MMP-1、IL-6及VEGF與川崎病患兒冠狀動脈損傷的關系

馬春利，薛 滿

(寶雞市人民醫院兒科，陜西 寶雞 721000)

川崎病又稱皮膚黏膜淋巴結綜合征，其基本病理改變是全身性血管炎，最主要和嚴重的并發癥是合并冠狀動脈損傷(coronary artery lesions,CAL)，早期表現為冠狀動脈炎及冠狀動脈擴張，后期表現為冠狀動脈狹窄、冠狀動脈瘤甚至猝死[1-2]，受累患兒中約有5%最終出現嚴重的CAL[3]，是引發兒童后天性心臟病的重要因素之一。然而，CAL發病機制仍未完全明確。本研究通過檢測不同時期川崎病患兒血清基質金屬蛋白酶1(matrix metalloproteinases-1,MMP-1)、白細胞介素6(interleukin-6,IL-6)及血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平，探討其在小兒川崎病CAL中的作用機制。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2011年5月至2013年5月寶雞市人民醫院收治的川崎病患兒54例作為川崎病組，其中男33例、女21例，年齡7個月至8歲，平均年齡(4.4±1.4)歲。患兒病程分為急性期(3～10 d；起病至靜脈注射液免疫球蛋白治療前)和緩解期(>21 d)。靜脈注射液免疫球蛋白治療前行超聲心動圖檢查冠狀動脈情況，將川崎病患兒分為CAL組30例，男19例、女11例，年齡7個月至8歲，平均(4.1±1.4)歲；無冠狀動脈損傷(not coronary artery lesions，NCAL)組24例，男14例、女10例，年齡8個月至7歲，平均(4.1±1.4)歲。并且選取同期健康體檢兒童20例為健康對照組，男11例、女9例，年齡6個月至7歲，平均(4.2±1.3)歲。各組間在性別、年齡等方面比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2診斷標準 川崎病診斷標準[4]：①持續發熱5 d以上；②雙眼球結膜充血；③口唇和口腔改變，唇干裂鮮紅，草莓舌，口腔及咽黏膜彌漫性充血；④多形性紅斑或猩紅熱樣皮疹；⑤四肢末端改變，急性期手足硬性水腫，掌趾及指趾末端紅斑，恢復期甲床皮膚移行處膜樣蛻皮；⑥急性非化膿性頸淋巴結炎。以上6項中含有5項即可診斷。

冠狀動脈病變診斷標準[5]：①正常(0度)為血管壁灰度增強，冠狀動脈內徑正常，1～3歲<3.5 mm或冠狀動脈內徑與主動脈根部內徑之比各年齡組均<0.3；②輕度(Ⅰ度)為冠狀動脈擴張明顯但局限，冠狀動脈內徑<4 mm；③中度(Ⅱ度)為內徑4～7 mm，可單處、多處或彌漫性；④重度(Ⅲ度)為巨大冠狀動脈瘤，冠狀動脈內徑≥8 mm，彌漫性或累及1支以上。

1.3治療方法 入院明確診斷后給予免疫球蛋白(上海生物制品研究所有限責任公司，生產批號:118355)1.0～2.0 g/kg，靜脈滴注，連用2 d，同時口服阿司匹林(上海信誼藥廠有限公司，生產批號：20110503A)50 mg/(kg·d)治療。

1.4血液樣本采集 分別采集川崎病患兒急性期和緩解期時靜脈血及健康對照組兒童靜脈血4～5 mL，用微量移液器取留取血清1～2 mL，-80 ℃保存待測。實驗過程中血標本采集經醫院倫理委員會審批，并且所有入選研究對象均由監護人代為簽署知情同意書。

1.5檢測方法 采用酶聯免疫吸附法分別檢測血清MMP-1、IL-6及VEGF水平。MMP-1與IL-6試劑盒購自美國R&D公司(批號:028649)，VEGF試劑盒購自上海滬宇生物科技有限公司(批號：110566)。實驗操作步驟嚴格按照試劑盒說明進行，后在Infinite F200型多功能酶標儀(瑞士Tecan公司)上進行檢測。應用ALCYON300(雅培)全自動生化分析儀及雅培生化試劑(批號：453A5)檢測川崎病患兒血清白蛋白水平，應用德國拜耳公司ADVIA70全自動學細胞分析儀測定患兒血白細胞水平。

