杜燕華，黃學勇，王海峰，尤愛國，胡小寧，康 鍇，許汴利

2010年，我國首次從河南省信陽市一名病人血清中分離出新布尼亞病毒，并證明該病毒是引起發熱伴血小板減少綜合征的病原體，但目前傳染源和傳播途徑還不清楚。河南省信陽市一直是發熱伴血小板減少綜合征的主要發病地區，根據流行特征、臨床癥狀及生物學特性研究發現該新發傳染病具有蟲媒傳染病流行傳播的特點，并存在動物傳染源或/和儲存宿主的可能，因而本研究選取河南省主要發病地區信陽市，開展動物中新布尼亞血清抗體的調查，現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1標本采集 選擇商城縣和光山縣曾經有病例感染過的地點作為調查點，結合當地地理景觀特點以及與人類活動接觸密切程度，選擇鼠、牛、羊、豬和狗這5種當地廣泛存在的動物作為調查對象。鼠采用籠夜法捕獲后，用注射器取心臟血，其余動物由獸醫配合取全血，分離血清后保存于-20 ℃備用。

1.2核酸提取及熒光RT-PCR檢測 取動物血清140 μL，采用QIAamp Viral RNA Mini Kit(Lot 52904)，按試劑盒說明書進行，最終收集50 μL RNA提取液。用新布尼亞病毒RNA檢測試劑盒(河南省疾病預防控制中心和與北京華大吉比愛生物技術有限公司聯合研制)進行PCR擴增： 50 ℃逆轉錄30 min；95 ℃預變性3 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火45 s并采集熒光(設置儀器收集FAM熒光信號)，40個循環。檢測結果Ct值≤35為陽性；無Ct值為陰性；Ct值在35～40為可疑樣品，需重新檢測。

1.3血清抗體檢測 動物血清用樣品稀釋液1∶10稀釋后，連同陰性、陽性對照加入酶標板中，同時設立空白對照，用發熱伴血小板減少綜合征(SFTS)布尼亞病毒抗體檢測試劑盒(購自無錫鑫連鑫生物醫藥科技有限公司)，按說明書進行操作。結果需滿足陽性對照A值≥1.5;陰性對照A值0.05，若試驗數據不符合上述試驗有效性標準，則需重復試驗。Cutoff值為陰性對照平均A值×2.1，若陰性對照平均A值<0.05，按0.05計算；若陰性對照平均A值≥0.05，按實際A值計算。檢測結果≥cutoff值判為陽性，檢測結果

1.4資料分析 用SPSS 11．5進行數據統計；采用χ2檢驗，P<0．05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1調查點標本采集情況 2012年7-9月在河南省信陽市商城縣和光山縣2個調查點采集動物血液標本315份，其中鼠血94份(商城縣58份，光山縣36份)、牛血63份(光山縣63份)、羊血59份(商城縣59份)、豬血56份(商城縣28份，光山縣26份)、狗血40份(商城縣10份，光山縣30份)。

2.2核酸檢測結果 將采集到的315份動物血清標本，用新布尼亞病毒RNA檢測試劑盒檢測，陽性對照和陰性對照均成立，標本檢測結果均為陰性。

2.3血清抗體檢測結果 將采集到的312份動物血清標本，用雙抗原夾心ELISA方法檢測新布尼亞病毒總抗體，陽性141份，總體陽性率為45.19%，分別為鼠1.06%(1/94)、牛100.00%(63/63)、羊76.27%(45/59)、豬3.57%(2/56)、狗75.00%(30/40)(見圖1)。5種動物(鼠、牛、羊、豬和狗)的新布尼亞病毒總抗體陽性率比較，χ2=226.829，P<0.01，有統計學意義。

圖15種動物血清新布尼亞病毒抗體檢測結果

Fig.1Detectionofnovelbunyavirusantibodyin5kindsofanimals

3 討 論

新布尼亞病毒是新發傳染病發熱伴血小板減少綜合征的主要病原體，經基因組進化親緣關系分析證實屬于布尼亞病毒科白蛉病毒屬，該病毒基因組由大(L)、中(M)、小(S) 3個單股負鏈RNA片段組成，電鏡觀察病毒形態呈球形，直徑80～100 nm，形態學上和基因組特征都與布尼亞病毒科病毒相似；而布尼亞病毒科除漢坦病毒外，其余感染人的病毒大多是由蟲媒傳播的[1]。根據發熱伴血小板減少綜合征的流行特征、病例臨床癥狀、疾病進程規律、新布尼亞病毒生物學特性以及同科病原如裂谷熱病毒、蛉熱病毒、克里米亞─剛果出血熱病毒等取得研究成果相比較，該新發傳染病具有蟲媒傳染病流行傳播的特點[2-3]，并且在河南省信陽市發病地區的蜱、牛虻中也檢測并分離到了新布尼亞病毒[4]，在江蘇省的牛、羊等動物血清中也有檢測到新布尼亞病毒抗體的報道[5]，推斷該新發傳染可能存在動物傳染源或/和儲存宿主，本次調查也證實了在我國新布尼亞病毒的主要發病區域河南省信陽市動物中存在病毒抗體。

