原子吸收分光光度法測定桿菌肽鋅預混劑的鋅含量

余德照等

摘 要：本文闡述利用鋅元素的特征譜線（鋅原子從基態到激發態在213.8 nm處有最大吸收），創建了原子吸收法測定桿菌肽鋅預混劑中鋅的含量，并對方法進行了驗證。結果表明，該方法在鋅離子濃度為0.25～1.00 μg/mL的范圍內，濃度與吸光度之間具有良好的線性關系，回歸方程為y=0.401x+0.0437 相關系數r=0.9975，且精密度高、平均回收率為100.1% RSD=2.0%。

關鍵詞：桿菌肽鋅預混劑；測定；鋅含量；原子吸收

桿菌肽鋅由鋅與桿菌肽絡合而成，主要以桿菌肽鋅預混劑的制劑形式在飼料中使用，有效成分為桿菌肽，其作用主要是抑制革蘭氏陽性菌的生長。鋅與桿菌肽絡合，有利于增加桿菌肽的穩定性，因此鋅在本品的含量顯得尤為重要。中華人民共和國獸藥典[1]、歐洲藥典 （EP[2]）及USP藥典 [3]中只有對桿菌肽鋅原藥中有鋅含量測定方法。本實驗參照USP藥典35版“桿菌肽鋅”的原子吸收分光光度法，建立了桿菌肽鋅預混劑的鋅含量原子吸收分光光度測定法，并對方法進行了驗證。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

電子天平（梅特勒-托利多AB135-S型）、攪拌器、原子吸收分光光度計（北京普析通用 TAS-990型）、乙炔（南平金山氣體有限公司）、空心陰極燈（北京普析通用）。氧化鋅工作基準物（含量：99.95%～100.05% 天津化學試劑研究所）；鹽酸（AR. 衡陽市凱信化工試劑有限公司）、15%桿菌肽鋅預混劑（批號P120810、P120709、 P120712、P120801綠康生化股份有限公司生產）、10%桿菌肽鋅預混劑（批號 P120704、P120706 、P120707綠康生化股份有限公司生產）。

1.2 試劑

1 mol/L鹽酸溶液：量取90 mL鹽酸溶液（AR.）至燒杯中加入900 mL超純水攪拌均勻，待冷卻后移入1 L容量瓶中，少量、多次蕩洗燒杯，洗液需全部移入容量瓶中，最后用超純水定容至刻度，搖勻。

0.01 mol/L鹽酸溶液：取1.00 mL的1 mol/L鹽酸溶液移至1 L容量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻。

0.001 mol/L鹽酸溶液：取1.00 mL的1 mol/L鹽酸溶液移至1000 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻。

鋅標準儲備液：精密稱定氧化鋅工作基準物3.11 g置于250 mL容量瓶中，加入1 mol/L鹽酸溶液80 mL使溶解，冷卻，用超純水稀釋至刻度，混勻，制成每毫升含10 mg鋅的鋅標準儲備液。

鋅標準中間液：精密吸取鋅標準儲備液1.00 mL移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L HCL稀釋至刻度，混勻，配制成每毫升含100 μg鋅的鋅標準中間液。

2 方法與結果

2.1 測定方法

利用元素在乙炔焰中被轉化為基態原子蒸氣，且在一定的濃度范圍內蒸氣對該元素空心陰極燈發射的特征譜線的吸收強度與被測元素含量成正比的原理，在213.8 nm處測定各鋅溶液的吸光值，用外標法定量計算鋅含量。按照下式計算：

式中：C為依據標準曲線得出的供試品溶液濃度，單位μg/mL；

W為桿菌肽鋅樣品重量，單位mg。

2.2供試品溶液制備

取供試品約100 mg，精密稱定，置于100 mL容量瓶中，加入0.01 mol/L鹽酸溶解并稀釋至刻度，混勻。吸取此溶液1.00 mL移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L鹽酸稀釋至刻度，混勻，即得。

2.3 鋅標準曲線的建立

分別精密吸取鋅標準中間液0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL、1.00 mL分別移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L HCL稀釋至刻度，混勻，即得0.25 μg/mL、0.50 μg/mL、0.75 μg/mL、1.00 μg/mL的鋅標準工作液。在乙炔焰中，以0.001 mol/L的HCL為空白進行基線校零，在213.8 nm處測定上述各鋅標準工作液的吸光度，以鋅標準工作液為橫坐標，對應的吸光度為縱坐標，繪制工作曲線。

結果見圖1。結果顯示：鋅標準品工作液濃度為0.25～1.00 μg/mL，線性回歸方程為y=0.401x+0.0437，相關系數r=0.9975。

2.4 樣品測定范圍的確認

精密稱定15%桿菌肽鋅預混劑供試品（批號P120810）約40 mg、70 mg、100 mg、130 mg、160 mg于100 mL量瓶中，加入0.01 mol/L鹽酸溶解并稀釋到刻度，混勻。分別吸取此溶液1 ml到100 mL量瓶中，用0.001 mol/L鹽酸稀釋至刻度，混勻，制得每毫升含4 μg、7 μg、10 μg、13 μg和16 μg的供試品溶液。在乙炔焰中，以0.001 mol/L HCL為空白進行基線校零，測定供試驗品溶液吸光度。以供試品稱量為橫坐標，對應供試品溶液的吸光度為縱坐標，繪制線性曲線。

結果見圖2。得到供試品稱量范圍在40 ～160 mg，回歸方程為y=0.0023x+0.0479 相關系數r=為0.9967。

2.5 精密度試驗

兩分析員在不同天測定，每人每天平行測定6次。結果見表1。單人6次測定結果的RSD分別為0.7%，0.8%，兩人12次測定結果的RSD為1.0%。

2.6 加標回收試驗

以精密度試驗15%桿菌肽鋅預混劑供試品（批號P120810）鋅測定結果平均值含量6.34%計，準確稱取供試品約80 mg置于100 mL容量瓶中，稱取3份，依次加入1000 μg/mL的鋅標準儲備溶液1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL至3份供試品中，按2.2方法操作，制備成3份不同濃度的溶液，每個濃度重復測定3次。計算9次加樣回收率的RSD。

結果見表2。平均回收率為100.1%，RSD=2.0%（n=9）， 結果表明，該方法的回收率良好。

2.7 樣品鋅含量測定

按2.2方法操作，測定規格為10%與15%的桿菌肽鋅預混劑產品各3批，結果見表3。

3 討論與結論

中國獸藥典中被收錄的桿菌肽鋅預混劑品種，沒有鋅含量測定方法，標準文獻資料中也只有對桿菌肽鋅原藥中鋅含量有測定方法，本實驗室參照USP35版，根據實驗室實際情況經過摸索，建立了原子吸收法測定桿菌肽鋅預混劑中鋅的含量，并對方法進行了線性、精密度、回收率的驗證。

驗證結果表明，該方法在鋅離子濃度為0.25～1.00 μg/mL的范圍內，濃度與吸光值之間具有良好的線性關系，回歸方程為y=0.401x+0.0437 相關系數r=0.9975，且精密度高、重現性好、平均回收率為100.1% RSD=2.0%。使用該方法測定桿菌肽鋅預混劑中鋅的含量，可獲得準確、可靠的結果。

（編輯：狄慧）

參考文獻：

[1] 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典[S].2001版一部，2010，103.

[2] European Pharmacopoeia 歐洲藥典 （EP） [S].桿菌肽鋅，2011，1443.

[3] USP35，Volume2，桿菌肽鋅，2012，2297-2298.