前列腺組織Galanin及GalR2表達及意義

張振宇，高健剛，姜波，侯四川

(青島大學醫學院，山東 青島 266071 1 外科學專業； 2 附屬青島市市立醫院泌尿外科)

前列腺癌目前是美國男性最常見的一種惡性腫瘤，也是最容易導致死亡的惡性腫瘤之一[1]。我國前列腺癌發病率較低，但近年隨著人口老齡化、生活條件的改善以及診斷技術的不斷提高,其發病率有明顯增加的趨勢。最近研究結果表明，在前列腺組織中存在神經內分泌細胞(NEC)，而NEC是全身彌漫性神經內分泌系統即APUD(amine precursor uptake and decarboxylation)細胞系統的組成部分，APUD在前列腺的生長及發育過程中起重要的調節作用。同樣，前列腺癌組織中也可見大量的神經內分泌化(NED)現象，且表現得尤為明顯[2]。Galanin及其受體在中樞和外周神經系統內分布較廣泛，既往文獻報道Galanin蛋白在前列腺惡性腫瘤組織陽性表達率升高，對前列腺癌的診斷具有一定意義[3-4]。Galanin 2型受體(GalR2)廣泛分布于中樞和外周神經系統及許多外周組織如輸精管、前列腺、子宮、卵巢等，參與腫瘤進展及生長中細胞增殖過程[5-6]。CHUNG等[7]研究顯示，前列腺癌組織中編碼GalR2基因的甲基化水平明顯升高，提示GalR2可能在前列腺癌組織中表達異常。目前GalR2在前列腺癌組織表達方面的研究國內尚未見報道，為此，本研究采用免疫組織化學方法分別檢測前列腺增生(BPH)及前列腺癌組織中Galanin及GalR2的表達，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集青島市市立醫院東院區2010年10月—2013年5月確診的50例BPH、50例未轉移前列腺癌(PCa)及30例發生骨轉移前列腺癌(BM)的石蠟標本。其中BPH病人的年齡為62～78歲，平均69歲；前列腺癌病人年齡為56～83歲，平均71歲。PCa組病例經診斷未發現淋巴結及遠處轉移，其中有27例為根治性切除標本，23例為經直腸穿刺標本。BM組均為經直腸穿刺標本，影像學檢查發現骨組織受累。

1.2 免疫組化檢測方法

石蠟切片脫蠟和水化。磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗3次，除去PBS，在高壓鍋中進行高溫高壓抗原修復(0.01 mol/L檸檬酸抗原修復液7 mL)，噴氣后計時2 min，自然冷卻。用PBS沖洗3次，除去PBS，每張切片滴加體積分數0.03過氧化氫溶液覆蓋標本，室溫培養10 min。PBS沖洗3次，加牛血清，室溫孵育30 min。甩去血清，滴加一抗，置4 ℃恒溫冰箱中培養12 h。PBS沖洗3次，滴加二抗，室溫孵育10 min。PBS沖洗3次，滴加DAB緩沖液覆蓋標本約5～10 min，光鏡下觀察染色程度。蘇木精復染，脫水干燥，封固，光鏡下觀察。Galanin及GalR2抗體購自美國Abcam試劑公司，即用型快速免疫組化檢測試劑盒及DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3 統計學分析

應用SPSS 17.0統計軟件包進行分析。組間計數資料比較采用χ2檢驗，Galanin和GalR2相關性分析采用Spearman相關檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 Galanin蛋白的表達

Galanin免疫組織化學染色顯示，前列腺癌細胞胞漿中可見大量著黃褐色的顆粒，而在BPH細胞胞漿中Galanin則為低表達或表達缺失。Galanin在PCa組、BM組和BPH組中的陽性表達率分別為68.0%(34/50)、83.3%(25/30)和18.0%(9/50)，PCa組和BM組Galanin的陽性表達率均顯著高于BPH組(χ2=25.50、32.75,P<0.01)，但PCa組與BM組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 GalR2蛋白的表達

GalR2免疫組織化學染色顯示，BPH細胞胞膜上可見大量著黃褐色的顆粒，而在前列腺癌細胞的胞膜中GalR2則為低表達或表達缺失。GalR2蛋白在BPH組、PCa組、BM組中的陽性表達率分別為80.0%(40/50)、14.0%(7/50)和6.7%(2/30)，BPH組GalR2蛋白陽性表達率顯著高于PCa組和BPH組(χ2=43.72、40.43，P<0.01)，但是PCa組與BM組比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3 Galanin與GalR2蛋白在前列腺癌組織表達的相關性

