沙棘總黃酮對血管性癡呆模型大鼠血清TNF-α\\IL-1β含量的影響

摘要：目的觀察沙棘總黃酮對血管性癡呆模型大鼠血清TNF-α、IL-1β含量的影響，并探討其對血管性癡呆的干預機理。方法 采用改進的\"血管阻斷模型（2-VO）\"進行造模，設假手術組、模型組、對照組(銀杏葉提取物)、實驗組（沙棘總黃酮高、中、低劑量組），分別測定干預后各組大鼠血清TNF-α、IL-1β含量。結果與假手術組比較，VD模型大鼠學習記憶能力明顯障礙，血清TNF-α、IL-1β含量增加（P＜0.05）；經實驗組和對照組干預治療后，VD模型大鼠學習記憶能力得到改善，血清TNF-α、IL-1β含量下降（P＜0.05）。結論沙棘總黃酮能減少VD模型大鼠血清TNF-α、IL-1β含量，這可能是其干預血管性癡呆的主要作用機制之一。

關鍵詞：沙棘總黃酮；血管性癡呆；TNF-α；IL-1β血管性癡呆( vascular dementia，VD)的確切發病機制至今仍未闡明。炎癥機制作為發病機制之一其地位越來越受到重視[1]。 本實驗采用\"血管阻斷模型（2-VO）法\"復制VD大鼠模型，觀察大鼠血清TNF-α、IL-1β含量變化，探討炎癥因子與VD 發病的相關性，并采用沙棘總黃酮(Total flavonoids of Hippophae TFH)干預治療，觀察TFH對VD大鼠TNF-α、IL-1β含量及認知功能的影響。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1實驗動物Wistar大鼠，72只，普通級、（350±20）g、雌雄各半，由蘭州大學實驗動物中心提供。

1.1.2藥品和儀器沙棘總黃酮（青海康普生物科技股份有限公司，批號：20090220）；銀杏葉提取物(Extract of Ginkgo Biloba Leaves，EGb德國威瑪舒培博士藥廠，證號H20090296)；大鼠IL-1β ELISA Kit(產品編號:EKO393規格96T，武漢博士得生物工程有限公司)；大鼠TNF-α ELISAKit (ELISA試劑盒，Invitrogen，USA)；Morris水迷宮(中國醫學科學院藥物研究所)。

1.2方法

1.2.1造模根據預實驗中的數據和大鼠死亡率，采用改進的\"血管阻斷模型（2-VO）\"進行造模[2]。假手術組切開分離雙側頸總動脈而不結扎。造模過程中死亡的大鼠均剔除。

1.2.2動物分組每組動物數為12只，按照隨機數字表隨機分為假手術組、模型組、對照組（EGb）、實驗組（TFH高、中、低劑量組），并與于術后1d開始灌胃給藥，1次/d，連續30d。TFH高、中、低劑量組分別給予200、100、50mg/(kg·d) 灌胃；對照組給予EGb 48mg/(kg·d)灌胃；模型組和假手術組給予等量的生理鹽水灌胃。

1.2.3大鼠行為學測試Morris水迷宮定位航行實驗(place navigation)和空間探索實驗(space navigation)。

1.2.4檢測血清TNF-α、IL-1βMorris水迷宮結束后實驗大鼠腹主動脈取血，停置30 min 離心，取上清放置- 20 ℃冰箱內凍存待測。嚴格按試劑盒說明用ELISA法分別測得TNF-α和IL-1β。

1.3 統計學處理方法采用SPSS13.0軟件進行統計學處理，結果以x±s表達，顯著性檢驗采用單因素方差分析，檢驗水準α=0.05。

2結果

2.1 TFH對VD模型大鼠Morris水迷宮學習記憶的影響模型組逃避潛伏期明顯延長（P＜0.05），穿越平臺次數減少（P＜0.05），經EGb和TFH干預后，大鼠學習記憶能力得到改善。

2.2 TFH對VD模型大鼠血清中炎癥因子TNF-α、IL-1β的影響（見表1）模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β含量明顯高于假手術組（P＜0.05），經EGb和TFH干預后，TNF-α、IL-1β含量降低（P＜0.05）。

3討論

慢性腦缺血缺氧誘發行為學障礙是目前研究VD常用且經典的動物模型。Morris水迷宮實驗中，模型組大鼠潛伏期明顯延長，穿越平臺次數減少，表明實驗造模成功。經EGb和TFH干預，均能明顯縮短潛伏期。在空間探索實驗中，對照組和TFH中、高劑量組能改善模型大鼠的空間記憶力，三組間比較無明顯差別，但三組的穿臺次數記憶成績仍低于假手術組。TFH低劑量對模型大鼠的空間記憶力改善作用不明顯（P＞0.05）。各組血清TNF-α、IL-1β表達水平與相應大鼠學習記憶能力相比， TNF-α、IL-1β水平越高，其對應的大鼠學習記憶能力越差。這說明TNF-α、IL-1β和VD密切相關。

TNF-α是一種前炎因子，是炎癥級聯的啟動者，可引發繼發性損傷，且具有神經毒樣作用[3]，其來源是多途徑的[4]。IL-1β作為炎癥調節因子可誘發白細胞在微血管中黏附、聚集。TNF-α、IL-1β不僅能誘發炎癥反應，還能刺激其他細胞因子的釋放，造成神經元等組織器官的損傷[5]，使機體的學習、記憶功能減退，從而導致VD。這也是模型大鼠出現行為學改變的重要原因。缺血缺氧還可導致細胞內鈣超載[6]，直接損傷神經細胞并最終啟動細胞凋亡。TFH具有抑制缺氧損傷、抑制鈣超載作用[7]。本實驗表明TFH能夠有效抑制VD模型大鼠血清炎癥因子TNF-α、IL-1β的表達（P＜0.05），使大鼠學習記憶能力好轉（P＜0.05）。提示TFH有抵抗體內炎癥反應的作用，TFH對VD的防治是以上機制中多靶點作用的結果。

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