足細胞標記蛋白及上皮鈣黏素在糖尿病腎病中的表達及分析

楊 邱，李 亞

(深圳市人民醫院內科,廣東 深圳 518000)

隨著老齡化社會的到來以及人們生活、飲食習慣的改變，糖尿病發生率越來越高。糖尿病本身并不導致患者死亡，但是如果血糖控制不理想，引起微小血管病變，則對患者的健康和生命造成嚴重威脅。其中糖尿病腎病就是十分常見且嚴重的并發癥之一[1]。本研究通過對糖尿病腎病患者足細胞標記蛋白(podocalyxin,PCX)及其他指標表達情況進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2012年1月至2012年10月期間深圳市人民醫院腎內科行腎活檢的糖尿病腎病患者100例，其中男53例、女47例，年齡22～68(49.2±5.6)歲。所有患者均符合《1999年WHO對糖尿病腎病的診斷標準》[2]，且排除其他系統嚴重疾病，排除原發腎病，感染性疾病。所有患者近期均無酮癥酸中毒發生。測定所有患者的24 h尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rates，UAER)和血清肌酐(serum creatinine，SCr)水平并據此將患者分為4組。A組28例，男16例、女12例，年齡22～67(49.2±5.3)歲；UAER<30 g/24 h，SCr≤135 μmol/L。B組30例，男15例、女15例，年齡23～68(49.2±5.2)歲；UAER(30～299) mg/24 h，SCr≤135 μmol/L。C組22例，男12例、，女10例，年齡22～68(49.2±5.7)歲；UAER≥300 mg/24 h，SCr≤135 μmol/L。D組20例，男10例、女10例，年齡23～68(49.1±5.3)歲；UAER≥300 mg/24 h，SCr>135 μmol/L。另外，選取同期健康體檢者20例作為對照組，男10例、女10例，年齡22～68(49.2±5.2)歲。5組人群在性別、年齡等方面均差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1標本采集 搜集5組人群清晨第一次排尿的中段尿液10 mL，以5 cm離心半徑，轉速2000 r/min離心10 min(離心機選擇北京時代北利離心機有限公司生產的GT10-1)，拋棄上清，留取200 μL尿沉渣，保存于-20 ℃環境，以備測定尿液PCX。在同一日留取24 h尿液，進行UAER和尿蛋白定量測定。取清晨空腹肘靜脈血2 mL，待測定糖化血紅蛋白(hemoglobin A1c，HbA1c)水平和血清可溶性E-鈣黏素水平。

1.2.2PCX檢測 采用PCX單抗包被在酶標板上，標準品與樣品中的PCX與單抗結合，在加入酶標抗體后可以在板上形成免疫復合物，隨后加入酶底物四甲基聯苯胺，出現藍色后再加入終止液，顏色轉為黃色。使用上海精科儀器公司生產UV765紫外可見分光光度計吸光度進行測定，計算得到蛋白濃度。

1.2.3其他指標 采用免疫分析法測定所有受試者HbA1c水平；采用酶聯免疫吸附劑測定法測定所有受試者血清可溶性上皮鈣黏素水平。

2 結 果

2.1糖尿病腎病患者與對照組病程、HbA1c水平的比較 B組患者病程顯著長于A組，C、D兩組患者病程顯著長于A、B兩組(P<0.05)，C、D兩組病程之間差異無統計學意義(P>0.05)；A、B、C、D組患者HbA1c水平均顯著高于對照組(P<0.05)，但此四組患者之間差異無統計學意義(P>0.05)(表1-1、表1-2)。

表1-1 糖尿病腎病患者與對照組病程、HbA1c水平的比較

表1-2 糖尿病腎病患者與對照組病程、HbA1c水平多重比較結果

2.2糖尿病腎病患者與對照組SCr、UAER、尿蛋白水平的比較 B、C、D三組SCr均顯著高于A組及對照組，且D組顯著高于B、C兩組(P<0.05)，而A組與對照組之間以及B、C兩組之間差異無統計學意義(P>0.05)；糖尿病腎病患者UAER水平顯著高于對照組，且B、C、D組顯著高于A組，C、D組顯著高于B組(P<0.05)，而C、D兩組之間差異無統計學意義(P>0.05)；尿蛋白定量分析，B、C、D組顯著高于A組和對照組，且C、D組顯著顯著高于B組(P<0.05)，而A組和對照組之間以及C、D組之間差異無統計學意義(P>0.05)(表2-1、表2-2)。

2.3糖尿病腎病患者與對照組PCX、上皮鈣黏素水平的比較 糖尿病腎病患者PCX、上皮鈣黏素水平均顯著高于對照組，且B、C、D組顯著高于A組，C、D組顯著高于B組(P<0.05)，C、D兩組之間差異無統計學意義(P>0.05)(表3-1、表3-2)。

