丙型肝炎病毒特異性細胞毒性T淋巴細胞功能分析

宋鐵英

【摘 要】目的：研究丙型肝炎患者丙型肝炎病毒（HCV）特異性細胞毒性T淋巴細胞（CTL）的功能。方法：將表達丙型肝炎病毒核心蛋白的真核表達質粒通過基因轉染法轉染HepG2細胞，并通過篩選獲得穩定的轉染Hep-Core細胞，使用蛋白質印跡法檢測證實有HCV核心蛋白表達；分離患者外周血中的單個核細胞，經體外誘導擴增后得到HCV特異性CTL（HCV-CTL），以Hep-Core細胞和HepG2細胞作為靶細胞，運用乳酸脫氫酶釋放法檢測HCV-CTL的活性，用酶聯免疫吸附法檢測培養上清液中干擾素-γ（IFN-γ）的含量，選擇10例正常人作為對照組。結果：丙型肝炎組患者HCV-CTL活性為（24.1±4.6）%，正常對照組為（43.2±6.1）%，兩組比較差異有統計學意義（P<0.05）。丙型肝炎組患者靶細胞培養上清液中IFN-γ的濃度為（961±239）pg/ml，正常對照組為（3125±676）pg/ml， 兩組比較差異有統計學意義（P<0.05）。結論：慢性丙型肝炎患者HCV-CTL活性降低，CTL的免疫功能低下與病毒水平和基因型有一定關系。

【關鍵詞】丙型肝炎病毒；特異性細胞毒性T淋巴細胞；功能

【中圖分類號】R373.2+1 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-7484（2014）02-0763-01

慢性丙型肝炎是一種具有嚴重危害性的傳染性疾病[1]。一些報道表明丙型肝炎患者CTL的免疫功能低下，只能起到抗感染的作用，無法抵抗感染細胞中的病毒，導致病毒一直存在于細胞中，最后可能誘發肝癌。本文對18例慢性丙型肝炎患者外周血中丙型肝炎病毒CTL的活性進行檢測，研究了丙型肝炎患者丙型肝炎病毒CTL的功能?，F將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

慢性丙型肝炎患者18例，其中男11例，女7例，年齡25-56歲，平均年齡41.32歲。所有患者均符合丙型肝炎相關診斷標準，排除乙肝和免疫缺陷病感染，且半年內沒有接受抗病毒和免疫調節治療。使用特異性引物聚合酶鏈式反應法進行丙型肝炎病毒基因型檢測。此外選擇10例正常人作為對照，其中男6例，女4例，年齡19-36歲，對照人員免疫缺陷病毒和肝炎標志物檢測均為陰性，無飲酒和損肝藥物使用史。

1.2 實驗方法

使用PCR-SSP法對患者進行丙型肝炎病毒基因型檢測。將表達丙型肝炎病毒核心蛋白的真核表達質粒通過基因轉染法轉染HepG2細胞，經篩選獲得穩定轉染的Hep-Core細胞，經過蛋白質印跡法檢測證實有HCV核心蛋白表達；分離患者外周血中的單個核細胞，經體外誘導擴增獲得HCV特異性CTL（HCV-CTL），以Hep-Core細胞和HepG2細胞作為靶細胞，運用乳酸脫氫酶釋放法檢測HCV-CTL的活性，用酶聯免疫吸附法檢測培養上清液中干擾素-γ（IFN-γ）的含量，以正常人作為對照組。

1.3 統計學處理

使用采用 SPSS15.0分析軟件包對所得到的數據進行分析處理，計量資料采用方差分析和t檢驗，P<0.05，具有統計學意義。

2 結果

2.1 轉染細胞中丙型肝炎病毒核心蛋白的表達

運用蛋白質印跡法檢測證實使用HCV-C轉染的HepG2細胞中有HCV核心蛋白表達，沒有轉染或空白的細胞中無HCV核心蛋白表達。

2.2 HCV-CTL活性檢測

運用乳酸脫氫酶法分析18慢性丙型肝炎患者和10例正常人的HCV-CTL活性。丙型肝炎組患者的HCV-CTL活性為（24.1±4.6）%，正常對照組為（43.2±6.1）%，兩組比較差異有統計學意義（P<0.05）。

2.3 靶細胞培養上清液中IFN- γ濃度的測定

丙型肝炎組患者靶細胞培養上清液中IFN-γ的濃度為（961±239）pg/ml，正常對照組為（3125±676）pg/ml， 兩組比較差異有統計學意義（P<0.05）。

2.4 HCV-CTL活性和獲得SVR的關系

本研究中另外選取完成常規抗病毒治療的慢性丙型肝炎患者16例，其中獲得SVR患者9例，無應答患者7例，均經過HCV-CTL活性檢測。其中獲得SVR患者的HCV-CTL活性為（41.5±2.6）%，無應答患者為（25.1±3.5）%，兩組比較差異有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

慢性丙型肝炎（CHC）是一種具有嚴重危害性的傳染性疾病，主要通過血液傳播。CHC的發病機制比較復雜，丙型肝炎病毒（HCV）和人體免疫系統的相互作用決定了該病的發生發展和轉化。HCV慢性感染可能引發肝臟慢性炎癥、纖維化等，嚴重者甚至會導致肝癌[2]。丙型肝炎患者CTL免疫功能和肝病的惡化程度有一定的關系[3]。CTL免疫功能低下包括細胞抗病毒能力下降、刺激后增殖能力下降、IFN-γ分泌減少等。丙型肝炎病毒感染細胞后機體會產生針對HCV的特異性細胞毒性T淋巴細胞（CTL）免疫應答，CTL的數量和質量決定了機體阻止病毒感染惡化和清除病毒感染的效果。如果CTL的免疫應答較強，能夠起到完全清除HCV的作用；如果CTL的免疫應答功能低下，只能起到抗感染的作用，無法抵抗感染細胞中的病毒，導致病毒一直存在于細胞中，最后可能誘發肝癌。

本次研究發現，慢性丙型肝炎患者HCV-CTL的活性明顯低于正常人。研究顯示細胞誘導后CTL培養上清液中IFN-γ濃度的濃度較正常人明顯降低，這也說明慢性丙型肝炎患者CTL細胞的分泌能力明顯下降，進一步導致其免疫功能低下。獲得SVR患者的HCV-CTL活性明顯高于無應答組，可見隨著血液中HCV RNA水平的下降，細胞中HCV-CTL的活性顯著提高，提示HCV-CTL活性和HCV RNA復制水平有一定相關性，CTL細胞的免疫功能和控制丙型肝炎病毒復制和清除的基因組有一定關系。

綜上所述，本次研究表明慢性丙型肝炎患者HCV-CTL的活性降低，CTL的免疫功能會隨之下降。慢性丙型肝炎患者HCV-CTL活性降低，CTL的免疫功能低下與病毒水平和基因型有一定關系。

參考文獻：

[1] 竇曉光，丁洋.慢性丙型肝炎抗病毒治療的新策略和新方法[J].中國實用內科雜志，2010，08（03）：54-55.

[2] 郭振華，陳青鋒，趙正斌.HCV基因分型與干擾素療效相關性探討[J].臨床檢驗雜志，2010，13（04）：42-43.

[3] 袁英.慢性丙型肝炎病人唾液及精液中無丙型肝炎病毒RNA[J].國外醫學.內科學分冊，2011，09（07）：71-72.