不同產地馬齒莧總生物堿的含量測定

扈本荃，徐玥，高蘇亞，張宇潔，張韞，王黎，唐前文

(西安醫學院 藥學院，陜西 西安 710021)

馬齒莧為馬齒莧科植物馬齒莧(Portulaca oleracea L.)的全草，多以其干燥地上部分入藥，性味酸寒，具有清熱解毒、涼血止血之功效。臨床多煎湯內服或并用鮮品搗汁外敷，用于熱毒血痢、癰腫疔瘡、濕疹、丹毒、蛇蟲咬傷、便血、痔血、崩漏下血等［1］，因此馬齒莧具有“天然抗生素”的美稱。

馬齒莧在2010 版《中國藥典》中具有鑒別、炮制、功能主治、用法用量等明確的規定，卻對馬齒莧中的有效成分及含量無明確要求。從20 世紀60 年代至今，國內外學者已從馬齒莧中提出許多化學成分，主要包括有機酸類、生物堿類、黃酮類、萜類、多糖類等多種成分。在這些活性成分中，生物堿是新興的研究熱點之一，很多生物堿成分具有較強的藥理作用，例如抗氧化作用，抗腫瘤作用等［2-3］。

本文對不同產地馬齒莧中的生物堿的含量進行測定，旨在考察產地對馬齒莧中生物堿含量的影響，為馬齒莧質量標準的修訂提供依據。

1 實驗部分

1.1 材料與儀器

馬齒莧藥材(產地貴州、四川、北京、貴州，經西安醫學院生藥教研室張彥副教授鑒定);溴甲酚綠、咖啡因、鄰苯二甲酸氫鉀等試劑均為分析純;實驗用水為純化水。

GR-202 型分析天平;UV-762 型紫外可見分光光度計;FW200A 型高速萬能粉碎機;DZKW-D 數顯恒溫水浴鍋;R203B 型旋轉蒸發儀;SHZ-D 循環水式真空泵;PHS-3C 型pH 計。

1.2 溶液的配制

1.2.1 對照品溶液 咖啡因醇溶液的配制，精密稱取咖啡因標準品50.87 mg，置于50 mL 容量瓶，加無水乙醇定容，搖勻，質量濃度為0.990 6 mg/mL。

1.2.2 溴甲酚綠緩沖液的配制 精密稱取溴甲酚綠0.125 0 g，加入80 mL 小燒杯中，用NaOH 溶液12.50 mL 溶解后，加入鄰苯二甲酸氫鉀2.55 g，加少量蒸餾水溶解后，轉移至250 mL 容量瓶中，用蒸餾 水 定 容 至 刻 度，調 節 pH = 4.4，濃 度 為0.72 mmol/L。

1.2.3 供試品溶液的配制 取馬齒莧粗粉約35 g，置于索式提取裝置中，用180 mL 無水乙醇連續回流提取16 h?；厥找掖己髮⑺媒嗟谷霟?，用蒸餾水稀釋，再用HCl 溶液調節pH 值為3 ～4，攪拌均勻，抽濾。濾液中加入10%的氨水，調節pH 值8～9。用氯仿萃取二次，合并氯仿萃取液。蒸餾，回收氯仿，得黃色液體即為生物堿的粗品。

將生物堿粗品溶于400 mL 水中，用6 mol/L HCl 溶液調節pH 值3 ～4。用乙醚萃取洗滌溶液2次，每次15 mL，棄去乙醚層。水層用10%的氨水調節pH 值10 左右。再用氯仿萃取2 次，合并氯仿層，回收氯仿，即得生物堿的精制品，將其定容為5 mL。

1.3 標準曲線的繪制

精密量取咖啡因乙醇溶液于0，0.5，0.8，1.1，1.4，1.7，2.0，2.3，2.6 mL 于0，1，2，3，4，5，6，7，8號10 mL 容量瓶中，再分別加入1 mL 溴甲酚綠緩沖液和2 mL 無水乙醇溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min。用0 號容量瓶中溶液作空白對照，以全波長掃描所得最大波長629 nm 為測定波長，測定60 min 內溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程y =2.514 9x+0.016 3，r=0.999 3。

