不同期別梅毒患者外周血CD4+T細胞表面趨化因子受體的研究

林世莊 蘇湘川 葉挺挺 朱海元 章承中 顏美秋

不同期別梅毒患者外周血CD4+T細胞表面趨化因子受體的研究

林世莊 蘇湘川 葉挺挺 朱海元 章承中 顏美秋

目的 研究不同期別梅毒患者趨化因子受體CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平，探討梅毒患者免疫功能的變化。方法 檢測不同期別梅毒患者外周血趨化因子受體CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平，以健康體檢者作為正常對照組。結果 二、三期梅毒患者與正常對照組及一期梅毒患者比較，外周血CCR3水平增高，CCR5水平降低（P＜0．05或0．01）；三期梅毒患者與二期患者比較，外周血CCR3水平增高（P＜0．05）；二、三期梅毒患者治療后與治療前比較，外周血CCR3水平降低（P＜0．05）；二期梅毒患者治療后與治療前比較，外周血CCR5水平升高（P＜0．05）。結論 趨化因子受體在梅毒的發病和發展中可能起著重要作用。

梅毒 趨化因子受體 免疫功能

梅毒是一種嚴重危害人類健康的傳染性疾病，全世界每年新增約1 200萬新病例[1]，在我國發病率居傳染性疾病的第4位，僅次于病毒性肝炎、肺結核、甲型H1N1流感。梅毒復發及病情發展給患者帶來了極大的痛苦，并造成了公共衛生資源的極大浪費，因此及早徹底治愈梅毒，減少復發，有著極其重大的意義。近年研究發現梅毒患者的復發及病情發展與機體的免疫系統有著很大關系[2]。本研究通過檢測不同期別梅毒患者外周血趨化因子受體水平，旨在進一步研究免疫系統對梅毒病情發展的影響，以便及時根除梅毒螺旋體，及早治愈梅毒患者，避免向晚期梅毒發展或病情復發，減少梅毒對患者造成的身體和精神損害。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2011-05—2013-10一期梅毒、二期梅毒患者各30例和三期梅毒患者20例，分別來自于溫嶺市第一人民醫院皮膚性病科（48例）及臺州市立醫院皮膚性病科門診（32例）。其中一期梅毒患者男17例，女13例，年齡19～62歲，平均（30.5±3.9）歲；二期梅毒患者男16例，女14例，年齡20～61歲，平均（32.2±4.1）歲；三期梅毒患者男12例，女8例，年齡19～60歲，平均（33.8±4.9）歲。所有患者血清反應素試驗、梅毒螺旋體特異性抗體均陽性，HIV抗體均陰性。均應用芐星青霉素規范驅梅治療1個療程，治療結束后3個月復查，其中一期梅毒患者血清反應素試驗轉陰13例，二期梅毒患者血清反應素試驗轉陰11例，三期梅毒患者血清反應素試驗轉陰5例。正常對照組為30例健康體檢者，男15例，女15例，年齡18～60歲，平均（32.2±4.7）歲。各期梅毒患者及正常對照組之間性別、年齡比較均無統計學差異（均P＞0.05）。所有受試者就診前均未合并感染性疾病、免疫系統疾病及肝、腎、造血系統疾病和內分泌系統疾病等嚴重原發性疾病，半年內未系統使用糖皮質激素、免疫抑制劑及免疫調節劑。

1.2 試劑與儀器 FITC標記的CD4單抗以及相應同型對照抗體、PE標記的CCR3單抗、CCR5單抗及相應的同型對照PE-IgG、PE-IgG2A購于美國eBioscience公司；APC標記的CXCR4、CXCR3單抗以及其同型對照APC-IgG2A購于美國Abcam公司；流式細胞儀為美國BD公司產品。

1.3 檢測方法 采用流式細胞儀雙標法檢測外周血CD4+T細胞表面CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3的表達。所有受試者均空腹抽取外周血5ml，抗凝備用。分別取用A、B、C、D、E 5個離心管，其中A管作為陰性對照，B管加入FITC-CD4單抗（0.5μg）+PE-CCR3單抗（0.5μg），C管加入 FITC-CD4單抗（0.5μg）+PE-CCR5單抗（0.5μg），D管加入FITC-CD4單抗（0.5μg）+APC-CXCR4單抗（0.5μg），E管加入FITC-CD4單抗（0.5μg）+ APC-CXCR3單抗（0.5μg）。各管分別加入100μl的新鮮抗凝全血，混勻，經避光孵育、裂解、離心后，各管再加入1.00%多聚甲醛溶液150μl固定，上機檢測。