我國目前河南、湖北、山東、江蘇、安徽、浙江、遼寧等省已有發熱伴血小板減少綜合征病例報道，且越來越多省份和地市也陸續發現了類似病例，已經受到了各級政府和衛生行政部門及社會的廣泛關注，2010年9月8日，國內媒體報道河南省信陽市商城縣“蜱蟲叮咬致人死亡事件”，引起社會各界廣泛關注，甚至一度造成了局部恐慌[6-7]。河南省信陽市是我國目前發熱伴血小板減少綜合征疫情最嚴重并持續流行的地區，根據2007-2011年河南省發熱伴血小板減少綜合征的監測結果，信陽市占全省報告病例的98%以上，商城縣和光山縣是報告發病數最多的縣區[8]，因而本次研究選擇商城縣和光山縣病例曾經感染過的地點作為調查點，結合當地地理景觀特點以及與人類活動接觸密切程度，選擇了鼠、牛、羊、豬和狗5種動物作為調查對象，結果顯示動物血清新布尼亞病毒抗體總陽性率(33.56%)，顯著高于江蘇省(11.06%)[5]，可能與人群發病率的高低有相關性。對于調查的鼠、牛、羊、豬和狗5種動物，新布尼亞病毒總抗體陽性率有顯著差異，牛、羊和狗的抗體陽性率遠高于鼠和豬。提示牛、羊和狗感染過新布尼亞病毒，牛、羊和狗都是家養動物，但并未發現有明顯的臨床癥狀，可能為隱性感染，在對信陽市的兩個調查點采樣時發現，目前牛、羊和狗多散養，且動物身上攜帶蜱或有牛虻叮咬史，因而存在成為新布尼亞病毒儲存宿主的可能。雖然動物血清標本中未檢測到新布尼亞病毒，但是也不能排除其成為儲存宿主的可能，如乙腦病毒的儲存宿主豬感染病毒后并無腦炎的臨床癥狀，若錯過了急性感染期的病毒血癥期再采血，就檢測不到病毒核酸[9]，而新布尼亞病毒感染動物也存在這種可能，但要證實這種可能尚需要長期開展對動物宿主的監測以及更深入的病毒感染實驗研究。

參考文獻：

[1]Xu BL. Discovery, understanding and inspiration for severe fever with thrombocytopenia syndrome caused by a novel Bunyavirus[J]. Chin J Prev Med, 2012, 46(2): 99-102. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2012.02. 001 (in Chinese)

許汴利. 新布尼亞病毒感染致發熱伴血小板減少綜合征的發現、認識與啟示[J]. 中華預防醫學雜志, 2012, 46(2): 99-102.

[2]Xu BL, Liu LC, Huang XY, et al. Metagenomic analysis of fever, thrombocytopenia and leukopenia syndrome (FTLS) in Henan province, China: discovery of a novel bunyavirus[J]. PLoS Pathog, 2011, 7: 1-10. DOI: 10.1371/journal.ppat.1002369

[3]Yu XJ, Liang MF, Zhang SY, et al. Fever with thrombocytopenia associated with a novel bunyavirus in China[J]. N Engl J Med, 2011, 364(16): 1523-1532. DOI: 10.1056/NEJMoa1010095

[4]Liu Y, Huang XY, Du YH, et al. Survey on ticks and detection of new bunyavirus in some vector in the endemic areas of fever．thrombocytopenia and leukopenia syndrome(FTLS)in Henan province[J]. Chin J Prev Med, 2012, 46(6): 500-504. DOI: 10.3760/emm j.issrL 0253-9624.2012. 06．005 (in Chinese)

劉洋，黃學勇，杜燕華, 等. 河南發熱伴血小板減少綜合征流行區蜱類分布及媒介攜帶新布民亞病毒狀況調查[J]. 中華預防醫學雜志，2012，46(6)：500-504.

[5]Zhang WS, Zeng XY, Zhou MH, et al. Seroepidemiology of severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus in Jiangsu province[J]. Dis Surveill, 2011, 26(9): 676-678. (in Chinese)

張文帥，曾曉燕，周明浩，等. 江蘇省發熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒血清流行病學調查[J]. 疾病監測，2011，(26)9：676-679.

[6]Ministry of Health of People’s Republic of China. National guideline for prevention and control of severe fever with thrombocytopenia syndrome[M]. Beijing: Ministry of Health of People’s Republic of China, 2010. (in Chinese)

中華人民共和國衛生部. 發熱伴血小板減少綜合征防治指南[M].2010版. 北京：中華人民共和國衛生部，2010.

[7]Tang XY, Cui N, Kang K, et al. Analysis an the diagnosis and treatment of a cluster of cases infected by new bunyavirus[J]. Chin J Prev Med, 2012, 46(2): 110-113. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2012. 02.004 (in Chinese)

唐曉燕, 崔寧, 康鍇，等. 一起聚集性新布尼亞病毒感染病例的診斷與治療分析[J]. 中華預防醫學雜志, 2012, 46(2):110-113.

[8]Kang K, Tang XY, Xu BL, et al. Analysis of epidemic characteristics of fever and thrombocytopenia syndrome in Henan province, 2007-2011[J]. Chin J Prev Med, 2012, 46(2): 106-109. DOI: 10.3760/cma.j.issn. 0253-9624.2012.02.003 (in Chinese)

康鍇, 唐曉燕, 許汴利, 等. 河南省2007-2011年發熱伴血小板減少綜合征流行特征分析[J]. 中華預防醫學雜志, 2012, 46(2): 106-109.

[9]Zhang HL, Liang GD. Arboviruses and arboviral diseases in China[J]. Chin J Vect Biol Ctrl, 2012, 23(5): 377-380. (in Chinese)

張海林，梁國棟.中國蟲媒病毒和蟲媒病毒病[J].中國媒介生物學及控制雜志，2012,23(5):377-380.