豬附紅細(xì)胞體感染途徑的探討及臨床治療藥物的篩選

齊向濤 許追 齊亞銀

（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子 832000）

豬附紅細(xì)胞體感染途徑的探討及臨床治療藥物的篩選

齊向濤 許追 齊亞銀*

（石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子 832000）

為了探討豬附紅細(xì)胞體的感染途徑和臨床常用的幾種藥物對豬附紅細(xì)胞體的治療效果，本試驗利用幾種常用藥物對新疆石河子150團(tuán)某豬場24頭感染豬附紅細(xì)胞體的仔豬進(jìn)行臨床治療試驗，結(jié)果表明，在每組治療的6頭患病豬中，青鏈霉素治療組僅有2頭痊愈，長效土霉素治療組有5頭痊愈，1頭患病豬附紅細(xì)胞體的感染率為20%，強力霉素治療組6頭均痊愈，貝尼爾治療組有5頭痊愈，1頭患病豬附紅細(xì)胞體的感染率為60%，表明除青鏈霉素外，其他三種藥物治療效果差異不明顯，強力霉素治療效果略優(yōu)于長效土霉素和貝尼爾。另外，本試驗還采用5種不同感染途徑對小鼠進(jìn)行感染試驗，結(jié)果表明靜脈注射組、傷口感染組、口服組、呼吸道感染組和皮下接種組的感染率分別為94%、91%、90%、78%、23%，表明附紅細(xì)胞體可通過上述5種途徑感染動物。小鼠感染后第30天血液鏡檢結(jié)果表明，附紅細(xì)胞體感染率降低了70%～80%，表明本試驗分離的附紅細(xì)胞體致病性較弱。

附紅細(xì)胞體；感染；治療

豬附紅細(xì)胞體病是由寄生于紅細(xì)胞表面或者游離于血漿的附紅細(xì)胞體引起豬的以發(fā)熱、貧血和黃疸為主要癥狀的人獸共患病，可造成仔豬的虛弱和貧血、母豬的繁殖障礙和育肥豬的生長緩慢[1-4]，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的發(fā)展。該病多呈隱性感染，所以一般不表現(xiàn)出臨床癥狀，但當(dāng)機(jī)體的抵抗力下降，其他病原菌混合感染時，可造成動物死亡[5-7]。由于各個年齡段、各種品種的豬均能感染豬附紅細(xì)胞體病，且仔豬由于免疫機(jī)能發(fā)育不全，抵抗力差，發(fā)病率高，死亡率也高。有些病豬自愈或治愈后生長受阻，成為僵豬。因此，如不能及時有效地控制該病的傳播，無疑會給養(yǎng)豬業(yè)帶來十分慘重的損失[5]。

近幾年來豬附紅細(xì)胞體病在石河子地區(qū)時常有發(fā)生，本病或者與本病混合感染等多重感染給生豬生產(chǎn)造成很大損失。筆者根據(jù)該病的流行情況、發(fā)病特點，對治療藥物進(jìn)行了有效篩選；采用靜脈注射、皮下接種、傷口感染、口服和呼吸道感染等5種途徑感染小鼠，以確定附紅細(xì)胞體的傳播途徑；并提出了該病的綜合防治措施，為該地區(qū)豬附紅細(xì)胞體病的診斷和治療提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

病料組織：2013年8月5號新疆石河子150團(tuán)某規(guī)模化豬場發(fā)現(xiàn)斷奶仔豬腹下和股內(nèi)有出血斑點，過幾天結(jié)痂，有的仔豬突然死亡，全身紅紫，經(jīng)過對該場部分仔豬抽血化驗，發(fā)現(xiàn)有的病豬抽血血流不止，有的仔豬四肢抽搐后死亡，注射氨芐西林、林克霉素、頭孢噻呋鈉發(fā)現(xiàn)病情并未好轉(zhuǎn)，6天內(nèi)死亡了8頭仔豬，還有24頭病豬未治愈。

