，其中≥50歲29例，<50歲21例；高中分化19例，低分化31例；腫瘤直徑≥5 cm者31例，<5 cm者19例；術前有大量腹水者33例,無或少量腹水者17例；術前CA125水平≥200 kU/L者42例，<200 kU/L者8例；漿液性腺癌41例，黏液性腺癌6例，透明細胞癌3例；淋巴結轉移陽性者30例，淋巴結轉移陰性者20例；I～Ⅱ期22例，Ⅲ～Ⅳ期28例(按FIGO 2000年卵巢癌分期標準)。對照組分別為因卵巢腫瘤行患側卵巢切除術的病人(術后病理為良性卵巢腫瘤)和因子宮肌瘤行全子宮加雙附件切除術的病人(術后病理均為子宮平滑肌瘤，卵巢組織無異常)。

1.2 主要試劑

Id-1及HO-1單抗購于北京博奧森生物技術有限公司，SP試劑盒和DNA顯色試劑盒均購于北京 中杉金橋生物技術有限公司，磷酸鹽緩沖液(PBS)購自上海研生生物技術有限公司。

1.3 檢測指標和方法

Id-1及HO-1的檢測均采用免疫組織化學SP法,主要步驟按照試劑盒說明書操作。試驗以已知Id-1及HO-1陽性切片作為陽性對照，以PBS替代一抗作為陰性對照。

1.4 結果判定

Id-1陽性表達主要在細胞質，部分在細胞核中,HO-1陽性表達位于細胞核。隨機選擇5個高倍視野，計數100個以上腫瘤細胞。根據陽性細胞數及細胞染色強度進行判斷。陽性細胞數<5%，計0分；陽性細胞數5%～25%，計1分；陽性細胞數26%～50%，計2分；陽性細胞數51%～75%，計3分；陽性細胞數>75%，計4分。根據陽性著色強度不同依次計0、1、2、3分(不著色為0分，淺棕色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分)，將每張切片的兩項分數累計，0分為陰性，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為陽性()，5～6分為強陽性()。

1.5 統計學方法

采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行χ2檢驗或Fisher精確概率檢驗。Id-1及HO-1的關系采用Spearman等級相關分析。

2 結 果

2.1 各組Id-1及HO-1的表達

Id-1在細胞質和細胞核中均有表達，卵巢上皮癌、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中Id-1陽性表達率分別為88.0%、48.9%與13.3%。HO-1在細胞核中表達，卵巢上皮癌、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中HO-1陽性表達率分別為76.0%、44.4%和0。Id-1和HO-1在正常卵巢、卵巢良性腫瘤及卵巢上皮癌組織中的表達差異均有顯著性(χ2=6.838～31.097,P<0.05)。

2.2 Id-1及HO-1表達與卵巢上皮癌病人臨床病理特征的關系

Id-1和HO-1的表達與病人年齡、腫瘤大小、臨床分期和有無腹水等均無關(P>0.05)，而與術前的CA125水平、病理分級和淋巴結轉移有關(χ2=4.678～7.739,P<0.05)。見表1。

2.3 卵巢上皮癌組織中Id-1及HO-1表達相關性

在50例卵巢上皮癌組織中，Id-1及HO-1表達均陽性者29例，均陰性者9例，兩者表達呈正相關(r=0.390,P<0.05)。

表1Id-1和HO-1表達與卵巢上皮癌病人臨床病理特征的關系(例)

臨床病理因素nId-1+-χ2PHO-1+-χ2P年齡(歲) ≥5029263236 <50211830.1790.6721560.4150.520腫瘤大小(d/cm) ≥53128162213 <5191680.4170.5191671.1330.287腹水 大量332910257 無或少量171550.0010.9711340.0030.955術前CA125(z/kU·L-1) ≥200423910356 <2008555.8640.015347.7390.005組織學類型 漿液性腺癌4125163110 其他9630.1010.750720.0190.890臨床分期 Ⅰ～Ⅱ22199154 Ⅲ～Ⅳ2825100.1000.7522331.3170.251病理分級 中高分化19149115 低分化3130115.9740.0152785.5070.019淋巴結轉移 無201512129 有302995.3350.0212654.6780.031

