卡介苗素對慢性阻塞性肺疾病患者細(xì)胞免疫功能的影響

姜國偉 臧敏 何綠苑 蔡崗麗 陳秀華 朱穎 吳冠儀

卡介苗素對慢性阻塞性肺疾病患者細(xì)胞免疫功能的影響

姜國偉 臧敏 何綠苑 蔡崗麗 陳秀華 朱穎 吳冠儀

目的 探討卡介苗素治療對慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用及其意義。 方法 將60例COPD患者隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組各30例，對照組接受常規(guī)治療，實(shí)驗(yàn)組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上予卡介苗素0．35mg肌肉注射，隔日1次，共3個(gè)月。兩組患者均隨訪6個(gè)月，觀察COPD復(fù)發(fā)率及控制感染時(shí)間，檢測兩組患者0、3、6個(gè)月時(shí)血清中IFN-γ及IL-4水平及0、6個(gè)月時(shí)肺功能。 結(jié)果 0個(gè)月時(shí)兩組患者細(xì)胞因子水平及肺功能的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0．05）。3個(gè)月時(shí)實(shí)驗(yàn)組IFN-γ水平高于對照組，IL-4水平低于對照組，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0．05），IFN-γ/IL-4比值高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。6個(gè)月時(shí)實(shí)驗(yàn)組IFN-γ水平高于對照組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），IL-4水平低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），IFN-γ/IL-4比值及FEV1占預(yù)計(jì)值高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05或0．01）。隨訪6個(gè)月內(nèi)實(shí)驗(yàn)組COPD復(fù)發(fā)率及控制感染時(shí)間均少于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P=0．020）。 結(jié)論 卡介苗素能增強(qiáng)COPD患者細(xì)胞免疫功能，改善其預(yù)后。

卡介苗素 慢性阻塞性肺疾病 干擾素-γ 白細(xì)胞介素4

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一種通過炎癥細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子介導(dǎo)并互相作用的慢性炎癥性疾病，其發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸與患者機(jī)體的免疫功能有密切關(guān)系。因此，我們對COPD患者采用卡介苗素治療，以期提高患者的免疫功能，改善療效，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇本科2012-09-01—2013-06-05收治的60例COPD患者作為研究對象，診斷均符合2013年中華醫(yī)學(xué)會呼吸分會制定的COPD診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，除外支氣管哮喘、支氣管擴(kuò)張、肺間質(zhì)纖維化等慢性呼吸系統(tǒng)疾病或并發(fā)嚴(yán)重肝腎功能損害、腫瘤及腦血管、腎、血液系統(tǒng)疾病患者。采用隨機(jī)數(shù)字表法分為卡介苗素治療組（實(shí)驗(yàn)組）和常規(guī)治療組（對照組）各30例。實(shí)驗(yàn)組男22例，女8例；年齡51～93（72.10±9.84）歲；病程3～26（13.13±6.52）年；COPD嚴(yán)重程度分級輕度9例、中度16例、重度5例。對照組男21例，女9例；年齡48～87（75.07±10.97）歲；病程5～25（13.37±6.58）年；COPD嚴(yán)重程度分級輕度10例、中度17例、重度3例。兩組患者性別、年齡、病程及病情嚴(yán)重程度的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

1.2 治療方法 對照組給予必要的解痙、祛痰等常規(guī)治療。實(shí)驗(yàn)組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上予以卡介苗素針（浙江萬馬藥業(yè)生產(chǎn)，批號201209020，0.35mg/支）0.35mg肌肉注射，隔日1次，共3個(gè)月。