1.2 方法

1.2.1 血液推片觀察

將從部分豬群身上采集的新鮮血液在載玻片上進(jìn)行推片，待推片自然干燥后，滴加瑞氏染液，染色3分鐘，然后滴加等量的蒸餾水染色5分鐘，用蒸餾水沖洗，待干燥后用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察。通過觀察顯微鏡視野下紅細(xì)胞形態(tài)以及紅細(xì)胞表面豬附紅細(xì)胞體的形態(tài)、大小、折光性并以百分率來表示感染率。

1.2.2 藥物治療試驗

將未治愈的24頭豬，根據(jù)病情嚴(yán)重程度及精神狀況平均分為4組，第1組使用長效土霉素進(jìn)行治療；第2組使用強力霉素進(jìn)行治療；第3組使用貝尼爾進(jìn)行治療；第4組使用青鏈霉素進(jìn)行治療。觀察4組病豬的治療情況。

1.2.3 小鼠感染豬附紅細(xì)胞體試驗

1.2.3.1 細(xì)胞液的制備

采集經(jīng)染色鏡檢鑒定為感染附紅細(xì)胞體的患病豬血液放入離心管中，經(jīng)1 500～1 800轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘，棄去上清液，加入20%pH 7.2，0.01 mol/L PBS溶液，用吸管反復(fù)吹打混勻后保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3.2 感染試驗

將預(yù)先準(zhǔn)備的30只小鼠均勻分為6組，每組5只，進(jìn)行感染豬附紅細(xì)胞體試驗。第一組為空白對照組，其他各組分別依次為靜脈注射組：尾根靜脈直接注射0.5mL/只的紅細(xì)胞液；皮下接種組：皮下注射0.5mL/只的紅細(xì)胞液；口服組：灌胃接種0.5 mL/只的紅細(xì)胞液；傷口感染組：體側(cè)薄皮部劃痕接種0.5 mL/只的紅細(xì)胞液；呼吸道感染組：5只小鼠和紅細(xì)胞液一并放置于密閉的通風(fēng)櫥內(nèi)一側(cè)，其中將紅細(xì)胞液放置于冰盒上的平皿中7天，每6小時更換一次冰袋，感染后第9天從小鼠尾靜脈采集血液推片染色，在400倍光學(xué)顯微鏡下觀察并記錄、統(tǒng)計豬附紅細(xì)胞體在小鼠體內(nèi)的感染情況。

2 結(jié)果

2.1 感染附紅細(xì)胞體豬臨床癥狀

感染附紅細(xì)胞體的病豬耳廓邊緣呈紫色，腹部及四肢末端明顯發(fā)紺（圖1、圖2）。

圖1 病豬耳廓邊緣呈紫色

圖2 病豬四肢明顯發(fā)紺

2.2 血液推片鏡檢結(jié)果

染色鏡檢發(fā)現(xiàn)，與正常豬群的紅細(xì)胞相比，患病豬的紅細(xì)胞邊緣不整，表面可見大小不等、形狀不一的紫紅色蟲體，即為附紅細(xì)胞體，附紅細(xì)胞體在鏡下有折光性。該病豬感染附紅細(xì)胞體較為嚴(yán)重，計算得到其感染率達(dá)到95%以上（圖3）。

圖3 感染附紅細(xì)胞體的紅細(xì)胞（左）與正常紅細(xì)胞（右）的比較

2.3 藥物治療試驗結(jié)果

通過對4組患病豬進(jìn)行7天的連續(xù)治療后，采集其血液進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)第1組中有5頭患病豬痊愈，附紅細(xì)胞體檢測為陰性，1頭患病豬紅細(xì)胞附紅細(xì)胞體的感染率為20%；第2組6頭患病豬均痊愈，附紅細(xì)胞體檢測為陰性；第3組中有5頭患病豬痊愈，附紅細(xì)胞體檢測為陰性，1頭患病豬紅細(xì)胞附紅細(xì)胞體的感染率為60%；第4組只有2頭患病豬痊愈，附紅細(xì)胞體檢測為陰性，其他4頭患病豬紅細(xì)胞附紅細(xì)胞體的感染率分別為40%、20%、40%和50%。

