麻黃多糖發(fā)汗、止咳與利尿活性研究

趙云生，毛福英，姚海花，白長(zhǎng)財(cái)，趙啟鵬

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，寧夏 銀川 750004；2.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，寧夏 銀川 750004；3.汾陽(yáng)市畜牧技術(shù)推廣站，山西 汾陽(yáng) 032200)

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麻黃多糖發(fā)汗、止咳與利尿活性研究

趙云生1,2，毛福英1,2，姚海花3，白長(zhǎng)財(cái)1,2，趙啟鵬1,2

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，寧夏 銀川 750004；2.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，寧夏 銀川 750004；3.汾陽(yáng)市畜牧技術(shù)推廣站，山西 汾陽(yáng) 032200)

目的：研究麻黃多糖的發(fā)汗、止咳與利尿活性。方法：采用氨水引咳法、著色法與濾紙法檢測(cè)比較未給藥的對(duì)照組小白鼠和給予麻黃多糖的實(shí)驗(yàn)組小白鼠的鎮(zhèn)咳率、發(fā)汗點(diǎn)數(shù)和排尿量。結(jié)果：高劑量(132mg/kg)與低劑量麻黃多糖(66mg/kg)的發(fā)汗、止咳作用均顯著優(yōu)于蒸餾水，但利尿作用低于蒸餾水。結(jié)論：麻黃多糖具有發(fā)汗與止咳功效，是麻黃的重要有效成分。

麻黃多糖；發(fā)汗；止咳；利尿

麻黃(Herba Ephedrae)藥用歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代本草書籍均有收載，在中醫(yī)藥中占有重要地位。2010年版中國(guó)藥典收載的麻黃為麻黃科植物草麻黃EphedrasinicaStapf.、中麻黃EphedraintermediaSchrenk et C.A.Mey.或木賊麻黃EphedraequisetinaBge.的干燥草質(zhì)莖，具有發(fā)汗散寒、宣肺平喘、利水消腫的功效[1]。商品麻黃多是草麻黃、木賊麻黃和中麻黃的混合品，以草麻黃產(chǎn)量最高[2]。通常認(rèn)為麻黃堿、揮發(fā)油等為麻黃的主要有效成分，近年研究發(fā)現(xiàn)麻黃多糖具有免疫調(diào)節(jié)[3]、清除氧自由基[4]、降血脂[5]等多種藥理活性。本研究針對(duì)藥典收載麻黃的臨床功效，對(duì)麻黃多糖的發(fā)汗、止咳與利尿作用進(jìn)行研究，以期為麻黃的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究作一補(bǔ)充。

1 材料與試劑

1.1 藥材

麻黃：購(gòu)自寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院門診部，由筆者鑒定為草麻黃(EphedrasinicaStapf.)的干燥草質(zhì)莖。

1.2 動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：清潔級(jí)昆明小鼠，雌雄各半，(20.0±2.0)g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)：SCXK(寧)2011-001。

1.3 試劑

磷酸可待因(香港澳美制藥廠)、毛果蕓香堿(西安永屹生物技術(shù)有限公司，Sigma-S0130)、蓖麻油(湖北科田藥業(yè)有限公司)。濃氨水、無(wú)水乙醇、碘、淀粉均為分析純。

2 樣品制備

2.1 麻黃多糖制備

取麻黃飲片200g，過(guò)60目藥典篩，以95%乙醇1 000mL超聲脫脂40min，舍棄乙醇脫脂液。將剩余殘?jiān)? 000mL水超聲提取3次，每次60min，合并水提液，濃縮至小體積后加無(wú)水乙醇，使乙醇濃度至85%，醇沉24h抽濾，沉淀減壓干燥，得麻黃多糖樣品。精密稱取60℃干燥至恒重的麻黃多糖1 320mg，加水溶解后定容至100mL容量瓶，備用[6-7]。

2.2 和田-高垣氏試劑制備

A液：取2g碘溶于100mL無(wú)水乙醇中，備用。

B液：取可溶性淀粉50g、蓖麻油100mL，混合均勻，備用。

3 分組與給藥方法

3.1 氨水引咳法[8]

選取健康昆明小鼠40只，按體重隨機(jī)均分為四組：①蒸餾水陰性對(duì)照組：給予等體積蒸餾水0.1mL/10g；②磷酸可待因陽(yáng)性對(duì)照組：腹腔注射可待因30mg/kg；③麻黃多糖低劑量組：給予麻黃多糖66mg/kg；④麻黃多糖高劑量組：給予麻黃多糖132mg/kg。