1.3 研究方法 觀察6個(gè)月，以注射卡介苗素前（0個(gè)月）、停用卡介苗素時(shí)（3個(gè)月）及觀察期結(jié)束時(shí)（6個(gè)月），清晨抽取患者空腹外周靜脈血3～5ml，注入試管中以無菌肝素抗凝，離心10～20min，吸取血清保存于-70℃低溫以備統(tǒng)一檢測。使用杭州艾迪康公司提供的上海西唐生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒，通過DENLEY DRAGON Wellscan MK 3多功能酶標(biāo)儀（芬蘭Thermo公司），采用雙抗體夾心免疫吸附法（ABC-ELISA），檢測血清IFN-γ、IL-4的水平。具體操作參照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 觀察指標(biāo) （1）6個(gè)月內(nèi)COPD復(fù)發(fā)率、COPD復(fù)發(fā)后控制感染時(shí)間。（2）3個(gè)時(shí)點(diǎn)血清中IFN-γ、IL-4的水平。（3）研究開始和結(jié)束時(shí)的肺功能。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSSl7.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用表示，兩組樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者COPD復(fù)發(fā)率和COPD復(fù)發(fā)后控制感染時(shí)間的比較 6個(gè)月內(nèi)COPD復(fù)發(fā)率實(shí)驗(yàn)組為23.3%（7/30），對照組為53.3%（16/30），兩組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.71，P＜0.05）；控制感染時(shí)間實(shí)驗(yàn)組為（12.0± 5.3）d，對照組為（20.0±6.7）d，兩組的差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.58，P＜0.05）。

2.2 兩組患者各時(shí)點(diǎn)血清中細(xì)胞因子水平及比值的比較 見表1。

由表1可見，0個(gè)月時(shí)兩組患者細(xì)胞因子水平的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。3個(gè)月時(shí)實(shí)驗(yàn)組IFN-γ水平高于對照組，IL-4水平低于對照組，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；IFN-γ/IL-4比值高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。6個(gè)月時(shí)實(shí)驗(yàn)組IFN-γ水平高于對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），IL-4水平低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；IFN-γ/IL-4比值高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表1 兩組患者各時(shí)點(diǎn)血清中細(xì)胞因子水平及比值的比較

2.3 兩組患者治療前后肺功能的比較 見表2。

由表2可見，治療前兩組患者肺功能的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；治療后FEV1占預(yù)計(jì)值高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

COPD是通過炎癥細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子介導(dǎo)并互相作用的一種慢性炎癥，其發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸與患者機(jī)體的免疫功能有密切關(guān)系。由于缺血、缺氧等多種因素，COPD患者細(xì)胞免疫功能低于正常人，且隨著病情發(fā)展，細(xì)胞免疫功能呈下降的趨勢[2]。免疫增強(qiáng)劑能提高人體的免疫力，新近研究表明免疫增強(qiáng)劑能降低COPD急性發(fā)作頻率和減少糖皮質(zhì)激素的使用[3]，并減少COPD急性加重的發(fā)生[4]。在70年代死卡介菌接種就被臨床用于預(yù)防呼吸道疾病，但因?yàn)槠鋰?yán)重的不良反應(yīng)而在80年代停用[5]。卡介菌素是一種免疫增強(qiáng)劑，是卡介菌體的熱酚乙醇提取物，其主要作用是通過增強(qiáng)細(xì)胞免疫、調(diào)節(jié)體液免疫、激活巨噬細(xì)胞、改變T細(xì)胞亞群來提高人體的免疫力；另一方面通過穩(wěn)定肥大細(xì)胞，減少其它顆粒細(xì)胞釋放的活性物質(zhì)來達(dá)到抗過敏作用。