2.4 小鼠感染豬附紅細(xì)胞體試驗結(jié)果

通過靜脈注射、皮下接種、傷口感染、口服和呼吸道感染等5種途徑對小鼠進(jìn)行附紅細(xì)胞體感染試驗發(fā)現(xiàn)，上述幾種方式均可以感染小鼠。在感染后第9天，采集小鼠血液、涂片、鏡檢觀察結(jié)果，其中靜脈注射組的感染效果最好，感染率高達(dá)94%，其次是傷口組感染率為91%，口服組感染率為90%，呼吸道組感染率為78%，皮下接種組的感染率較低，為23%。但是在感染后30天采血、鏡檢發(fā)現(xiàn)，高感染率組附紅細(xì)胞體感染率降低了70%～80%不等。

3 分析與討論

3.1 治療附紅細(xì)胞體感染的4種藥物的療效對比

對4種治療附紅細(xì)胞體的藥物的療效進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，除青鏈霉素外，長效土霉素、強力霉素、貝尼爾都能對豬附紅細(xì)胞體進(jìn)行有效的治療，但是強力霉素臨床治療效果優(yōu)于長效土霉素和貝尼爾，該藥療效迅速，可以在短時間內(nèi)使病情趨于穩(wěn)定。長效土霉素是四環(huán)素類廣譜抗生素，該藥具有穩(wěn)定、副作用小、可以通過母體胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)等特點，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于附紅細(xì)胞體的防治。實踐證明，在飼料中添加土霉素可以降低附紅細(xì)胞體病的發(fā)病率，但是不能有效防止本病的發(fā)生。貝尼爾可以使發(fā)病動物貧血、黃疸、腹瀉等臨床癥狀恢復(fù)正常，但是該藥的副作用大，使用時應(yīng)注意劑量和次數(shù)，對懷孕母豬使用該藥常常導(dǎo)致流產(chǎn)等，因此選擇該藥應(yīng)慎重。

3.2 附紅細(xì)胞體的感染途徑

通過小鼠感染附紅細(xì)胞體試驗可知，豬附紅細(xì)胞體可以通過血液、傷口、口服、呼吸道及皮下注射等5種途徑傳播。由于該病為人畜共患病，人類同樣也可以經(jīng)過這5種途徑感染，因此獸醫(yī)工作者、屠宰場工作人員、飼養(yǎng)員等應(yīng)加強自身防護(hù)。本研究發(fā)現(xiàn)，靜脈注射組、傷口感染組、口服組、呼吸道感染組和皮下接種組的附紅細(xì)胞體感染率分別為94%、91%、90%、78%、23%。附紅細(xì)胞體可以經(jīng)過上述途徑直接或者間接進(jìn)入血液循環(huán)，由于進(jìn)入血液循環(huán)的途徑不同，所以導(dǎo)致該病的感染速度不同。但是對感染30天后的小鼠進(jìn)行采血、鏡檢發(fā)現(xiàn)，附紅細(xì)胞體感染率降低了70%～80%不等，表明本試驗分離的附紅細(xì)胞體致病性較弱，這與馮會權(quán)等[8]關(guān)于不同季節(jié)附紅細(xì)胞體的致病性也不同的研究結(jié)果基本相符。豬附紅細(xì)胞體病為季節(jié)性疾病，多發(fā)性季節(jié)為9、10月份[9]，但是本次發(fā)病為8月初，這可能與新疆晝夜溫差大的氣候條件有一定關(guān)系。

4 綜合防治措施

豬附紅細(xì)胞體是主要寄生于豬血液及骨髓中的一種微生物。在我國的大部分豬場豬體內(nèi)都可以檢測到附紅細(xì)胞體，只是感染比例不同。附紅細(xì)胞體類似于機(jī)體內(nèi)的正常菌群，在畜群健康的時候，它們在機(jī)體內(nèi)維持一個相對穩(wěn)定的平衡狀態(tài)；但當(dāng)畜群自身的免疫能力下降或者受外界條件刺激，這種平衡狀態(tài)可能被破壞，附紅細(xì)胞體會大量繁殖，從而引起該病的發(fā)生。