2 結果與討論

2.1 精密度測定

精密量取0.3 mL 供試品溶液于10 mL 容量瓶中，加入1 mL 溴甲酚綠緩沖液和2 mL 無水乙醇溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min。另取10 mL 容量瓶依法配制空白對照，放置15 min。進行6 次含量測定，結果A =0.366，0.366，0.366，0.365，0.365，0.366，其RSD=0.1%，儀器精密度非常良好。

2.2 重復性實驗

分別精密量取0.3 mL 6 份供試品溶液于10 mL容量瓶中，配制溶液與空白對照，放置15 min 后，對其進行含量測定，吸光度分別為0.392，0.364，0.364，0.366，0.364，0.365，計算生物堿含量，其RSD=0.1%。

2.3 穩定性實驗

精密吸取0.3 mL 供試品溶液于10 mL 容量瓶中，配制溶液與空白對照，放置15 min 后，每隔15 min測量1 次，測量1 h。結果A =0.399，0.409，0.415，0.417，RSD=1.9%。

2.4 加樣回收率測定

按照馬齒莧總生物堿提取方法，稱量咖啡因標準品30 mg，加入35 g 貴州馬齒莧粗粉中，混勻提取。同法操作提取6 份供試品溶液。

精密吸取0.3 mL 供試品溶液于10 mL 容量瓶中，配制溶液與空白對照，放置15 min 進行含量測定，計算生物堿含量，結果見表1。

表1 加樣回收率測定(n=6)Table 1 Result of recovery experiment(n=6)

2.5 樣品測定

精密量取0.3 mL 貴州、四川、北京、西安產馬齒莧供試品溶液于10 mL 容量瓶中，配制溶液與空白對照，放置15 min 后進行含量測定，結果見表2。

表2 不同產地馬齒莧總生物堿含量(n=6)Table 2 Result of alkaloid content test (n=6)

由表2 可知，4 種產地馬齒莧總生物堿含量為:貴州0.090%，四川0.066%，北京0.076%，西安0.059%，含量大小為貴州＞北京＞四川＞西安。

王仲英［4］用乙醇回流法對太原馬齒莧總生物堿回流提取9 h，其含量檢測結果為21.90 mg/kg，與本實驗結果存在明顯差距，在不排除提取時間影響外，間接地反映了產地對其含量的影響。王仲英實驗結果雖然遠小于本實驗，但謝彥用［5］超生輔助酶解法提取出的濱州馬齒莧總生物堿含量為0.36%，又比本實驗含量最高的貴州多了3 倍。

馬齒莧在2010 版藥典中具有鑒別、炮制、功能主治、用法用量等明確的規定，卻對總生物堿含量無明確要求，但實驗結果表明，不同產地馬齒莧總生物堿含量具有明顯差異，選擇不同產地馬齒莧期臨床療效將有所不同，給臨床用藥帶來一定困惑，因此建議《中國藥典》在修訂時，能夠對馬齒莧藥用成分含量做出明確規定，以保證臨床療效的一致，便于馬齒莧在臨床的更好應用。

3 結論

實驗測得不同產地馬齒莧總生物堿含量分別為貴州0.090%，四川0.066%，北京0.082%，西安0.059%，結果表明，不同產地馬齒莧含量具有明顯差異，其差異可能因不同產地氣候、種植方法等差別而不同，具體結論有待進一步研究。

［1］ 閆光英.馬齒莧［J］.國土綠化，2013，5(7):53-54.

［2］ 李玉萍，曾憲偉，操家璇，等.馬齒莧生物堿對A-549細胞的抑制作用［J］.江西食品工業，2009(1):24-25.

［3］ 雷帆，向蘭，藍嘉琪，等.馬齒莧中新酰胺類生物堿的神經元保護作用活性篩選和機理研究［C］//2008 年全國抗衰老與老年癡呆學術會議論文集.2008.

［4］ 王仲英，李香蘭.馬齒莧總生物堿的測定［J］.太原理工大學學報，2001，32(2):197-198.

［5］ 謝彥.超聲輔助酶解法提取馬齒莧總生物堿［J］.濱州學院學報，2012，27(6):63-66.