表2 兩組患者治療前后肺功能的比較

COPD的病理基礎(chǔ)是氣道炎癥，肺泡巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的組織損傷在COPD的發(fā)病中起主要作用，多種細(xì)胞炎性因子參與了這一過程[6]。Th細(xì)胞是一群細(xì)胞表面表達(dá)有CD4+分子的T淋巴細(xì)胞，目前認(rèn)為，Th細(xì)胞是免疫應(yīng)答的中心細(xì)胞，它不但是機(jī)體免疫應(yīng)答的啟動細(xì)胞，而且其活性對整個(gè)免疫應(yīng)答具有調(diào)節(jié)作用，如果沒有Th的活化，機(jī)體就會處于無能狀態(tài)[7]。Th細(xì)胞活化后可釋放細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞活性。根據(jù)產(chǎn)生細(xì)胞因子的不同，Th細(xì)胞分為Th0、Th1、Th23種亞型，對免疫應(yīng)答發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的主要是Th1和Th2細(xì)胞。IFN-γ主要由活化的Th1細(xì)胞產(chǎn)生，其主要功能有抗病毒、抗致病細(xì)菌、抗細(xì)胞增殖及激活巨噬細(xì)胞并促進(jìn)其功能，促進(jìn)Th1細(xì)胞的增生活化，并抑制Th2細(xì)胞增殖[8]。IL-4主要由活化的Th2細(xì)胞產(chǎn)生，并通過自分泌方式促進(jìn)Th2細(xì)胞分化，抑制Th1細(xì)胞增生及活化。Th2細(xì)胞分化增生后，產(chǎn)生IL-4的能力增強(qiáng)，IL-4激活肥大細(xì)胞使之分泌IL-4，使IL-4進(jìn)一步增多[9]。過度的Th2細(xì)胞應(yīng)答，可能削弱機(jī)體對感染因子的保護(hù)性防御機(jī)制，并常可能在遺傳易感的患者引發(fā)過敏性特應(yīng)癥[10]。IFN-γ/IL-4的比值代表Th1/Th2細(xì)胞優(yōu)勢狀態(tài)。本研究發(fā)現(xiàn)，3個(gè)月時(shí)實(shí)驗(yàn)組IFN-γ水平高于對照組，IL-4水平低于對照組，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)組IFN-γγ/IL-4比值高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；6個(gè)月時(shí)實(shí)驗(yàn)組IFN-γ水平高于對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IL-4水平低于對照組，IFN-γ/IL-4比值及FEV1占預(yù)計(jì)值高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；隨訪6個(gè)月內(nèi)實(shí)驗(yàn)組COPD復(fù)發(fā)率及控制感染時(shí)間均少于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；說明卡介苗素能增強(qiáng)COPD患者細(xì)胞免疫功能，停用卡介苗素后能減緩IFN-γ/IL-4比值下降，通過調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答，提高機(jī)體免疫力，減緩肺功能下降，減少COPD急性加重的發(fā)生，對COPD患者有預(yù)防保護(hù)作用，達(dá)到改善COPD療效的目的。

卡介苗素可抑制Th2型細(xì)胞因子分泌，促進(jìn)Th1型細(xì)胞因子的分泌，從而調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡[11]。本研究結(jié)果中兩組患者3個(gè)月及6個(gè)月時(shí)IFN-γ水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，是否與樣本數(shù)少有關(guān)還有待進(jìn)一步證實(shí)。Th1細(xì)胞功能增強(qiáng)是否是卡介苗素對COPD的免疫調(diào)節(jié)作用的位點(diǎn)，尚需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本，延長療程來進(jìn)行更加深入的研究。

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Effect of BCG-PSN on cellular immune function in patients with chronic obstructive pulmonary disease

Objective To investigate the immunoregulatory activity of BCG-PSN in patients with chronic obstructive pulmonary disease(COPD)．Methods Sixty COPD patients were randomly assigned to BCG group and control group with 30 in each．Conventional treatment was given to both groups,patients in BCG group also received BCG-PSN 0．35mg i．m,q．o．d for 3 months．Both groups were followed up for 6 months．The recurrence rate of COPD,the time of infection control were observed in two groups．Serum levels of IFN-γ,IL-4 at 0,3,6 months after treatment were measured and lung function at 0,6 months after treatment was examined．Results There were no differences in cytokines levels and lung function before treatment between two groups（P＞0．05）．There was also no difference in serum IFN-γ and IL-4 levels 3 months after treatment（P＞0．05）,but the IFN-γ/IL-4 ratio in BCG group was higher than that in control group（P＜0．05）．On 6 months after treatment,serum IL-4 levels were lower in BCG group（P＜0．05）,there was no difference in IFN-γ levels between two groups（P＞0．05）;however, the IFN-γ/IL-4 ratio in BCG group was higher than that in control group（P＜0．05）,and percentage of FEV1/predicted was higher（P＜0．01）．The recurrence rate of COPD was lower and the time of infection control was shorter in BCG group than those in control group（P＜0．05）．Conclusion BCG-PSN can enhance cellular immune function and improve the prognosis of patients with COPD．

BCG-PSN Chronic obstructive pulmonary disease Interferon-γ Interleukin 4

2014-02-20）

（本文編輯：沈叔洪）

浙江省中醫(yī)藥科學(xué)研究基金資助項(xiàng)目（2012ZB165）作者單位：321017 金華市中醫(yī)醫(yī)院呼吸內(nèi)科

姜國偉，E-mail：13757983263@163.com