產超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌和克雷伯菌的檢測和耐藥性監測

鄭 力

（沈陽市第一人民醫院，遼寧 沈陽 110041）

產超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌和克雷伯菌的檢測和耐藥性監測

鄭 力

（沈陽市第一人民醫院，遼寧 沈陽 110041）

目的監測大腸埃希菌、克雷伯菌產超廣譜β-內酰胺酶（ESBLs）情況及耐藥狀況。方法對我院2010年1月至2011年6月送檢的尿、痰、分泌物標本進行常規培養，采用紙片協同法確證試驗檢測產ESBLs菌株，然后以紙片擴散法測定分離菌株對抗菌藥物的敏感性。結果大腸埃希菌236株，確證試驗檢出產ESBLs菌66株，檢出率27.9%，肺炎克雷伯菌和產酸克雷伯菌58株，確證試驗檢出產ESBLs菌22株，檢出率37.9%。產ESBLs的大腸埃希菌和克雷伯菌對頭孢噻吩、頭孢唑啉、頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南、慶大霉素、環丙沙星等明顯耐藥，耐藥率達70%以上。結論大腸埃希菌和克雷伯菌ESBLs的檢出率高并呈多重耐藥性，臨床應加強抗菌藥物的合理使用及管理。

產超廣譜β-內酰胺酶；三代頭孢菌素；耐藥性

近年來，隨著超廣譜β-內酰胺酶類抗生素特別是第3、4代頭孢菌素的廣泛應用，導致革蘭陰性菌對其耐藥性增加，產超廣譜β-內酰胺酶（ESBLs）菌株的檢出率逐年上升[1-2]，其中最主要是大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌。為更好地了解本院產ESBLs的大腸埃希菌和克雷伯桿菌的檢出率和耐藥情況，控制產ESBLs菌株的傳播和流行，監測我院2010年1月至2011年6月臨床標本中分離的大腸埃希菌、克雷伯菌產ESBLs情況及耐藥狀況。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源：294株菌株為2010年1月至2011年6月沈陽市第一人民醫院住院部送檢的尿、痰、分泌物等標本中分離鑒定的革蘭陰性桿菌，其中大腸埃希菌236株、肺炎克雷伯菌46株、產酸克雷伯菌12株。標本的留取和保存按操作規程要求。

1.1.2 質控菌株：使用標準株大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷菌ATCC700603進行質量控制。

1.2 方法

1.2.1 細菌鑒定及藥敏試驗：使用杭州天和微生物有限公司生產的細菌鑒定管，及北京天壇生產的藥敏紙片進行ESBLs菌的初步篩選試驗。

1.2.2 ESBLs的確證試驗：按NCCLS紙片法做確證試驗，經初步篩選后，可疑菌株用頭孢噻肟、頭孢噻肟/克拉維酸做紙片法藥敏試驗，35 ℃溫育16～18 h，藥物紙片中任何一個在加克拉維酸后，抑菌圈直徑增大值≥5 mm時，判定為產ESBLs菌株。結果判定按照NCCLS1999年的標準。

2 結 果

2.1 ESBLs菌株的檢出率

①294株菌株，經初篩試驗選出可疑產ESBLs菌株155株，其中大腸埃希菌117株，肺炎克雷伯菌及產酸克雷伯菌38株。質控均在合格范圍內。②294株菌株，經確證試驗檢出產ESBLs菌株共88株，占待檢菌的29.9%（88/294），占初篩陽性菌的56.8%（88/155）。其中大腸埃希菌66株，占待檢菌27.9%（66/236），占初篩陽性菌56.4%（66/117）；肺炎克雷伯菌及產酸克雷伯菌22株，占待檢菌的37.9%（22/58），占初篩陽性菌的57.9%（22/38），見表1。

表1 大腸埃希菌、克雷伯菌產ESBLs表型確認試驗結果

2.2 產ESBLs菌對頭孢菌素等抗菌藥物的耐藥率

產ESBLs的大腸埃希菌和克雷伯桿菌對頭孢噻吩、頭孢唑啉、頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南、慶大霉素、環丙沙星耐藥率在70.0%以上，見表2、表3。

表2 產ESBLs大腸埃希菌對頭孢菌素等抗菌藥物的耐藥率（%）

表3 產ESBLs克雷伯菌對頭孢菌素等抗菌藥物的耐藥率（%）

3 討 論

近年隨著大量廣譜抗菌藥物的廣泛應用，細菌耐藥性問題日益突出，其耐藥機制較為復雜，如耐藥酶的產生、細菌膜通透性的改變及胞質內藥物的泵出機制等，而質粒介導的ESBLs是主要耐藥機制之一，是造成醫院感染和院外耐藥菌株傳播的主要原因[3-5]。某些革蘭陰性菌，尤其是大腸埃希菌和肺炎克雷伯桿菌，它們通過獲得的ESBLs裂解青霉素和頭孢菌素類抗菌藥物的基本結構——β內酰胺環，使其喪失抗菌活性，導致臨床治療失敗。范愛民等[6]篩查大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌膜孔蛋白基因情況，分析其與耐藥的關系，72株大腸埃希菌中，14株產AmpC酶，23株產ESBL，3株膜孔蛋白基因缺失；57株肺炎克雷伯菌中，13株產AmpC酶，19株產ESBL，5株膜孔蛋白缺失，膜孔蛋白缺失株4代頭孢均出現耐藥。結果說明大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對頭孢類抗生素的耐藥機制主要是產AmpC酶和ESBLs，同時膜孔蛋白基因的缺失會造成耐藥程度增高。

