同步換血療法對高膽紅素血癥新生兒細胞免疫功能的研究

王紹燕

【摘 要】目的：動態觀察高膽紅素癥新生兒同步換血前中后，T細胞亞群及NK細胞的變化，為高膽紅素血癥新生兒換療法提供細胞免疫學基礎理論。方法：采用間接熒光法和SP法，檢測高膽紅素血癥新生兒換血前、換血中、換血后3個時段中T細胞亞群及NK細胞的表達水平。結果：高膽紅素血癥新生兒換血前與換血中、換血后比較，除了換血中CD8外，其它均P＜0.01，差異有統計學意義。結論：高膽紅素血癥新生兒換血治療后各種免疫細胞的變化，證實了高膽紅素血癥新生兒換血治療是迅速的、科學的、臨床行之有效的一種治療方法，為高膽紅素血癥新生兒早期換血療法充實了免疫學基礎理論。

【關鍵詞】T細胞亞群；NK細胞；高膽紅素血癥；新生兒；同步

【中圖分類號】R722 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-7484（2014）03-01103-01

新生兒高膽紅素血癥是由各種原因引起的新生兒期最常見疾病之一，嚴格威脅新生兒生命健康，約有50%~75%患兒死于急性期，幸存者約有75%~90%留有聽力、視覺、智能發育等嚴重的神經系統后遺癥【1】。換血治療是高膽紅素血癥最迅速的方法，目前多采用同步換血治療（即同時、同步由外周靜脈注血，撓動脈或肱動脈抽血）【2、3】。本文筆者自2009年1月至2012年12月間在我院新生兒科診斷為病理性高膽紅素血癥新生兒70例進行了外周動靜脈同步換血療法，同時在換血治療的前、中、后3個時段，分別檢測血清膽紅素變化及血液中免疫細胞水平的變化，皆在探討換血療法對高膽紅素血癥新生兒細胞免疫功能的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象為2009年1月至2012年1月間在我院兒科診斷為病理性高膽紅素血癥的新生兒70例，其中男性50例，女性20例。胎齡（36+5）W，出生體重（2.886+0.709）kg； 早產118例，足月兒62例。黃疸原因：ABO血型不含溶血病40例，G-6-PD缺乏癥18例，β-地中海盆血1例，感染性黃疸3例，早產兒8例。20例為高膽紅素血癥腦病警告期新生兒。所有患兒均行同步控血治療，住院時間為5-8d，平均7.2d。高膽紅素血癥新生兒血清均超過342μmol/L，且主要為結合膽紅素。

所有病例均符合中華醫學會兒科學會新生兒學制定的換血標準【4】：（1）產前診斷基本明確而新生兒出生時，臍帶血紅蛋白低于120g/L，伴水腫、肝脾腫大，心力衰竭者；（2）血清膽紅素超過342μmol/L，且主要為結合膽紅素者；（3）凡有早期核黃疸癥狀者，不論血清膽紅素濃度高低，都要考慮換血因為核黃的發生與否，除與血清膽紅素有關外，尚需考慮其他因素；（4）早產兒及前一胎病情嚴重者，尚需適當放寬換血指征。因為早產兒有較多促進核黃疸發生的因素。前一胎有死胎，全身水腫、嚴重貧血等病史者，此胎也往往也嚴重。生后數天也可考慮換血。

標本采集：每一位高膽紅素血癥新生兒在換血前、中、后均抽脂動脈肝素抗凝血2ml，以備檢測用。

1.2 方法

①常規檢查血清膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素在換血前、換血中、換血后3個時段變化值；②T細胞亞群（CD3、CD4、CD8）的測定采用間接免疫熒光技術，分別檢測CD3、CD4、CD8細胞百分率。試劑由美國RD有限公司提供，嚴格按說明操作；③自然殺傷細胞（NK16、NK57）的測定采用SP法（Biotin-Strdptarin-Peroxdase)，試劑由美國RD有限公司提高，嚴格按照說明操作。

1.3 統計學處理

檢驗數據均以SPSS10.0統計軟件進行統計學分析，數據以均數±標準差表示，組間均數比較采用t檢驗，P＜0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 換血前、中后膽紅素變化

