關于鹽酸小檗堿膠囊含量測定中濾紙吸附的影響研究

摘要：目的： 通過一系列的試驗證明鹽酸小檗堿膠囊含量測定中使用濾紙進行過濾對檢測結果的影響。 方法： 通過過濾不同體積的樣品液進行試驗，證明濾過的體積越大，越能減少因濾紙吸附所帶來的影響。 結論： 檢測結果表明，濾紙對鹽酸小檗堿的吸附嚴重影響含量測定結果的真實性，使含量測定結果偏低。

關鍵詞： 鹽酸小檗堿膠囊；含量測定；濾紙吸附

【中圖分類號】R927.2 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）04-0050-02

小檗堿又名黃連素，是黃連、黃柏等級植物中含有的一種生物堿，也可以合成得到，主要用于腸道感染的治療。主要用于治療胃腸炎、細菌性痢疾等腸道感染、眼結膜炎、化膿性中耳炎等有效。還發現本品有阻斷 α-受體，抗心律失常作用。小檗堿的鹽酸鹽（俗稱鹽酸黃連素）已廣泛用于治療胃腸炎、細菌性痢疾等，對肺結核、猩紅熱、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定療效。

鹽酸小檗堿膠囊在《中國藥典》1995年版[1]、2000年版[2]、2005年版[3]和2010年版[4]均有收載，1995年版和2000年版的是采用重鉻酸鉀滴定液進行測定，自2005年版起修訂為高效液相色譜法，2010年版所載的方法大體與2005年版所載的方法一致，只作了部份修改，把“用濾膜（0.45μm）過濾，棄去初濾液約8ml，精密量取續濾液2ml置25ml量瓶中[2]”修訂為“棄去初濾液約8ml，精密量取續濾液2ml置25ml量瓶中[3]”。在沒有明確規定過濾操作所采用的材質的情況下，我們一般會使用濾紙進行過濾，這也是我這篇文章想要說明的主要問題，同時“棄去初濾液約8ml”，這一點可能很多人會把它忽視掉，一般會理解為8ml以上或更多，但我司就曾出現這種情況，被抽檢該品種，抽檢的檢驗所堅持按照藥典所描述的“棄去初濾液約8ml”進行檢驗，但結果確是偏低甚至是不合格，為了證明是濾紙吸附造成的不合格，我司做了大量的實驗去論證。

方案設計如下：嚴格按照藥典所描述的“棄去初濾液約8ml”，那為了證明濾紙是有吸附的，或者說如何消除濾紙對主成份的吸附，我們將采用續濾不同量的方法進行論證，在初濾量相同的情況下，只有續濾更多的溶液才會減少濾紙對主成份吸附的影響。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC2010-C高效液相色譜儀，色譜柱：迪馬C18；梅特勒AB135-S電子天平，定性濾紙：杭州新華紙業有限公司

1.2試藥

鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110713-201212，分子式：C20H18ClNO4，分子量：371，純度86.7%）；水為純化水；鹽酸小檗堿膠囊（規格0.1g，批號120901，均為我公司所生產）

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：磷酸鹽緩沖液[0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液和0.05mol/l庚烷磺酸鈉溶液（1：1），含0.2%三乙胺，并用磷酸調節pH值至3.0]-乙腈（60：40）；檢測長：263nm；流速：1.0ml/min；理論板數：按鹽酸小檗堿峰計算不低于3000，鹽酸小檗堿峰與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。

2.2 含量測定方法[4]

取裝量差異項下內容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當于鹽酸小檗堿40mg0，置100ml量瓶中，加沸水適量，使鹽酸小檗堿溶解，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液8ml，精密量取續濾液2ml，置25ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，用沸水溶解，放冷，用水定量稀釋制成每1ml約含32μg的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。

3.3 本實驗方案的設計

由三位檢驗員對該批品進行測定。在棄去初濾液8ml是固定的情況下，如何才能減少或消除濾紙對主成份的吸附致使含量偏低的影響，我們將以過濾不同體積的供試品來進行比較，同時分取10ml離心后取上清液進行稀釋，同法測定。結果見表1。

3 討論

結果顯示，過濾不同體積的供試品，含量數據程一定的梯度增長；而離心處理的結果明顯比濾紙過濾高2.6%-5.3%，可見使用濾紙過濾對主成份有較大的吸附作用，而且過濾的量越大，越能減少濾紙的吸附影響。

鹽酸小檗堿膠囊含量測定法中，《中國藥典》2010年版修訂時與2005年版最大的區別就是去掉了“用濾膜（0.45μm）過濾”這一操作，在孔愛英[5]的研究中發現，使用濾膜進行過濾，雖然對產品的含量影響不大，但有檢測過該產品的人員不易發現，實際操作中，使用濾膜棄去8ml的初濾液是很難做到的。

使用濾紙進行過濾操作，雖然過濾的體積越多，越能減少吸附的影響，但要全部過濾完也是很難做到的，同時在實驗中我們發現，即使是相同品牌相同批號的濾紙，過濾的速度也不盡相同，經常能過濾80ml已經是極限，而且很費時，當然也有能完全濾完的。

在供試品溶液的制備過程中，使用沸水溶解，沸水的溫度和振搖的方式對含量的測定也存在一定的局限性，對含量的真實結果也有一定的影響，建議未來方法的修訂可更多的考濾供試品溶液制備的方法。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會. 《中國藥典》2000年版. 二部[S]. 1995：569.

[2]國家藥典委員會. 《中國藥典》2000年版. 二部[S]. 2000：550.

[3]國家藥典委員會. 《中國藥典》2005年版. 二部[S]. 2005：466.

[4]國家藥典委員會. 《中國藥典》2010年版. 二部[S]. 2010：640.

[5]孔愛英，陶勝源. 有關HPLC法測定鹽酸小檗堿征含量的問題探討[J]. 中國藥品標準2011年第12卷第2期： 83-86