上皮性卵巢癌組織Snail與Axl的表達及其意義

，，

(1 青島大學醫(yī)學院婦產科學教研室,山東 青島 266021 2 煙臺山醫(yī)院產科; 3 青島大學醫(yī)學院附屬煙臺毓璜頂醫(yī)院婦科)

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的三大惡性腫瘤之一，其死亡率居惡性腫瘤之首。卵巢癌病理種類繁多，其中上皮性卵巢癌占所有類型卵巢癌的90%。侵襲、轉移是目前卵巢癌治療的一大難題，其發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉移的分子機制尚不完全清楚。近年來大量研究結果顯示，上皮間質轉化(EMT)與腫瘤的浸潤轉移有關，而鋅指轉錄因子Snail及受體酪氨酸激酶Axl均參與EMT過程[1-2]，并且兩者之間可能通過某種信號通路相互聯(lián)系。本文通過檢測上皮性卵巢癌組織中Snail、Axl的表達及分析其與臨床病理特征之間的關系，探討Snail、Axl兩種蛋白在上皮性卵巢癌組織表達的意義。

1 資料與方法

1.1 標本及來源

2011年7月—2012年10月，選取青島大學醫(yī)學院附屬煙臺毓璜頂醫(yī)院手術切除、經病理檢查確診為上皮性卵巢癌組織標本56例，病人年齡25～76歲，平均53.4歲。術前均未行輔助放化療。按照FIGO分期標準，Ⅰ期10例，Ⅱ期4例，Ⅲ期33例，Ⅳ期9例；分化程度：高分化11例，中分化18例，低分化27例；病理類型：漿液性腺癌29例，黏液性腺癌11例，子宮內膜樣腺癌12例，透明細胞癌3例，混合性癌1例；有淋巴結轉移31例，無淋巴結轉移25例。

隨機選取同期卵巢良性上皮性腫瘤組織56例及正常卵巢組織28例作為對照，其平均年齡分別是51.28、52.43歲。所有標本均經40 g/L甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋，4 μm厚度連續(xù)切片。

1.2 主要試劑

兔抗人Snail多克隆抗體、兔抗人Axl多克隆抗體(購自美國Abcam公司)，配制成1∶100、1∶50溶液；辣根過氧化物酶標記羊抗兔IgG，購自上海生工有限公司，配制成1∶100溶液；DAB酶底物顯色試劑盒，購自福建邁新試劑公司；PBS緩沖液(pH 7.4)、二甲苯、枸櫞酸鹽抗原修復液、多濃度梯度乙醇、過氧化氫等試劑由為青島大學醫(yī)學院附屬煙臺毓璜頂醫(yī)院病理科提供。

1.3 Snail、Axl蛋白表達檢測

采用免疫組化SP法，按試劑盒說明書進行操作，用已知的陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 結果判定標準

Snail蛋白主要定位于細胞核，出現(xiàn)黃色顆粒狀染色為陽性；Axl蛋白主要定位于細胞質中，以細胞漿黃色染色為陽性。綜合染色強度和陽性細胞百分率確定表達情況。①染色強度計分：無著色或染色不清，0分；淺黃色，1分；黃色，2分；棕黃色3分。②陽性細胞百分率計分：無陽性細胞，0分；陽性細胞1%～25%，1分；陽性細胞26%～50%，2分；陽性細胞51%～75%，3分；陽性細胞>75%，4分。每張切片計分等于染色強度計分乘以陽性細胞百分率計分，以0～2分為陰性，≥3分為陽性。

1.5 統(tǒng)計學處理

應用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，數(shù)據間比較均采用χ2檢驗或者Fisher’s精確概率法，相關性分析采用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 卵巢組織中Snail、Axl表達比較

Snail在上皮性卵巢癌組織中的陽性表達率為67.9%，其表達明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤組織(25.0%)及正常卵巢組織(21.4%),差異有顯著性(χ2=20.677、16.132,P<0.01)。Axl在上皮性卵巢癌組織、卵巢良性上皮性腫瘤組織和正常卵巢組織陽性表達率分別是58.9%、7.1%、4.0%，差異有顯著性(χ2=31.226、20.596,P<0.05)。

2.2 上皮性卵巢癌組織中Snail、Axl的表達與臨床病理參數(shù)之間的關系

Snail和Axl在FIGO分期晚、分化程度低、原發(fā)灶及有淋巴結轉移的上皮性卵巢癌組織高表達，差異有顯著性(χ2=2.635～12.143，P<0.05)；二者表達高低與病理類型無關(P>0.05)。見表1。

2.3 上皮性卵巢癌組織Snail與Axl表達的相關性

本文38例Snail表達陽性的上皮性卵巢癌組織中，33例Axl表達陽性。Spearman等級分析顯示，Snail及Axl兩種蛋白在上皮性卵巢癌組織中的表達呈正相關(r=0.692，P<0.05)。

表1上皮性卵巢癌組織Snail、Alx的表達與臨床病理特征之間的關系(例)

臨床病理參數(shù)nSnail表達+-χ2值P值Axl表達+-χ2值P值FIGO分期 Ⅰ～Ⅱ1468410 Ⅲ～Ⅳ4232105.3490.02629137.1080.009分化程度 G1113829 G218117108 G32723412.1430.00221611.5940.003發(fā)生部位 原發(fā)灶5638183323 轉移灶423574.1390.0343394.2110.032淋巴結轉移 有31256238 無2513125.2060.02310156.6860.010病理類型 漿液性乳頭狀腺癌29218209 黏液性腺癌117456 子宮內膜樣腺癌128475 透明細胞癌32112 混合性癌1010.9940.331012.6350.105

