鍵合纖維素手性固定相拆分奧美拉唑對映體

邵 紅

（鄭州人民醫院，河南 鄭州 450000）

鍵合纖維素手性固定相拆分奧美拉唑對映體

邵 紅

（鄭州人民醫院，河南 鄭州 450000）

目的 建立采用鍵合纖維素手性固定相拆分奧美拉唑對映體的高效液相色譜法。方法 在正相條件下，采用Chiralpak IB色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）對奧美拉唑對映體進行拆分，考察了流動相組成、流速和柱溫對對映體分離的影響。結果 確立了最佳拆分條件：流動相為正己烷-乙醇（90∶10），流速0.8 mL/min，檢測波長280 nm，柱溫25 ℃。結論 本法簡便，準確，適用于奧美拉唑對映體的拆分。

高效液相色譜；鍵合纖維素手性固定相；奧美拉唑；對映體拆分

奧美拉唑是第一代苯并咪唑類質子泵抑制劑，主要用于胃潰瘍、十二指腸潰瘍和反流性食管炎等疾病。分子中含有1個手性硫原子，存在1對對映體，其對映體在藥動學方面存在明顯差異，S-對映體抑酸作用比消旋體更強，更持久[1,2]。目前，采用高效液相色譜法對奧美拉唑進行拆分的報道主要有手性固定相法[3,4]和柱前衍生化法[5]。尚未有采用Chiralpak IB色譜柱對其進行拆分的報道。本文采用Chiralpak IB色譜柱對奧美拉唑對映體進行拆分，同時考察了影響分離的因素：流動相組成、流速和柱溫。

1 儀器與試藥

Agilent HP1100高效液相色譜儀（1100VWD紫外可見檢測器，1100自動進樣器，HP化學工作站）；Chiralpak IB色譜柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm；日本大賽璐公司）；BP211D1/10萬天平（德國Sartorius公司）；奧美拉唑（外消旋體，中國食品藥品檢定研究院）；正己烷、異丙醇、乙醇和三氯甲烷（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Chiralpak IB柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：正己烷-乙醇（90∶10）；流速：0.8 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：25 ℃。

2.2 樣品溶液的制備與測定

精密稱取奧美拉唑1.0 mg置10 mL容量瓶中用乙醇溶解并定容至刻度，得濃度為0.1 mg/mL的樣品溶液，經0.45 μm微孔濾膜過濾并超聲脫氣后取10 μL進樣，按所選色譜條件操作，色譜結果見圖1。

圖1 奧美拉唑對映體手性拆分色譜圖

3 討 論

3.1 流動相組成對分離的影響

在固定流速為0.8 mL/min，柱溫為25 ℃，流動相正己烷的比例為90%的條件下，分別選擇乙醇和異丙醇為流動相改性劑，考察醇類流動相改性劑對分離的影響（表1）。由表1可知，采用乙醇為流動相改性劑時，奧美拉唑對映體的分離度較大。Chiralpak IB為5 μ硅膠表面共價鍵合有纖維素-三（3，5-二甲苯基氨基甲酸酯）的色譜柱，其氨基及羰基可以與對映體和醇類形成氫鍵作用。與異丙醇相比，乙醇和固定相形成氫鍵的能力較弱，對對映體和固定相的氫鍵作用點競爭較弱，有利于對映體與固定相之間形成非對映體結合物，從而有利于分離。

此外，由于Chiralpak IB柱將纖維素衍生物共價鍵合在硅膠基質上，從而擁有更廣泛的溶劑耐受性。本文考察了三氯甲烷為流動相改性劑時對分離的影響。結果表明，隨著三氯甲烷含量的減少，流動相的洗脫能力降低，容量因子逐漸增大，分離因子和分離度也隨之增大。與乙醇為流動相改性劑相比，其分離度較小。因此，選擇乙醇為流動相改性劑。

表1 醇的種類對分離的影響

3.2 流動相改性劑比例對分離的影響

固定流速為0.8 mL/min，柱溫為25 ℃，選擇乙醇為流動相改性劑，考察乙醇比例對分離的影響（表2）。由表3可知，隨著乙醇含量的增加，流動相和固定相的分子作用增強，流動相的洗脫能力增強，使對映體的柱保留減弱，容量因子和分離因子下降，分離度也隨之降低。乙醇含量在5%時，分離度最大，但出峰時間過長，影響分離效率，故選擇流動相為正己烷-乙醇（90∶10）。

表2 醇的比例對分離的影響

3.3 流速對分離的影響

在流動相為正己烷-乙醇（90∶10），柱溫為25 ℃的條件下，考察流速對分離的影響。結果表明，隨著流速的增加，分離度逐漸減小，在流速為0.4 mL/min時分離度達到最大。隨著流速的增加，對映體與固定相的作用時間縮短，不利于對映體與固定相間形成非對映體結合物，故分離度減小。綜合考慮出峰時間和分離度，選擇流速為0.8 mL/min。

3.4 柱溫對分離的影響

固定流動相為正己烷-乙醇（90∶10），流速為0.8 mL/min，考察柱溫（20～35 ℃）對分離的影響。結果表明，隨著柱溫的升高，對映體與固定相之間的結合能力減弱，保留時間變短，分離度降低。低溫時，對映體與固定相形成的非對映體結合物比高溫時穩定，有利于分離。由于25 ℃接近室溫，且分離度較好，故選擇25 ℃為柱溫。

4 結 論

本文采用Chiralpak IB色譜柱，在正相條件下對奧美拉唑對映體進行拆分，考察了影響分離的因素：流動相組成、流速和柱溫。本法簡便，準確，適用于奧美拉唑對映體的拆分。

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：1671-8194（2014）08-0039-02