1.4 統計學處理 采用SPSS 16.0統計軟件。計量資料以表示，多組間比較方差齊者采用LSD檢驗，方差不齊者采用T a m h a n e檢驗。患者治療前后比較采用配對t檢驗。

2 結果

2.1 各期梅毒患者及正常對照組間趨化因子受體表達水平比較 二、三期梅毒患者與正常對照組比較，外周血CCR3水平增高，CCR5水平降低，均有統計學差異（P＜0.05或0.01）；二、三期梅毒患者與一期梅毒患者比較，外周血CCR3水平增高，CCR5水平降低，均有統計學差異（P＜0.05或0.01）；三期梅毒患者與二期患者比較，外周血CCR3水平增高，有統計學差異（P＜0.05），見表1。

表1 各組受試者趨化因子受體表達水平比較（%）

2.2 各期梅毒患者治療前后趨化因子受體表達水平比較 二、三期梅毒患者治療后與治療前比較，外周血CCR3水平降低，均有統計學差異（均P＜0.05）；二期梅毒患者治療后與治療前比較，外周血CCR5水平升高，有統計學差異（P＜0.05），見表2。

表2 各組患者治療前后趨化因子受體表達水平比較（%）

3 討論

趨化因子是一類在淋巴細胞募集過程中發揮關鍵作用的蛋白質超家族，其受體是一類與G蛋白相偶聯、介導趨化因子行使功能的受體，它的表達是趨化因子發揮作用的一個重要決定因素。趨化因子及其受體能精確地調節免疫系統的反應，免疫系統中免疫活性細胞的動態分布、各類細胞的分化、發育及活化都受到趨化因子受體的影響和調控，在機體生理發育及疾病的病理過程中均起著重要作用。趨化因子受體在分化的Th亞群Th1/Th2上表達不同，在趨化T細胞的同時，還能直接或間接影響T細胞分化為Th1和Th2。趨化因子受體的類型和表達量的差異是調節Th1/Th2活化和極化狀態的重要因素。蔡川川等[3]研究發現潛伏梅毒患者及其感染性伴均出現IL-12水平降低和Th1/Th2偏移現象，Th1/Th2偏移現象加速了梅毒螺旋體的增殖，并促進疾病向潛伏階段發展。梅毒患者早期以Th1型細胞因子為主，Th1型免疫反應占優勢[4]，隨著病程延長其表達逐漸降低，Th2型免疫反應被激活，抑制Th1型免疫反應[5]。其他研究也表明，梅毒患者細胞免疫功能可能與淋巴細胞過度凋亡和Th細胞亞群分化失調，Th1向Th2方向偏移有關，患者的細胞免疫功能受到抑制[6]。本研究發現二、三期梅毒患者CCR5有不同程度的降低，CCR3有不同程度的升高，而其中以三期梅毒患者的改變更明顯。CCR5、CXCR3主要表達在Th1細胞上，CCR3主要表達在Th2細胞上[7]，進一步證實隨著梅毒病程的進展，Th2型免疫反應被激活，Th1型免疫反應受抑制。本研究還發現二、三期梅毒患者治療后與治療前比較，外周血CCR3、CCR5水平有一定的恢復，二期梅毒患者接近正常對照組平均水平，說明二期梅毒患者經過規范驅梅治療，免疫功能有一定的恢復，這與賈月琴等[8]研究結果一致，進一步說明趨化因子受體在梅毒的發病和發展中可能起著重要作用。