在50例PCa組織中，Galanin表達陽性34例，GalR2表達陽性7例，二者均不表達9例；在30例BM組織中，Galanin表達陽性25例，GalR2表達陽性2例。Galanin與GalR2蛋白在PCa組和BM組中的表達均呈顯著負相關(rs=-0.55、-0.77，P<0.01)。

3 討 論

目前，前列腺癌的主要治療方法有體外放射、近距離照射、局部治療、內分泌治療及根治性前列腺切除術等。內分泌治療(如手術和藥物去勢、雄激素受體拮抗劑及其他抗雄激素藥物等)是晚期前列腺癌的主要治療措施，大多數病人在疾病早期采取內分泌治療有效，但病程在14～30個月后療效可能不佳，這種情況可認為前列腺癌已經發展為激素非依賴型。另有少數病人發現前列腺癌的時間較晚，或已出現全身轉移，發現時即為激素非依賴型前列腺癌，內分泌治療對于這類病人療效不佳，許多研究認為此情況與前列腺癌NED有關[8]。

Galanin最早是從牛的消化系統中被發現、分離的，它是一種神經多肽，在遞質釋放、攝食、疼痛、生殖、睡眠及覺醒等生理功能的調節中起作用[3]。目前,國內外已有研究顯示，在神經內分泌腫瘤中存在Galanin及其相關受體表達，如成神經細胞瘤及垂體腫瘤；Galanin對腦組織中進行的有絲分裂具有促進作用，因此提示其在神經內分泌腫瘤生長及進展過程中可能參與細胞增殖過程。Galanin有3種受體，分別是GalR1、GalR2和GalR3，Galanin主要是通過這3種受體的介導發揮作用[3]。目前3種GalR都已在人神經細胞腫瘤組織被檢測出來[9]，而在其他腫瘤各種GalR表達存在很大差異。GalR2可能同時擁有促增殖和抗增殖的作用，GalR2被證實在早期小細胞肺癌組織有促增殖作用[10]；最近的研究表明，GalR2在神經母細胞瘤、嗜鉻細胞瘤和頭頸部鱗狀細胞癌組織表達導致了細胞增殖的抑制[11-13]。GalR2在神經系統的增殖和凋亡方面有重要作用,但其在非神經系統惡性腫瘤的信號機制和功能卻是相對未知的[10]。 MISAWA等[14]報道，在頭頸部鱗癌細胞株中GalR2蛋白表達水平降低，而非腫瘤細胞中其表達水平穩定；在臨床組織標本中，GalR2基因啟動子的甲基化水平升高，且與病人無病生存期呈負相關，提示GalR2可能抑制腫瘤的生長，且在腫瘤的靶向治療及預后等方面具有研究潛力。

本研究結果顯示，前列腺癌組織中Galanin蛋白表達水平較高，而在BPH組織中其表達較低；相反，BPH組織中GalR2蛋白表達水平較高，而在前列腺癌組織中其表達較低；Galanin與GalR2蛋白在前列腺癌組織中的表達呈顯著負相關。以上結果提示，在前列腺惡性腫瘤組織中，Galanin蛋白表達持續升高，而GalR2的表達降低或缺失；在BPH組織中，兩種蛋白的表達情況剛好與惡性腫瘤相反。Galanin蛋白在前列腺癌組織中的表達情況與既往報道結果相似[4]，提示Galanin可能參與了前列腺癌的發病機制，對前列腺癌的診斷有一定臨床意義。而GalR2蛋白在前列腺癌組織中表達水平降低，與Galanin蛋白表達水平呈負相關，提示Galanin在前列腺癌組織可能是通過與GalR2之外的兩種受體相結合從而發揮生物學作用，也提示Galanin與GalR2蛋白的聯合檢測對前列腺良惡性病變的診斷具有較好的臨床意義。本研究的不足之處在于，Galanin蛋白在前列腺癌組織的表達升高，是否通過上調GalR1和(或)GalR3蛋白的表達發揮作用目前尚不明確，仍需進一步的研究。

綜上所述，Galanin和GalR2對良惡性前列腺腫瘤的鑒別及預測前列腺癌預后有一定的意義。然而，細胞內調節蛋白間相互作用是一個復雜的網絡，本文結果仍需進一步擴大樣本量后在多個相關受體基因及蛋白水平的研究中進行驗證、明確。

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