小鼠灌胃給藥1h或腹腔注射可待因0.5h后，放入含100mL濃氨水浸濕棉花的250mL廣口瓶?jī)?nèi)，關(guān)閉瓶蓋lmin，打開瓶蓋，取出小鼠2min，共3min，觀察小鼠表現(xiàn)，以腹肌收縮，同時(shí)張開大口，有時(shí)可有咳聲為指標(biāo)，記為咳嗽1次。記錄小鼠咳嗽潛伏期(放入廣口瓶至第1次咳嗽的時(shí)間)、2min內(nèi)咳嗽次數(shù)，若2min內(nèi)出現(xiàn)3次以上典型咳嗽動(dòng)作者為有咳嗽，否則算作無(wú)咳嗽。 觀察小鼠咳嗽潛伏期和2min咳嗽次數(shù)，計(jì)算鎮(zhèn)咳率。

鎮(zhèn)咳率(%) = (用藥組咳嗽潛伏期-蒸餾水陰性對(duì)照組咳嗽潛伏期) / 蒸餾水陰性對(duì)照組咳嗽潛伏期×100%。

3.2 著色法發(fā)汗[9]

取體重相近的40只小鼠，首先觀察其足底部有無(wú)污物，如有污物，用棉簽蘸取無(wú)水乙醇輕輕擦洗干凈。將其隨機(jī)分為四組，每組10只，雌雄各半：①蒸餾水陰性對(duì)照組：給予等體積蒸餾水0.1mL/10g；②毛果蕓香堿組陽(yáng)性對(duì)照組：腹腔注射毛果蕓香堿溶液35mg/kg；③麻黃多糖低劑量組：給予麻黃多糖66mg/kg；④麻黃多糖高劑量組：給予麻黃多糖132mg/kg。

給藥后分別置于小鼠固定器內(nèi)，仰位固定，暴露雙后肢。給藥30min后，用干棉簽輕輕拭干40只小鼠足趾部原有和掙扎所致的汗液。然后分別于每只小鼠足趾部皮膚涂上和田-高垣氏試劑A液，待充分干燥后，再薄薄涂上B液，然后用放大鏡仔細(xì)觀察著色點(diǎn)顏色(深紫色著色點(diǎn))及汗點(diǎn)出現(xiàn)的時(shí)間、顏色和數(shù)量，待汗點(diǎn)出現(xiàn)后，連續(xù)觀察30min，每10min記錄1次。

3.3 濾紙法利尿?qū)嶒?yàn)[10]

選取6～8周齡健康昆明小鼠30只，禁食不禁水8～12h，稱體重后(實(shí)驗(yàn)前體重)，隨機(jī)分成三組：①空白對(duì)照組：腹腔注射生理鹽水0.1mL/10g；②麻黃多糖低劑量組：腹腔注射麻黃多糖66mg/kg；③麻黃多糖高劑量組：腹腔注射麻黃多糖132mg/kg。

實(shí)驗(yàn)前先輕壓每只小鼠下腹排盡余尿，各用lmL生理鹽水灌胃作水負(fù)荷，給藥后分別將三組小鼠罩在鋪有數(shù)層濾紙，直徑為240mm的干燥大燒杯中(濾紙置于燒杯底部支架上，支架下放置約100mL水以減少尿液揮發(fā))，燒杯口蓋以鐵網(wǎng)罩，每小時(shí)換1次濾紙，換濾紙后立即稱量出濾紙?jiān)黾又亓孔鳛樾∈笈拍蛄浚灿^察3h。

3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Excel軟件整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用SPSS15.0軟件計(jì)算平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差，并進(jìn)行方差分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 麻黃多糖止咳作用

與蒸餾水陰性對(duì)照組相比，磷酸可待因陽(yáng)性對(duì)照組、麻黃多糖低劑量組、麻黃多糖高劑量組小鼠咳嗽率均明顯降低。麻黃多糖高劑量組小鼠鎮(zhèn)咳率顯著高于低劑量組，且二者具有量效關(guān)系，但麻黃多糖低或高劑量組小鼠鎮(zhèn)咳率均低于本實(shí)驗(yàn)劑量的磷酸可待因組。

與蒸餾水陰性對(duì)照組相比，磷酸可待因陽(yáng)性對(duì)照組、麻黃多糖低或高劑量組小鼠咳嗽次數(shù)均明顯減少，咳嗽潛伏期變長(zhǎng)；麻黃多糖高劑量組與磷酸可待因陽(yáng)性對(duì)照組小鼠咳嗽次數(shù)相差不大，但其咳嗽潛伏期顯著短于可待因陽(yáng)性對(duì)照組；麻黃多糖高劑量組小鼠咳嗽潛伏期長(zhǎng)于低劑量組，咳嗽次數(shù)少于低劑量組，說(shuō)明麻黃多糖具有減少小鼠咳嗽次數(shù)，延長(zhǎng)咳嗽潛伏期的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 麻黃多糖止咳實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.2 麻黃多糖發(fā)汗作用