患者的細胞免疫狀態在梅毒的發病中起著重要的作用，細胞免疫功能低下不僅可增加感染梅毒螺旋體的機會，而且影響病情的發展和轉歸[9]。Th1/Th2細胞免疫反應在生理狀況下保持動態平衡，機體的細胞免疫和體液免疫也保持著相對穩定的關系。當平衡狀態被打破，兩類細胞因子失去相互間的控制作用，機體則處于Th1型或Th2型免疫反應占優勢的Th1/Th2偏移狀態。三期梅毒患者與二期患者比較，CCR3增高更明顯，CCR5降低更明顯，說明Th1/Th2偏移現象更嚴重，平衡狀態進一步被破壞，更不利于疾病的恢復。Th1/Th2偏移現象加速了梅毒螺旋體的增殖并促進疾病向潛伏階段發展，這與感染進入慢性階段有一定的關系，但具體機制還有待于進一步研究。所以筆者認為趨化因子受體CCR3、CCR5在梅毒患者清除體內梅毒螺旋體的免疫反應中可能起著重要作用。Podwinska等[10]指出，只有當患者機體免疫系統功能正常時，與抗生素聯合應用才能徹底治愈梅毒患者。很多學者認為對梅毒患者的治療，臨床上除常規采用抗生素驅梅治療外，可配合免疫調節劑，以增強和調節機體的免疫功能，特別是細胞免疫功能，以便提高療效，減少梅毒復發。

[1]Daskalakis D．Syphilis:continuing public health and diagnostic challenges[J]．Curr HIV/AIDS Rep,2008,5(2):72-77．

[2]朱婷,莊朋鳳．免疫調節劑輔助治療中晚期住院梅毒患者的臨床研究[J]．中國現代醫生,2013,51(31):45-47．

[3]蔡川川,陳嶸祎,李芳谷,等．潛伏梅毒患者及其性伴血清中Th1/Th2細胞因子變化[J]．廣東醫學院學報,2011,29(6):605-607．

[4]Leader B T,Godornes C,VanVoorhis W C,et al．CD4+lymphocytes and gamma interferon predominate in local immune responses in earlyexperimental syphilis[J]．Infect Immun,2007,75(6):3021-3026．

[5] 蒲新露,季必華．免疫調節劑在梅毒治療中的作用[J]．中國醫藥指南, 2013,11(5):62-63．

[6]曾文軍,樊翌明,吳志華．二期梅毒患者外周血淋巴細胞凋亡及其Fas、Bcl-2表達的研究[J]．中華皮膚科雜志,2005,38(12):725-728．

[7]姜培娟,林其德,鮑世民,等．趨化因子受體CCR3、CCR5和CXCR3與自然流產的相關性[J]．上海交通大學學報(醫學版),2008,28(12): 1535-1540．

[8]賈月琴,季必華．76例二期梅毒患者血清γ-干擾素水平的檢測[J]．皖南醫學院學報,2013,32(3):227-229．

[9]Wheater C P,Cook P A,Clark P,et al．Re-emerging syphilis:a detrended correspondence analysis of the behaviour of HIV positive and negative gay men[J]．BMC Public Health,2003,3:34．

[10]Podwinska J,Lusiak M,Zaba R,et al．The pattern and level of cytokines secreted by Th1 and Th2 lymphocytes of syphilitic patients correlate to the progression of the disease[J]．FEMS Immunol Med Microbiol,2000,28(1):1-14．

Expression of chemokine receptors in peripheral CD4+T lymphocytes in patients with various stages of syphilis

Objective To investigate the expression of chemokine receptors CCR3,CCR5,CXCR4,CXCR3 in peripheral CD4+T-lymphocytes of patients with various stages of syphilis．Methods The chemokine receptors CCR3,CCR5,CXCR4,CXCR3 were detected by double-label flow cytometry in 30 patients with stage I syphilis,30 patients with stage II syphilis,20 patients with stage III syphilis and 30 healthy controls．Results The expression of CCR3 on CD4+T cells was increased and CCR5 was declined in peripheral blood of patients with stage II and III syphilis in comparison to those of healthy controls and patients with stage I syphilis(P＜0．05 or 0．01)．The expression of CCR3 was higher in patients with stage III syphilis than that in stage II syphilis(P＜0．05)．The expression of CCR3 in patients with stage II and III syphilis was declined after treatment compared to pre-treatment level(P＜0．05)．The expression of CCR5 in patients with stage II syphilis was increased after treatment compared to pre-treatment level(P＜0．05)．Conclusion The chemokine receptors CCR3,CCR5 may be involved in the onset and development of syphilis．

Syphilis Chemokine receptorImmune function

2014-07-11）

（本文編輯：胥昀）

溫嶺市科技計劃項目（2012WLCA0071）

317500 臺州，溫嶺市第一人民醫院皮膚性病科（林世莊、葉挺挺、朱海元、章承中、顏美秋）；臺州市立醫院皮膚性病科（蘇湘川）