3 討 論

3.1 Id-1與卵巢上皮癌的關系

Id-1是Id蛋白家族成員，既參與正常細胞分化調控，還影響腫瘤細胞分化，主要通過促進腫瘤血管生成以及浸潤轉移,調控細胞定向分化，抑制細胞凋亡等發揮作用[3]。腫瘤的血管生成受多種細胞因子調控，其中血管內皮細胞生長因子(VEGF)是腫瘤生長及遠處轉移的必要條件。LING等[4]在前列腺癌細胞中通過RNA干擾抑制Id-1的表達，結果顯示VEGF表達水平也明顯下降。最近研究顯示,在宮頸癌進展中,Id-1可能是通過促進腫瘤血管生成而促腫瘤生成的[5]。Id-1誘導的癌細胞增生可以通過抑制p53信號通路和活化NF-κB信號通路，下調caspase3的表達水平，阻止腫瘤細胞的凋亡[6]。還有研究結果顯示，Id-1過表達與EGFR表達增高有關，阻斷Id-1的表達可抑制卵巢癌細胞浸潤轉移[7]。上述研究均證實，Id-1可有效促進腫瘤發生、發展。本文研究結果顯示，Id-1在卵巢癌組織中高表達。SCHINDL等[8]研究亦顯示，卵巢癌組織Id-1過表達，與本研究結果一致。同時本研究結果顯示，Id-1的表達與病人術前CA125水平、淋巴結轉移和病理分級密切相關。這表明Id-1可能與卵巢上皮癌的發生、發展有關。

3.2 HO-1與卵巢上皮癌的關系

HO-1對腫瘤細胞具有抗凋亡作用,可能是通過降低細胞內促氧化劑濃度、增高膽紅素水平、提高CO生成來抑制細胞凋亡。HO-1與腫瘤的血管生成密切相關，而血管生成與腫瘤生長、侵襲和轉移有關。主要表現在HO-1和VEGF之間的作用。在研究VEGF對HO-1的影響實驗中發現,在肺腺癌細胞中加入HO-1抑制劑鋅-原卟啉后,VEGF合成減少,血管生成被抑制，同時VEGF對HO-1合成有調節作用[9]。近期研究結果證實,體外下調HO-1的表達可通過影響caspase3活性抑制人肝癌細胞的凋亡[10]。HO-1所具有的抗凋亡作用還可以通過Nrf2-ARE通路來實現。保肝藥物可激活Nrf2-ARE，通過抗氧化酶(如HO-1)抑制ROS的產生，對肝細胞發揮保護作用[11-12]。總之，HO-1通過以上途徑促進腫瘤的發生、發展。

本文的研究結果顯示，HO-1在卵巢癌組織中呈高表達，推測HO-1可能是卵巢癌形成的重要因素之一。同時本文的研究結果還顯示，HO-1陽性表達與病人術前CA125水平、淋巴結轉移和病理分級密切相關。由此可見，腫瘤惡性程度越高，HO-1的表達水平越高。這表明HO-1可能與卵巢上皮癌的發生、進展有關。

3.3 Id-1和HO-1之間的關系

本研究結果顯示，卵巢上皮癌組織中Id-1和HO-1的表達呈正相關,即Id-1活化的腫瘤組織中存在HO-1的高水平表達。關于卵巢癌組織中Id-1和HO-1相關性研究,國內外鮮有報道。本研究可推測卵巢癌形成及發展過程中,兩者具有協同作用,很可能存在VEGF、caspase3共同通路，但具體作用機制還需更深入的研究。這些研究可能成為卵巢癌治療的實驗依據。

總之，Id-1和HO-1的表達水平與卵巢癌發生、發展相關,為卵巢癌進一步的研究和治療提供了新依據，有望作為卵巢上皮癌的診斷性標志物，并為卵巢癌治療提供新思路。

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