70例患兒換血前、中后血清總膽紅素、間接膽紅素顯著下降，換血后總膽紅素、間接膽紅素換出率分別為52.66%、52.25%，直接膽紅素換血前、中、后無顯著差異，見表1。

2.2 換血前、換血中、換血后3個時段T細胞亞群、NK細胞表達水平變化

70例高膽紅素血癥新生兒換血前、中、后T細胞亞群、NK細胞比較，P均＜0.01游離膽紅素對腦細胞有毒性作用，血與腦游離膽紅素梯度越高，則進入腦的量越多，膽紅素腦病的發生率越高【5】。換血療法可以換出85%~90%的致敏紅細胞及降低循環中60%的膽紅素抗體，因此，雙倍量換血能迅速有效地防止膽紅素腦病的發生【6】本組病人膽紅素的換出率為52.66%，與文獻報道的50%-60%的膽紅素換出率相符合【2.7】。。本組病例中有1例出現膽紅素腦病的癥狀，經換血后膽紅素腦病的癥狀消失，但腦干聽覺誘發電位檢查異常，提示換血能阻止病情的進一步發展，但對已發生的腦損傷無逆轉作用。因此，必須掌握換血的適應癥，對存在高危因素的患兒應盡早行換血術。同步換血可有效降低血中膽紅素，換出致敏的紅細胞，減輕溶血，從而避免膽紅素腦病的發生。

T細胞是不均一的群體，可根據表面分子及免疫功能分成不同的亞群。CD3細胞表達αβTCR占100%，而CD4、CD8細胞表達αβTCR占60%-65%。T細胞亞群具有識別抗原、細胞毒性作用，抑制T細胞作用。既有免疫調節作用，又有效應細胞作用【8】。而自然殺傷細胞NKCD16、NKCD57也是重要的免疫細胞，不僅參與抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調節，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發生【9】。這些免疫細胞在高膽紅素血癥新生兒換血治療前、中、后期3個時段的表達水平，我們進行了檢測和相關性研究。

本資料顯示，高膽紅素血癥新生兒換血前與換血中、換血后各種免疫細胞比較，P均＜0.01，差異有統計學意義。值得注意的是，高膽紅素血癥新生兒血中高濃度膽紅素可降低人體網關內皮系統的吞噬功能，并抑制細胞免疫功能【10】。具有毒性作用的間接膽紅素抑制了患兒整體免疫功能。同時，膽紅素具有細胞毒性作用，它通過啟動活化Fas基因表達，導致淋巴細胞凋亡，使患兒免疫功能降低【11】。高膽紅素血癥新生兒血中膽紅素濃度越高，其毒性對患兒T細胞亞群及NK細胞產生了免疫耐受，表達水平受到抑制，因此，臨床表現為T細胞亞群及NK細胞數量減少【12】本文證實了以上相關理論，同時也證實了膽紅素不僅可損害新生兒的顱腦屏障及中樞神經系統，還可致患兒整體的細胞免疫功能低下，這也是高膽紅素血癥新生兒易并發感染的理論基礎。

同時，本資料也進一步證實了同步換血療法是治療高膽紅素血癥新生兒迅速的、科學的、臨床行之有效的一種方法。從表1、表2 中可以看出，高膽紅素水平由換血前、換血中、換血后、血清膽紅素、間接膽紅素水平由換血前的高濃度水平迅速降低乃至恢復正常；各種細胞是由換血前低水平慢慢增高，乃至恢復正常。這是因為換血可及時有效地移去抗體和致敏紅細胞，減輕溶血，降低患兒血中膽紅素血清濃度、防止核黃疸，及時糾正貧血，防止新生兒心力衰竭。

由此可見，同步換血療法可有效降低血中膽紅素，換出致敏紅細胞，從而避免膽紅素腦病的發生。換血后血氣、電解質的內環境的變化均在正常范圍，同時換血療法可提高高膽紅素血癥新生兒的細胞免疫功能，并可縮短療程。筆者通過動態觀察高膽紅素血癥新生兒換血治療的各種免疫細胞的變化，證實了高膽紅素癥新生兒換血治療是迅速的、科學的、行之有效的一種方法。本研究為高膽紅素血癥新生兒換血療法充實了免疫學基礎理論。

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