與蒸餾水陰性對(duì)照組相比，毛果蕓香堿陽(yáng)性對(duì)照組、麻黃多糖低劑量組、麻黃多糖高劑量組小鼠發(fā)汗能力明顯增強(qiáng)；麻黃多糖高劑量組小鼠的發(fā)汗作用強(qiáng)于麻黃多糖低劑量組，且二者具有量效關(guān)系，但麻黃多糖低或高劑量組小鼠的發(fā)汗能力均不如本實(shí)驗(yàn)劑量的毛果蕓香堿組強(qiáng)。采用SPSS軟件進(jìn)行方差分析，結(jié)果顯示，與蒸餾水陰性對(duì)照組相比，麻黃多糖對(duì)小鼠的發(fā)汗作用達(dá)極顯著水平(P<0.01)，說(shuō)明麻黃中除生物堿外，多糖亦具有發(fā)汗功效，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 麻黃多糖對(duì)小鼠足趾部汗液分泌影響

注：與對(duì)照組比較，**P<0.01。

4.3 麻黃多糖利尿作用

麻黃多糖高、低劑量組小鼠3h內(nèi)排尿總量均明顯低于蒸餾水陰性對(duì)照組，說(shuō)明麻黃多糖利尿作用不強(qiáng)；麻黃多糖高、低劑量組相比，高劑量組小鼠的利尿作用明顯強(qiáng)于低劑量組，但仍顯著低于陰性對(duì)照組。對(duì)不同處理方式小鼠的平均排尿量進(jìn)行方差分析，結(jié)果表明，低劑量組小鼠的3h排尿量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，而高劑量組小鼠3h排尿量與對(duì)照組無(wú)顯著差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 麻黃多糖利尿作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05。

5 討論

與蒸餾水相比，低、高劑量麻黃多糖均具有發(fā)汗與止咳的功效，說(shuō)明麻黃多糖與麻黃中其它藥效物質(zhì)一樣，具有藥材麻黃的部分功效。

本研究中麻黃多糖低、高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組相比，止咳與發(fā)汗活性均較低，這種現(xiàn)象與磷酸可待因與毛果蕓香堿的給藥劑量有關(guān)，其對(duì)于麻黃多糖的鎮(zhèn)咳、發(fā)汗功效評(píng)價(jià)并無(wú)影響。本實(shí)驗(yàn)中毛果蕓香堿溶液的配制濃度不能過(guò)大，否則會(huì)導(dǎo)致小鼠過(guò)量發(fā)汗而死。

本研究表明，麻黃多糖利尿作用不強(qiáng)，說(shuō)明麻黃利水消腫的功效可能是由其它藥效物質(zhì)作用的結(jié)果。造成麻黃多糖組小鼠排尿量不及陰性對(duì)照組的原因也可能為麻黃多糖的發(fā)汗作用。在試驗(yàn)過(guò)程中，麻黃多糖低、高劑量組小鼠均表現(xiàn)出明顯的發(fā)汗作用，小鼠體內(nèi)水分可能更多地從汗腺分泌，而不是經(jīng)尿道排泄。綜上所述，麻黃多糖具有明顯發(fā)汗與止咳功效，但利尿作用不顯著，是麻黃的重要有效成分。

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Study on Diaphoresis, Antitussive and Diuresis of Polysaccharide fromEphedrasinicaStapf.

Zhao Yunsheng1,2, Mao Fuying1,2, Yao Haihua3, Bai Changcai1,2, Zhao Qipeng1,2

(1.Ningxia Medical University Pharmacy College , Ningxia 750004,China;2.Ningxia Research Center of Modern Hui Medicine Engineering and Technology, Yinchuan 750004,China;3.Animal Husbandry Technical Advice Station of Fenyang County, Fenyang 032200,China)

Objective:Study on the diaphoresis, antitussive and diuresis activity of polysaccharide fromEphedrasinicaStapf. Methods:Ammonia water induced cough model, mice colouring method, and filter paper method were used to detect the cough relieving rate, sweating colouring points and urine output. Results:The polysaccharide high (132mg/kg) or low (66mg/kg) dose group had higher activity of diaphoresis and antitussive than the distilled water negative control group, but had lower diuresis activity than the distilled water negative control group. Conclusion:The polysaccharide has the activity of diaphoresis and antitussive, and is a part of effective components ofEphedrasinicaStapf.

EphedrasinicaStapf.; Polysaccharides; Diaphoresis; Antitussive; Diuresis

2014-05-08

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81160505)

趙云生(1974-)，男，博士，寧夏醫(yī)科大學(xué)副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幤焚|(zhì)與資源。

R285.5

A

1673-2197(2014)16-0011-03