研究表明產ESBLs菌株不斷增多，耐藥菌株有逐年上升的趨勢，各地方產ESBLs菌株流行情況存在一定程度的差異。毛炎輝等[7]檢測720株大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌株，產超廣譜β-內酰胺酶陽性率為37.9%；其中大腸埃希菌陽性率為42.1%；肺炎克雷伯菌陽性率為32.6%。汪秀紅[8]在兒科病房共收集痰和咽拭子標本共1830份，分離出致病菌624份，檢出率為34.09%，其中肺炎克雷伯菌158株，大腸埃希菌178株，兩菌總共占致病菌總數的53.85%。本資料顯示出我院分離得到的大腸埃希菌和克雷伯菌的檢出率分別為27.9%（66/236）和37.9%（22/58），大腸埃希菌和克雷伯菌導致的醫院感染以泌尿道和呼吸道為主，臨床應引起高度的重視。

近年來隨著抗生素的大量應用及對抗菌藥物耐藥率的比較可以看出，多種抗菌藥物的耐藥率不斷上升，裴碧娜[9]研究驗證了以上觀點，產ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯桿菌對頭孢唑林、頭孢孟多、頭孢噻肟、哌拉西林耐藥率在90.0%以上，其中二者均對頭孢噻肟耐藥最為嚴重，耐藥率分別為97.3%、96.9%；對頭孢曲松、頭孢哌酮耐藥率在80.0%以上。本文調查通過比較產ESBLs菌株和非產ESBLs菌株對常用抗菌藥物的耐藥率發現，產ESBLs菌對頭孢噻吩、頭孢唑啉、頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南、慶大霉素、環丙沙星耐藥率在70.0%以上，對頭孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率較低；非產ESBLs大腸埃希菌對頭孢噻吩、環丙沙星耐藥率較高。結果還可見克雷伯菌對阿米卡星的耐藥率達68.2%，而大腸埃希菌對阿米卡星有較高敏感度。在使用抗菌藥抗感染過程中必須同時進行ESBLs的常規監測，用以預防ESBLs的產生和播散[10]。

總之，本院大腸埃希菌和克雷伯菌ESBLs的檢出率高并呈多重耐藥性，應及時掌握它們的臨床分布及耐藥特點，加強抗菌藥物的合理使用及管理，對有效控制產ESBLs菌株傳播和流行起到至關重要的作用。

[1] 崔巖,沈定霞,周貴民.產超廣譜β內酰胺酶產酸克雷伯菌的醫院感染流行分析[J].中華檢驗醫學雜志,2002,25(5):277-280.

[2] 許宏濤,宣天芝,陶鳳榮,等.3種非發酵革蘭陰性桿菌5年的分離率及耐藥趨勢回顧[J].中國臨床藥理學雜志,2004,20(3):219-221.

[3] 沈定霞,羅燕萍,曹敬榮,等.肺炎克雷伯菌質粒編碼的AmpC酶和超廣譜β-內酰胺酶的表型和基因型分析[J].中華醫院感染學雜志,2007,17(6):639-642.

[4] 馮福英,張亞彬,蘇麗萍,等.革蘭陰性桿菌菌種分布及耐藥性和分子流行病學研究[J].實用醫學雜志,2006,22(24):2915-2917.

[5] 胡云建,俞云松,張秀珍,等.產超廣譜β-內酰胺酶細菌的分子流行病學研究[J].中華醫院感染學雜志,2004,14(3):241-244.

[6] 范愛民,田秀紅.大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥機制檢測[J].山西醫藥雜志,2011,40(9):877-879.

[7] 毛炎輝,陳慶煜.產超廣譜β-內酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌臨床分析及耐藥性分析[J].檢驗醫學與臨床,2011,8(4):409-410.

[8] 汪秀紅.兒科住院病房336株肺炎克雷伯菌與大腸埃希菌耐藥性分析[J].檢驗醫學與臨床,2012,9(1):71-72.

[9] 裴碧娜.產超廣譜β-內酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯桿菌的檢測和耐藥性分析[J].中國醫師進修雜志,2013,36(6):43-44.

[10] 毛敏芝.產超廣譜β-內酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性監測[J].吉林醫學,2012,33(7):1411-1412.

Production Testing and Monitoring of Drug Resistance of Extended-spectrum β-lactamase Producing Escherichia Coli and Klebsiella

ZHENG Li
(The First People’s Hospital of Shenyang, Shenyang 110041, China)

ObjectiveMonitoring Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae producing extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) cases and drug resistance..MethodsOur hospital from January 2010 to June 2011 inspection of urine, sputum, secretion specimens were routinely cultured using disc synergy confirmatory test to detect ESBLs producing strains, and then isolates the disk diffusion assay for antibacterial drugs sensitivity.ResultE.coli are 236 strains,117 of them may be produce ESBLs bacteria, 66 of them are definite , out-examining rate is 27.9%; Klebsiella pneumonia are 46 strains, acid-producing Klebsiella are 12 strains, 38 of them may be produce ESBLs, 22 of them are definite , out-examining ratte is 37.9%.ConcLusionEscherichia coli and Klebsiella ESBLs detection rate and showed multi-drug resistance, clinical management should be strengthened and the rational use of antimicrobial drugs.

Ρroducing ESBLs; 3rd generation cephorlosporins; Medicine tolerance

R978.1

B

1671-8194（2014）10-0010-02