表2-1 糖尿病腎病患者與對照組SCr、UAER、尿蛋白水平的比較

表2-2 糖尿病腎病患者與對照組SCr、UAER、尿蛋白水平多重比較結果

表3-1 糖尿病腎病患者與對照組PCX、上皮鈣黏素水平的比較

表3-2 糖尿病腎病患者與對照組PCX、上皮鈣黏素水平多重比較結果

3 討 論

糖尿病腎病是臨床常見的糖尿病并發癥。在病變早期，主要表現為腎小球內壓力升高，灌注壓和濾過率提高，逐漸出現腎小球毛細血管基膜增厚以及系膜基質增多，直至最終發展成為腎小球硬化[3]。在臨床上對糖尿病腎病患者進行干預的關鍵在于早期發現，早期治療。但是臨床中，傳統用來評價腎臟損害的指標往往受到生理狀態、病理狀態以及藥物等因素的干預而缺乏準確性。

足細胞是高度分化的，緊貼于腎小球基膜外的一層疏松細胞，也是腎小球基膜濾過屏障的重要構成組織，同時也是腎小球各種損傷的靶器官[4]。隨著研究的深入以及人們關注度的增加，足細胞損傷在糖尿病腎病病程中的作用越來越受到關注。因此，有學者提出通過PCX對糖尿病腎病患者腎小球損害情況進行判斷[5]。作為最早發現的足細胞分化成熟的標志性蛋白，PCX由腎小球內皮細胞以及足細胞合成，并在足細胞分化成熟的過程中始終固定于足細胞頂膜，對足細胞骨架的形成和維持均具有重要的作用[6]。而且PCX帶有少量負電荷，可以作為腎小球基膜的電荷屏障，通過電荷之間的排斥作用，維持足突間的結構。當腎臟受損早期，足細胞頂膜區的PCX可脫落進入尿液中，從而使尿液中PCX水平增加，即PCX升高可早于足細胞從基膜脫落；隨著腎臟損傷的進一步增加，脫落的足細胞碎片中的PCX也會進入尿液，尿液中PCX水平會進一步升高。因此，通過尿液PCX檢測，可以在早期發現糖尿病腎病，并對其嚴重程度有所判斷[7]。

血管內皮是機體最大也是最重要的內分泌器官，鈣黏素可以在細胞間正常連接中發揮重要的維護作用。上皮鈣黏素對于維持內皮細胞的特異性、完整性以及極性都有重要的意義，僅在血管內皮細胞表面表達，同時也是導致內皮損傷和血管通透性增高的各因素作用的靶位。因此當上皮鈣黏素水平增高時，往往可以間接判斷微血管內皮細胞的受損情況[8]。

在本研究中A、B、C、D 4組腎功能損害程度逐漸加重，其PCX、上皮鈣黏素水平與健康體檢者相比均顯著升高，且B、C、D組顯著高于A組，C、D組顯著高于B組，說明在UAER和SCr出現異常之前，患者的PCX、上皮鈣黏素水平已經發生了改變，且隨著腎臟損害程度的加重，這種改變越發顯著。

因此，可以認為PCX、上皮鈣黏素表達水平可以在糖尿病腎病早期反映腎臟損害程度，其敏感性優于UAER和SCr。

[1] 錢曉玲,閆彩鳳,張蕊,等.初診2型糖尿病患者尿PCX和Nephrin及單核細胞趨化蛋白-1聯合檢測對早期糖尿病腎病的預測價值[J].臨床醫藥實踐,2012,21(12):933-938.

[2] Hanley AJ,Karter AJ,Williams K,etal.Prediction of type 2 diabetes mellitus with alternative definitions of the metabolic syndrome:the Insulin Resistance Atherosclerosis Study[J].Circulation,2005,112(24):3713-3721.

[3] Lin MH,Chen HY,Liao TH,etal.Determination of time-dependent accumulation of d-lactate in the streptozotocin-induced diabetic rat kidney by column-switching HPLC with fluorescence detection[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,2011,879(29):3214-3219.

[4] 董婷,袁偉杰.腎素-血管緊張素系統活性亢進參與糖尿病腎病足細胞的損傷[J].中華腎臟病雜志,2012,28(4):341-345.

[5] 羅長青,張春.糖尿病腎病足細胞損傷機制研究進展[J].臨床腎臟病雜志,2012,12(5):199-201.

[6] 龍香菊.糖尿病腎病足細胞損傷機制研究進展[J].內科,2009,4(4):629-632.

[7] 劉志紅,李世軍,陳朝紅,等.糖尿病腎病患者足細胞病變的臨床病理特征[J].腎臟病與透析腎移植雜志,2003,12(2):144-148.

[8] 陳立平,周巧玲,彭衛生,等.足細胞超微結構及其相關分子表達變化在糖尿病腎病發病中的作用[J].中南大學學報:醫學版,2007,32(4):620-625.