豬附紅細(xì)胞體病沒有典型的病理變化和臨床癥狀，該病的診斷容易和豬瘟、仔豬副傷寒、豬弓形體病等混淆，所以很難被及時診斷出并治療。到目前為止，防治豬附紅細(xì)胞體病的疫苗還未出現(xiàn)，所以控制該病的理念是“防重于治”。

創(chuàng)造良好的衛(wèi)生環(huán)境，建立科學(xué)的飼養(yǎng)管理方法是控制豬附紅細(xì)胞體病的有效手段。在實施免疫注射、斷尾、打耳號、閹割等飼養(yǎng)管理程序時，器械要嚴(yán)格消毒。該病對各階段的豬群均有危害，在北方地區(qū)該病一般在9、10月份多發(fā)，所以應(yīng)在本病的流行季節(jié)給予預(yù)防用藥，有的養(yǎng)殖戶使用土霉素堿粉、磺胺嘧啶粉進(jìn)行拌料預(yù)防取得了一定的效果。另外平時應(yīng)加強飼養(yǎng)管理，減少對豬群的各種應(yīng)激，及時殺滅蚊蟲等各種吸血昆蟲。

對感染附紅細(xì)胞體的母豬進(jìn)行及時監(jiān)測及有效防治是控制本病的重要措施。在對感染附紅細(xì)胞體的母豬進(jìn)行調(diào)查時發(fā)現(xiàn)，感染附紅細(xì)胞體的母豬會將該病傳給仔豬，這可能是導(dǎo)致仔豬附紅細(xì)胞體病高發(fā)的重要原因。另外，該病還經(jīng)常通過注射針頭傳播，因此，在注射疫苗或藥物時，應(yīng)注意及時更換針頭。

[1] Neimark H,Hoff B,Ganter M.Mycoplasma ovis comb. nov.(formerly Eperythrozoon ovis),an epierythrocyticagent of haemo lyticanaemia in sheepandgoats[J].Inte rnational Journal of Systematicand Evolutionary Microbiology,2004,54:365-371.

[2] 呂成林,蘇秀華,崔月榮,等.附紅細(xì)胞體病的病原學(xué)及診斷方法研究進(jìn)展[J].山東畜牧獸醫(yī),2011(8):84-86.

[3] 韓一超,焦福林,張玉換,等.豬附紅細(xì)胞體病流行病學(xué)調(diào)查[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,34(4):73-75.

[4] Li W,Du N,Xu B,et al.Alteration of integ rin-associated protein(CD47)on experimental porcine eperythrozoonosis[J]. Veterina ry Research Communications,2008,32(5):411-418.

[5] 劉永夏,劉建柱,成子強,等.應(yīng)用重組MSGI蛋白檢測豬附紅細(xì)胞體抗體的ELISA檢測方法的建立[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2011, 44(21):4508-4515.

[6] Hoelzle K,Peter S,Sidler M,et al.Inorganicpyrophosphatase in uncu ltivable hemotrophicmycoplasmas:identification and properties of the enzyme fromMycoplasma suis[J]. Microbiology,2010,10(1):194-202.

[7] Hoelz le LE.Haemotrophicmycoplasmas:Recent advances in Mycoplasma suis[J].Veterinary Microbiology,2008, 130:215-226.

[8] 馮會權(quán),徐昆,宋立先,等.豬附紅細(xì)胞體感染BALB/c小鼠模型的建議及相關(guān)指標(biāo)檢測[J].畜牧與獸醫(yī),2011,43(1):63-65

[9] 李清艷,翟向和,李新民,等.附紅細(xì)胞體病紅細(xì)胞免疫功能的研究[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2004,25(3):100-101.

S852.7

B

1673-4645(2014)04-0042-04

2013-10-21

齊向濤（1987-），男，陜西西安人，碩士研究生，主要從事獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)工作*

齊亞銀（1980-），男，副教授，主要從事動物傳染病的診斷與防治工作