流式細胞術分析帶狀皰疹患者外周血T淋巴細胞亞群的變化

盧峰 上官莉娟 陳濤 詹紅英

【摘 要】目的：研究帶狀皰疹患者外周血T淋巴細胞亞群的水平及變化特點，為其治療提供參考。方法：采用多參數四色免疫熒光標記流式細胞術分析比較90名帶狀皰疹患者及40名健康對照組的外周血T淋巴細胞亞群。結果：與對照組比較帶狀皰疹患者CD3+、CD4+細胞百分率明顯減少，CD4+/ CD8+比值降低，CD8+細胞百分率升高，以上指標與正常對照組比較差異顯著（P<0.01）。結論：帶狀皰疹患者外周血T淋巴細胞亞群存在免疫異常，監測其T淋巴細胞亞群水平對評估患者的細胞免疫功能及疾病的診斷、預后有積極的臨床意義。

【關鍵詞】帶狀皰疹；T淋巴細胞亞群；流式細胞術

【中圖分類號】R730.4 【文獻標識碼】B 【文章編號】1004-7484（2014）04-1898-01

Changes in peripheral blood T lymphocyte subsets in patients with herpes zoster flow cytometry

Lu Feng 1， Shang guan Li juan 2，Chen Tao 1 Zhan Hong ying1，

（1.Central Laboratory， Jian yang City People's Hospital， Jian yang， Sichuan， 641400； 2.Orthopedics Department， Jian yang City People's Hospital， Jian yang， Sichuan， 641400）

【Abstract】Objective： The purpose of the research is to study the peripheral blood of patients with herpes zoster levels and changes of T lymphocyte subsets， and the information will serve as future reference for its potential treatment. Methods： A multi-parameter four-color immunofluorescence flow cytometry analysis of peripheral blood comparing 90 patients with herpes zoster and 40 healthy controls T lymphocyte subsets. Results： Compared with control group patients with herpes zoster CD3 +， CD4 + cells was significantly reduced， CD4 + / CD8 + ratio decreased， CD8 + cells was elevated above the normal control group index and the difference was significant （P <0.01）. Conclusion： Patients with herpes zoster presence of peripheral blood T lymphocyte subsets of immune abnormalities， monitoring their levels of T lymphocyte subsets evaluate cellular immune function and disease diagnosis in patients. A positive clinical prognosis is expected.

【Key words】： herpes zoster、t lymphocyte subsets、flow cytometry

帶狀皰疹是一種由水痘-帶狀皰疹病毒（VZV）感染引起的疾病，其發病與機體免疫狀態特別是細胞免疫功能降低有關[1]。我們利用流式細胞儀檢測帶狀皰疹患者外周血T淋巴細胞亞群，以探討帶狀皰疹與T淋巴細胞的關系。

1資料與方法

1.1臨床資料

1.1.1標本來源90例患者均為我院皮膚科收治的患者，全部病例結合病史及臨床特點參照文獻[2]確診為帶狀皰疹的患者。年齡25-81歲，平均年齡56歲，其中男48例，女32例。在選擇病例時我們排除了以下情況：伴有嚴重的心、肺等系統性疾病患者；惡性腫瘤患者；妊娠及哺乳患者；合并紅斑狼瘡等自身免疫性疾病患者；應用免疫抑制劑患者。正常對照組40例，為我院體檢中心健康體檢者，年齡20-76歲，平均年齡48歲，其中男22例，女18例。

1.2儀器與方法

1.2.1 儀器與試劑 美國Beckman Coulter 公司生產的FC500流式細胞儀及配套試劑。

1.2.2 檢測方法 使用直接免疫熒光標記全血溶血法，流式細胞儀測定被檢者外周血T淋巴細胞亞群。

取CD45FITC/CD4PE/CD8-ECD/CD3PC5四色熒光標記抗體20μl放入標準試管中，加入被檢者的外周抗凝全血100μl，振蕩混勻后，室溫避光反應20分鐘；取出試管，加入500μl Optilyse C溶血素，即刻振蕩混勻后，室溫避光反應10-15分鐘（溶血完全后，管內液體透亮）；加500μl的PBS，震蕩混勻后，室溫避光反應10分鐘后，上機檢測。

1.3 統計學方法 結果以均數±標準差 （ ±S）來表示，兩組間比較采用兩樣本均數t檢驗。

2 結果

帶狀皰疹患者外周血T淋巴細胞亞群測定結果見表1。測定組與對照組相比較CD3+、CD4+細胞百分率、CD4+/ CD8+比值明顯低于對照組，CD8+細胞百分率明顯高于對照組。