3 討 論

研究顯示，EMT在胚胎發(fā)育、器官纖維化及惡性腫瘤的侵襲轉移中發(fā)揮重要作用[3]。EMT發(fā)生時會引起上皮細胞的極性喪失、細胞形態(tài)改變、細胞間的黏附力減低、運動轉移能力增強，從而轉變成間質細胞。近年來大量研究顯示，EMT是引起惡性腫瘤侵襲轉移的重要機制，并且在上皮性腫瘤早期階段引起腫瘤浸潤、轉移[4]。

Snail是鋅指轉錄因子家族中的一員，是一種轉錄抑制因子。Snail可通過與E-cadherin的E-box區(qū)域結合抑制E-cadherin表達，導致上皮細胞的黏附力降低，遷移能力增強而促進腫瘤的侵襲轉移[5]。BLECHSCHMIDT等[6]研究顯示， 在卵巢癌的原發(fā)灶中Snail表達增高，E-cadherin表達下調，這一現(xiàn)象在轉移灶中更為明顯，并且二者的表達與卵巢癌的臨床病理分期及預后呈正相關。本文研究結果與其一致，Snail的表達與上皮性卵巢癌臨床分期及發(fā)生部位有關， FIGO分期越晚，Snail的陽性表達率越高，且轉移灶中的陽性表達率高于原發(fā)灶。有研究顯示，Snail在正常胃黏膜組織中低表達，在組織分化級別低、臨床分期晚、有淋巴結轉移及脈管侵犯的胃癌組織中表達增強，并且與胃癌的組織分化程度、臨床分期、有無淋巴結轉移及血管侵犯呈正相關[7]。本文的研究結果顯示，Snail蛋白在上皮性卵巢癌組織中的表達高于卵巢良性上皮性腫瘤及正常卵巢組織，差異有顯著性，提示Snail可能在上皮性卵巢癌發(fā)生過程中起重要作用，Snail可能成為上皮性卵巢癌和卵巢良性上皮性腫瘤鑒別診斷的參考指標。本文結果顯示，Snail在FIGO分期晚、組織分化級別低及有淋巴結轉移的上皮性卵巢癌組織中高表達，而與其病理類型無關。說明Snail的高表達可能與上皮性卵巢癌的浸潤轉移及不良預后有關。Snail有望成為判斷卵巢癌預后的指標之一。

Axl是一種受體酪氨酸激酶，存在于細胞膜上，可通過活化PI3K/Akt、MAPK、NF-κB、STAT3等多種信號途徑參與腫瘤的形成及侵襲、轉移。SUN等[8]研究顯示，Axl及其配體Gas6在人類子宮內膜癌組織中表達明顯高于正常子宮內膜組織。本文研究結果顯示，Axl在上皮性卵巢癌組織中的表達陽性率高于良性上皮性卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織。李玉春[9]研究顯示，上皮性卵巢癌組織和血清Axl濃度明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤組織和健康對照組，且上皮性卵巢癌病人術前血清Axl濃度與組織Axl蛋白表達有一定關系。說明Axl高表達可能提示腫瘤發(fā)生惡變，血清Axl的濃度測定對于鑒別卵巢腫瘤良惡性有一定的價值,可能會成為診斷上皮性卵巢癌新的腫瘤標志物。 RANKIN等[10]研究結果也顯示，Axl在正常卵巢組織中不表達，在FIGO分期晚的卵巢癌組織及轉移灶中較高表達。SHIEH 等[11]研究顯示，Axl表達高低與腫瘤侵襲能力大小密切相關。本文結果顯示，臨床分期晚、有淋巴結轉移的上皮性卵巢癌組織中Axl高表達，并隨著組織分化級別的降低Axl的表達逐漸增強，且在腫瘤原發(fā)病灶的表達高于轉移病灶，但在不同病理類型的上皮性卵巢癌組織中Axl的表達差異無顯著性。說明Axl高表達可能與上皮性卵巢癌的浸潤、轉移有關，進而參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

在EMT誘導惡性腫瘤發(fā)生與發(fā)展的過程中，Snail及Axl均可通過間接誘導EMT發(fā)生的上皮細胞標志物E-cadherin及間質細胞標志物Vimentin表達而誘導腫瘤細胞的浸潤轉移。Snail可抑制E-cadherin的表達，引起上皮細胞黏附力下降、細胞遷移能力增強從而發(fā)生EMT，轉變成間充質細胞。Axl是EMT過程中與Vimentin有關的引起癌細胞遷移的關鍵因子，在腫瘤生長、浸潤、轉移及抗凋亡過程中發(fā)揮作用。ZHANG等[12]提出，Axl參與了乳癌EMT，是EMT的下游作用產物，并受Snail家族中Twist、Snail、Zeb2等轉錄調節(jié)因子的調節(jié)。本文的研究結果顯示，Snail及Axl在上皮性卵巢癌組織中的表達呈正相關。說明Snail、Axl可能在EMT促進腫瘤細胞浸潤轉移中存在某些潛在的相互作用機制，兩種蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中可能起著相輔相成共同促進的作用。

綜上所述，Snail、Axl的異常高表達與上皮性卵巢癌的侵襲轉移密切相關。

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