中性粒細胞明膠酶相關載脂蛋白和癌胚抗原在直腸癌診斷和預后中的意義

蘇傳偉

(深圳市觀瀾人民醫院普外科,廣東 深圳 518000)

直腸癌是消化道常見的惡性腫瘤之一，盡管隨著先進手術器械在臨床上的廣泛應用以及外科手術經驗的不斷積累，直腸癌術后生存率明顯提高，但直腸癌往往早期臨床癥狀體征不明顯，起病隱匿，患者就診時往往已處于疾病的中晚期。而目前臨床上用于直腸癌診斷和預后的生物學標志物都十分有限[1]。因此，尋找相關的生物學標志物是目前研究的熱點[2]。本研究旨在探討中性粒細胞明膠酶相關載脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)在直腸癌組織中的表達及血清中NGAL和癌坯抗原(Carcinoembryonic antigen，CEA)水平，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集深圳市觀瀾人民醫院2007年12月至2009年12月間收治的直腸癌患者45例，其中男22例，女23例，年齡38～79(58.6±7.1)歲；有淋巴結轉移26例，未轉移19例；高中分化者20例，低分化者25例；按照Dukes分期分A、B、C、D四期，其中(A+B)期18例，(C+D)期27例；浸潤深度：突破肌層25例，未突破肌層20例；腫瘤的大小：<5 cm 19例，≥5 cm 26例。選取同期收治的30例直腸息肉患者進行對照。其中男16例，女14例；年齡34～65(57.9±7.5)歲；直腸癌組和直腸良性腫瘤組在年齡、性別方面比較無統計學意義，具有可比性。所有患者術前均未進行過化療與放射治療，術后所有患者定期進行門診復查。隨訪工作截止于2012年11月。所有患者均具有完備的隨訪資料。

1.2方法 所有患者術前進行血清NGAL和CEA水平測定，CEA檢測采用電化學發光法，嚴格按照羅氏公司提供的試劑盒操作說明進行。CEA參考值為0～5 μg/L，血清NGAL水平采用雙抗體夾心酶聯免疫分析進行檢測。術后組織切片標本采用鏈酶卵白素-生物素過氧化物酶法(SP法)測定NGAL的表達，兔抗人NGAL單克隆抗體均來自美國SANTA CRUZ公司，SP9001試劑盒和二氨基聯苯胺試劑盒均來自北京中杉生物工程公司。嚴格按照明書步驟進行操作。

1.3結果判定及觀察指標 NGAL在細胞質中呈現棕黃色染色顆粒為陽性細胞。光學顯微鏡下，計算出每10個高倍視野(×400)中染色為陽性的腫瘤細胞百分率，顯色細胞數(染色陽性百分比)在20%以上即為陽性表達作為統計分析的標準[3]。通過測定組織中NGAL表達的陽性率及術前血清NGAL和CEA水平，探討三者與臨床病理因素、年齡、性別、有無淋巴結轉移、浸潤深度、腫瘤大小、分化程度、臨床分期、脈管侵犯的關系。

2 結 果

2.1直腸癌組和直腸良性腫瘤組組織NGAL的表達及血清NGAL和CEA水平的比較 NGAL的表達主要定位于細胞的胞質內，呈棕黃色或棕褐色，直腸癌的陽性表達率為84.44%(38/45)，直腸良性腫瘤的陽性表達率為33.3%(10/30)，差異有統計學意義(P<0.05)。術前兩組血清NGAL和CEA水平進行比較，差異均有統計學意義(P<0.05)(表1)。

表1 直腸癌組和直腸良性腫瘤組組織NGAL的表達及血清NGAL和CEA的水平的比較

2.245例直腸癌組織NGAL的表達及術前血清NGAL和CEA的水平與直腸癌臨床病理因素的關系 直腸癌組織NGAL異常表達及術前血清NGAL和CEA的高水平與直腸癌腫有無淋巴結轉移、浸潤深度、腫瘤的大小、分化程度、臨床分期、脈管侵犯等臨床病理因素有關，差異有統計學意義(P<0.05)；與年齡、性別差異無統計學意義(P>0.05)(表2)。

2.3復發轉移組與無復發轉移組血清NGAL和CEA水平的比較 對45例直腸癌患者跟蹤隨訪3年，根據術后患者有無復發轉移分為兩組，其中有復發轉移患者14例，無復發轉移患者31例，兩組血清NGAL和CEA的水平進行比較，差異有統計學意義(P<0.05)(表3)。

表2 NGAL的表達及術前血清中NGAL和CEA的水平與直腸癌臨床病理因素的關系

表3 復發轉移組與無復發轉移組血清中NGAL和CEA水平的比較

3 討 論

NGAL在人中性粒細胞內于1993年首先被發現，是Lipocalin家族的一個新成員，存在于中性粒細胞中的過氧化物酶陰性顆粒中，定位于人染色體9q34上，包括7個外顯子和6個內含子，由N端的310-螺旋，C端的α-螺旋和中間的8段反平行的β-折疊所構成，研究表明，NGAL與胚胎發育、炎癥、信號轉導、趨化作用及腫瘤的浸潤轉移關系密切[4-5]。

CEA是一種糖蛋白，相對分子質量為180×103，具有使腫瘤細胞逃避免疫攻擊的作用。CEA在結直腸癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌患者均升高，目前血清CEA檢測主要用于早期診斷、輔助判斷預后及治療效果和監測復發轉移的指標，研究表明，血清CEA檢測值是發現復發的理想指標，作為一種無創性檢查方法其敏感性高于X線和結直腸鏡[6-7]。

本研究結果顯示，直腸癌的陽性表達率顯著高于直腸良性腫瘤，直腸癌組織NGAL的表達及術前血清NGAL和CEA水平與有無淋巴結轉移、浸潤深度、腫瘤的大小、分化程度、臨床分期、脈管侵犯有關(P<0.05)；提示NGAL和CEA水平的高低與腫瘤細胞的生物學特性相關。對直腸癌病情評估具有一定的指導意義。本研究進一步研究顯示，有轉移患者血清NGAL和CEA的水平顯著高于無復發轉移患者，提示聯合檢測NGAL和CEA的水平可以作為直腸癌復發轉移、判斷預后的指標。與相關研究結果一致[8-10]。

綜上所述，聯合檢測NGAL和CEA水平用于直腸癌篩查診斷和預后評價，具有重要的臨床應用前景，可以為直腸癌的診治制訂更加積極、合理、有效的治療方案提供理論依據，還可以作為評估直腸癌的生物學行為、判斷預后的重要指標之一，但有關的作用機制還有待做進一步的深入研究。

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