3 討論

臨床流式細胞學檢驗技術（CFC）是檢驗醫學領域繼基因診斷技術平臺之后誕生的又一個新型檢驗技術平臺，通過對來自血液、組織、脫落細胞等標本中細胞表面及其內部的核酸、蛋白質、多肽成分的定性定量分析，廣泛用于臨床疾病的診斷與鑒別、病情監測、療效評估和預后判斷等[3-5]外周血T淋巴細胞亞群含量分析是CFC臨床應用的主要項目之一。

帶狀皰疹的病原是水痘-帶狀皰疹病毒（VZV），VZV在不同免疫力的人群中引起兩種獨立的臨床疾病，在兒童人群中易引起原發感染，常表現為自限性，癥狀較輕；部分病毒可持久地以一種潛伏的形式長期存在于脊髓神經或顱神經的感覺神經節的神經元中[6]，當機體免疫力下降或在各種理化因素刺激下，神經節內潛伏的病毒被激活并增值，進而使受侵犯神經軸突所支配區域的局部皮膚出現呈簇狀分布的皰疹等，同時，受累神經節發生炎癥或壞死，引起不同程度的神經痛，嚴重影響患者的生活質量。激發帶狀皰疹的原因尚未完全清楚。目前大多研究表明細胞免疫抑制可能是病毒再激活和發生播散的主要原因[7]。T淋巴細胞是機體免疫系統中最重要的一類細胞群，在正常機體內各T淋巴細胞亞群相互作用，并保持一定的平衡，以確保免疫功能的正常，當不同淋巴細胞亞群的數量和功能發生異常時，即可導致機體免疫系統功能紊亂，并發生一系列的病理改變，使機體感染病毒的機會增加。本資料結果表明，帶狀皰疹患者外周血T細胞亞群CD3+、CD4+明顯下降，CD8+升高，CD4+/ CD8+比值降低，與對照組比較均有顯著性差異（p<0.05）。提示帶狀皰疹患者存在T細胞亞群數量的變化，存在特異性的T細胞免疫抑制。外周血T細胞亞群的水平，特別是CD4+/ CD8+比值是反映免疫內環境穩定的一個重要標志，VZV被激活通過復制、增值、變異表現出抗原性，誘發免疫應答，導致特異性細胞免疫抑制，使CD4+/ CD8+比值降低，可見CD4+/ CD8+比值下降在病毒性疾病中有著重要意義。但也有個別學者檢測總CD3+細胞與正常人比較無明顯變化[8]，這可能是由于各研究檢測方法不同與實驗數據統計量差異引起的。不同研究均表明帶狀皰疹患者存在著特異性的T細胞免疫抑制。帶狀皰疹細胞免疫功能低下可能與患者血清可溶性白細胞介素-2受體明顯升高，可消耗白細胞介素-2（IL-2）使IL-2介導的T細胞亞群的分化、增值減弱有關[9]。也有研究證明CD4+T細胞參與了帶狀皰疹的發展，特別是分泌IL-2和TNF-α的Th1細胞亞群的改變影響了疾病的轉歸[10]。

利用流式細胞儀檢測帶狀皰疹患者外周血T淋巴細胞亞群是研究細胞免疫在該病發病機制中作用的一個重要方法。對于發病高危人群早期監測T淋巴細胞亞群水平，可以及時采取積極的預防措施，避免嚴重后遺癥的出現。

參考文獻

[1] 張煒.帶狀皰疹病毒致病性和防治的研究進展[J].國外醫學皮膚病分冊，1996，22：257.

[2] 趙辯.臨床皮膚病[M].3版.南京：江蘇科學技術出版社，2001：300. [3] Okada Y Flow cytometry-------the basis of cell surface analysis and clinical application[J].Rinsho Byori，2010，58（11）：1121-1130

[4] Avlasevich S，Bryce S，De Boeck M，et al.Flow cytometric analysis of micronuclei in mammalian cell cultures：past，present and future[J].Mutagenesis，2011，26（1）：147-152.

[5] Siebert JC， Walker EB. Monitoring cytokine profiles during immu-notherapy[J].Immuntherapy，2010，2（6）：799-816

[6] 楊國亮，王俠生.現代皮膚病學[M].上海：上海醫科大學出版社，1996.293-297.

[7] 王家璧.帶狀皰疹的診治及治療中的誤區[J].中國臨床醫生，2009，37（12）：5-6.

[8] 李大寧，余紅.帶狀皰疹患者外周血T淋巴細胞亞群分析.上海免疫性雜志，1995，15：181.

[9] 余春艷，張盈華，張立朝，等.帶狀皰疹患者可溶性IL-2R和T細胞亞群的變化.細胞與分子免疫性雜志，2000，2：146

[10] 吳敏毓，劉恭植.醫學免疫學[M].第3版.合肥：中國科技出版社，1999：78.