卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變中SPOCK2基因表現(xiàn)失活作用分析

摘要：目的 研究分析卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變中SPOCK2基因表現(xiàn)失活的作用。方法 選取2005年8月~2013年9月，在我院接受治療的30例卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變患者作為觀察組，同期選取30例單純卵巢子宮內(nèi)膜異位癥患者作為對照組，通過顯微切割技術(shù)獲取觀察組患者的惡變組織、異位內(nèi)膜組織和對照組患者的異位內(nèi)膜組織，通過免疫組化檢測比較兩組患者組織中SPOCK2基因甲基化情況以及蛋白表達(dá)情況。結(jié)果觀察組的惡變組織中SPOCK2基因甲基化率43.3%（13/30）顯著高于異位內(nèi)膜組織中SPOCK2基因甲基化率4.3%（1/23）（P<0.05）；兩組患者的異位內(nèi)膜組織中SPOCK2基因甲基化率比較無顯著差異（P>0.05）；觀察組患者的病變組織中SPOCK2基因蛋白表達(dá)缺失率50%（15/30）顯著高于異位內(nèi)膜組織中SPOCK2基因蛋白表達(dá)缺失率8.7%（2/23）（P<0.05）；兩組患者的異位內(nèi)膜組織中SPOCK2基因蛋白表達(dá)缺失率比較無顯著差異（P>0.05）。結(jié)論 SPOCK2基因表現(xiàn)失活能夠證明卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變。

關(guān)鍵詞：卵巢子宮內(nèi)膜異位癥；SPOCK2基因；失活卵巢子宮內(nèi)膜異位癥是臨床常見的婦科疾病之一，其發(fā)病率占育齡婦女的15%左右[1]。雖然內(nèi)異癥屬于良性疾病，但其具有類似惡性腫瘤的生物學(xué)特征。惡變的卵巢子宮內(nèi)膜異位癥會導(dǎo)致卵巢癌。本次研究通過檢測SPOCK2基因甲基化情況以及蛋白表達(dá)情況，探究該基因失活在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變的作用，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料本次研究選取2005年8月~2013年9月，在我院接受治療的30例卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變患者作為觀察組，同期選取30例單純卵巢子宮內(nèi)膜異位癥患者作為對照組。觀察組患者年齡32～68歲，平均年齡（42.3±12.6）歲；對照組患者年齡33～69歲，平均年齡（43.5±11.5）歲；本次實驗中所有患者均已被詳細(xì)告知實驗內(nèi)容，自愿參與本次實驗且已簽署知情同意書，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求。

1.2方法

1.2.1診斷標(biāo)準(zhǔn)①癌組織和異位內(nèi)膜共同存在于同一病變組織，癌組織內(nèi)有內(nèi)膜異位病灶；②兩者具有組織學(xué)相關(guān)性；③排除其他原發(fā)腫瘤的存在；④排除內(nèi)分泌、免疫及代謝性疾病的患者。

1.2.2檢測方法①顯微切割：采用石蠟包埋組織標(biāo)本，進行連續(xù)切片，切片厚度4～10μm，脫蠟后行常規(guī)HE染色。取1張4μm切片封片后進行組織切割，在取一張10μm切片不封片進行顯微切割獲取靶組織。依據(jù)封片的樣片鏡下識別靶組織，在顯微鏡下對切片中的靶組織進行定位，使用手術(shù)刀片切割靶組織。觀察組患者的卵巢組織中獲取惡變組織30份，異位內(nèi)膜組織23份；對照組患者的異位內(nèi)膜組織23份。②酶切技術(shù)檢測組織中的SPOCK2基因甲基化：采用試劑盒提取靶組織基因組的DNA，基因組DNA經(jīng)亞硫酸鹽修飾后懸于雙蒸水中，在修飾的過程中使用足量的甲基轉(zhuǎn)移酶處理[2]。SPOCK2基因的啟動子經(jīng)引物擴增后，由限制性內(nèi)切酶消化，在紫外燈下觀察檢測結(jié)果。③免疫組化法檢測SPOCK2基因的蛋白表達(dá)：采用SPOCK2山羊抗人多克隆抗體以1：200進行稀釋，以PBS替代其作為陰性對照， 其試劑盒附帶陽性作為陽性對照。SPOCK2正常表達(dá)細(xì)胞質(zhì)，免疫組化結(jié)果判定在光鏡下觀察。免疫組化結(jié)果評定標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)陽性細(xì)胞百分比及陽性細(xì)胞染色強度進行評分（a×b）：a代表陽性細(xì)胞的百分比對應(yīng)評分，無陽性細(xì)胞，a=0；陽性細(xì)胞＜10%，a=1；陽性細(xì)胞10～50%，a=2；陽性細(xì)胞＞50%，a=3。b代表陽性細(xì)胞的染色強度，不顯色，b=0；淺黃色，b=1；棕黃色，b=2，深黃色，b=3.評分結(jié)果為0～3分則為陰性，4～9分則為陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法所有資料均采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS17.0進行處理，計數(shù)資料采用（n，%）表示，用χ2進行檢驗，P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同組織中SPOCK2基因的甲基化情況觀察組的惡變組織中SPOCK2基因甲基化率43.3%（13/30）顯著高于異位內(nèi)膜組織中SPOCK2基因甲基化率4.3%（1/23）（P<0.05）；對照組異位內(nèi)膜組織中SPOCK2基因甲基化率8.7%(2/23)，兩組患者的異位內(nèi)膜組織中SPOCK2基因甲基化率比較無顯著差異（P>0.05）。