2 結 果

2.1川崎病患兒急性期和緩解期血清MMP-1、IL-6及VEGF水平變化 川崎病患兒急性期和緩解期血清MMP-1、IL-6及VEGF,白細胞，白蛋白水平顯著高于健康對照組(P<0.05)；緩解期血清MMP-1、IL-6及VEGF，白細胞，白蛋白水平均有顯著下降，但仍高于健康對照組(P<0.05)(表1)。

2.2川崎病患兒CAL組與NCAL組血清MMP-1、IL-6及VEGF水平比較 無論急性期還是緩解期，CAL組MMP-1、IL-6及VEGF水平均高于NCAL組，差異有統計學意義(P<0.05)(表2)。

2.3急性期川崎病患兒血清MMP-1、IL-6及VEGF水平相關性分析 Pearson相關分析結果顯示，MMP-1及IL-6與外周血白細胞計數呈正相關(r=0.69，P<0.05；r=0.78，P<0.01)，然而，VEGF水平與血清白蛋白呈負相關(r=-0.63，P<0.01)。

表1 川崎病患兒急性期和緩解期血清MMP-1、IL-6及VEGF水平變化

表2 川崎病患兒CAL組與NCAL組血清MMP-1、IL-6及VEGF水平比較

CAL:合并冠狀動脈損傷；NCAL:無冠狀動脈損傷

3 討 論

川崎病的基本病理改變為全身性血管炎，主要累及中小動脈，特別是冠狀動脈最易受累，其嚴重程度是決定川崎病預后的主要因素[6]。然而，截至目前川崎病CAL的發生機制還不清楚。近年研究表明，川崎病患兒體內單核/巨噬細胞大量激活，產生大量炎性細胞因子直接損傷血管內皮細胞[7]，導致細胞外基質代謝紊亂、血管基膜破壞通透性增加、細胞(內皮細胞及平滑肌細胞)凋亡和遷移以及血管結構重建等病理變化，最終促使冠狀動脈早期炎癥及擴張，晚期冠狀動脈狹窄、冠狀動脈瘤等[8]。

MMP-1又稱間質膠原酶，是MMPs家族中的重要成員之一。研究發現MMP-1參與多種炎性反應，與血管病變關系密切，在腹主動脈瘤、冠狀動脈粥樣硬化及急性冠狀動脈綜合征等心血管疾病時MMP-1表達明顯增加[9-10]。IL-6主要來源于巨噬細胞、內皮細胞和成纖維細胞，是一種重要的促炎性因子[11]，其過度表達可導致細胞損傷，多項研究表明[12-13]，川崎病患兒血漿IL-6水平較健康對照組兒童明顯增高，提示其可能參與川崎病的發生。VEGF是一種特異性作用于血管內皮的多功能糖蛋白，具有促進內皮細胞增殖、分裂及增加微血管通透性等功能。Ueno等[14]通過研究川崎病患兒急性期血管炎，發現血清VEGF水平異常增高，并發CAL者增高更加明顯。

基于以上炎癥因子的作用及相關研究，本試驗觀察川崎病患兒不同時期(急性期及緩解期)血清MMP-1、IL-6及VEGF水平，發現其較健康對照兒童顯著升高，與先前研究結果[6,11]一致。同時本研究結果進一步顯示，伴有CAL的川崎病患兒血清MMP-1、IL-6及VEGF水平升高較NCAL者更為顯著。另外，Pearson相關分析顯示，MMP-1和IL-6與外周血白細胞計數呈正相關，而VEGF水平與血清白蛋白呈負相關。

綜上所述，川崎病時免疫系統過度激活，單核/巨噬細胞大量增殖與活化，致與血管炎癥相關的MMP-1、IL-6及VEGF水平明顯增加，且與病變呈趨勢一致的動態變化，表明三者水平的增高可能參與川崎病冠狀動脈損害的病理生理過程。因此，對于懷疑川崎病的患兒，聯合測定血清MMP-1、IL-6及VEGF水平，可作為診斷川崎病及其冠狀動脈損害的可靠實驗室指標，為臨床診斷、治療及預防冠狀動脈損害提供依據。

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