2.2不同組織中SPOCK2基因的蛋白表達(dá)情況觀察組患者的變組織中SPOCK2基因蛋白表達(dá)缺失率50%（15/30）顯著高于異位內(nèi)膜組織中SPOCK2基因蛋白表達(dá)缺失率8.7%（2/23）（P<0.05）；對照組異位內(nèi)膜組織中SPOCK2基因蛋白表達(dá)缺失率4.3%(1/23)，兩組患者的異位內(nèi)膜組織中SPOCK2基因蛋白表達(dá)缺失率比較無顯著差異（P>0.05）。

2.3SPOCK2基因啟動區(qū)域中甲基化與蛋白表達(dá)情況在出現(xiàn)SPOCK2基因甲基化的23份組織標(biāo)本中，有22份組織標(biāo)本的蛋白表達(dá)缺失，而在83份SPOCK2非甲基化組織標(biāo)本中，只有5份出現(xiàn)蛋白表達(dá)缺失的情況，由此可見，SPOCK2的甲基化能夠?qū)е碌鞍妆磉_(dá)缺失（P<0.05），具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3討論

近年來，隨著內(nèi)異癥的發(fā)病率不斷增加，惡變的病例數(shù)也有上升的趨勢，內(nèi)異癥惡變的預(yù)防及治療是急需解決的問題[3]。基因異常甲基化是一種和腫瘤形成密切關(guān)系的表觀遺傳學(xué)改變，也是腫瘤相關(guān)基因失活的主要機制。有研究表明hMLH1基因啟動子區(qū)域的異常甲基化后的基因能夠表達(dá)沉默致使內(nèi)異癥惡變?yōu)槁殉布吧车劳鈨?nèi)膜樣癌[4]。還有研究表明hMLH1基因表現(xiàn)失活與卵巢內(nèi)異癥的惡變也有著密切的相關(guān)[5]，上述研究結(jié)果顯示，表觀遺傳改變在內(nèi)異癥惡變過程中具有十分重要的作用。

SPOCK2屬于糖蛋白的一種，由一個蛋白結(jié)構(gòu)及軟骨素和乙酰肝素組成，在功能上具有與核心蛋白反向的作用。通過本次研究發(fā)現(xiàn)，惡變組織中SPOCK2基因甲基化發(fā)生率及蛋白表達(dá)缺失率均要高于異位內(nèi)膜，可見SPOCK2基因甲基化導(dǎo)致的蛋白表達(dá)缺失可能是由于卵巢內(nèi)異癥惡變而引發(fā)的重要靶點，SPOCK2基因的表現(xiàn)失活可作為內(nèi)異癥惡變的早期征兆。

參考文獻：

[1]Xu B，Hamada S，Kusuki I，et al．Possible involvement of loss of heterozygosity in m alignant transformation of ovarian endometriosis[J]．Gynecol Oncol，2011，（120）：239-246.

[2]任芳，任風(fēng)巖，王丹波．在位內(nèi)膜hMLH1異常甲基化與卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變相關(guān)性研究[J]．中華婦產(chǎn)科雜志，2010，（45）：252-255.

[3]任芳，王單波，李彤．SPOCK2基因表現(xiàn)失活在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥惡變中的作用[J]．中華婦產(chǎn)科雜志，2011，46（11）：822-823.

[4]Baylin SB，Herman JG．DNA hypermethylation in tumorigenseis：epigentics joins genetics[J]．Trends Genet，2010，16:63-70.

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編輯/許言