補腎健脾方促在卵泡排卵中的應(yīng)用研究

【中圖分類號】R722.12 【文獻標(biāo)識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）09-0049-01

近年來隨著社會壓力的增加，小卵泡排卵的發(fā)病率逐年上升，目前是婦科的疑難病癥之一。導(dǎo)師以補腎健脾，固沖止血為治則，擬補腎健脾方治療小卵泡排卵取得了良好的臨床療效。本實驗旨在探討其促卵泡發(fā)育及排卵的作用機理。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雌性未成年Wistar大鼠66只， 25～28日齡， 體重60～80 g， 由河南省實驗動物中心提供，合格證號：scxk（豫）2005-0001。

1.2 實驗藥物 補腎健脾方由黨參、炒白術(shù)、荊芥炭、生山藥、川斷、阿膠等組成。按原方劑量20倍取材制劑，所得制劑含生藥濃度約1.5g/ml，宮血停顆粒：10g/袋，哈藥集團中藥三廠生產(chǎn)，批號：080351。已烯雌酚片：0.5mg/片，合肥久聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號：20070914，均按照臨床劑量的6.7倍制成，置于4℃冰箱備用。由河南省中醫(yī)藥研究院制劑室提供。

1.3 主要儀器及試劑 生物顯微鏡：OLYMPUS859310 JAPAN。血球分類計數(shù)器：由福建羅源醫(yī)械二廠生產(chǎn)。智能放免r測量儀：由上海原子核研究所日環(huán)儀器廠生產(chǎn)。大容量低速冷凍離心機：由上海中科生物醫(yī)學(xué)有限公司生產(chǎn)。血栓烷B2、6-酮-前列腺素F1α放免試劑盒：均由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免研究所提供，批號：200902274。

1.4 動物分組及給藥方法 選取健康未成年雌性大鼠66只， 隨機分為補腎健脾方高、中、低劑量組、宮血停組、已烯雌酚組和空白對照組， 每組13只， 分籠喂養(yǎng)， 每日定時灌胃， 給藥1 次。中藥高、中、低劑量組給藥劑量分別為30g/kg、15g/kg、7.5g/kg（以生藥量計），分別相當(dāng)于臨床劑量的6.7倍、3.35倍、1.68倍。陽性對照組分別給予宮血停、已烯雌酚， 均按臨床劑量的6.7倍制成，用藥劑量分別為8g/kg、0.067mg/kg，各組用藥體積均為20ml/k g ， 空白對照組給予等量生理鹽水。均連續(xù)給藥22d。

1.5 檢測指標(biāo)與方法

1.5.1 陰道脫落細胞變化

于給藥的第17天起，每日上午進行陰道脫落細胞涂片1次，連續(xù)1個性周期（5天）。方法：將蘸過生理鹽水的棉簽插入大鼠陰道約3-4mm，輕輕旋轉(zhuǎn)一周取出，涂于載玻片上，晾干，用95%無水乙醇固定約3-5分鐘，HE染色，用200倍生物顯微鏡觀察。通過陰道脫落細胞檢測來判斷大鼠動情周期變化。

1.5.2 子宮卵巢組織形態(tài)學(xué)觀察

動物處死同時摘除雙側(cè)卵巢、子宮。將分離的卵巢子宮固定于10%多聚甲醛液中，然后脫水，石蠟包埋，切片，常規(guī)HE染色，觀察比較子宮卵巢組織形態(tài)學(xué)變化（包括各級卵泡數(shù)目、黃體數(shù)目、主卵泡直徑及卵泡成熟總數(shù)）。卵泡直徑以切片中最大卵泡直徑計；卵泡成熟總數(shù)以每只大鼠單側(cè)卵巢切片中黃體數(shù)與成熟卵泡數(shù)相加之和計。

1.5.3 血清6-酮-PGF1a和TXB2測定

于給藥22天后，以 10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主動脈取血2-3mL，離心分離血清。用放射免疫分析法測定6-酮-PGF1a和TXB2，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

3 統(tǒng)計分析

所有數(shù)據(jù)均采用Spss for windows（ver 13.0）軟件進行統(tǒng)計處理，組間兩兩比較用t檢驗，結(jié)果以均數(shù)（ ）±標(biāo)準(zhǔn)差（S）表示。

4結(jié)果

4.1 陰道脫落細胞檢查

空白對照組大鼠陰道涂片表現(xiàn)混亂 ，多數(shù)持續(xù)在動情間期，無周期性變化；補腎健脾方組大鼠則部分已表現(xiàn)出周期性，但尚不穩(wěn)定。空白對照組涂片可見大量底、中層細胞，表層細胞較少，角化細胞所占比例小；補腎健脾方組、宮血停組涂片可見少量底層細胞，中、表層細胞多見，角化細胞所占比例較大；乙烯雌酚組涂片可見大量中表層細胞，角化細胞所占比例大。

4.2 各組大鼠子宮卵巢組織形態(tài)學(xué)變化

4.2.1 子宮組織形態(tài)學(xué)

肉眼觀察： 己烯雌酚組子宮輕度充血，明顯增粗。余組無明顯差別。

鏡下觀察：空白對照組子宮壁較薄，粘膜較薄，固有層結(jié)締組織較致密，腺體較少，腺腔小，上皮細胞呈柱狀，排列緊密，無明顯的分泌現(xiàn)象；補腎健脾方高、中、低劑量組及宮血停組子宮內(nèi)膜多呈分泌期改變，表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜增厚，腺體數(shù)目增多，腺腔擴大，上皮細胞矮柱狀排列，可見核上或核下空泡態(tài)；己烯雌酚組子宮內(nèi)膜增生相明顯，表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜明顯增厚，腺體增多、變大，上皮細胞高柱狀排列。（見附錄1 圖1-6）

4.2.2 卵巢組織形態(tài)學(xué)

肉眼觀察：己烯雌酚組卵巢略大，顏色略深，其余各組無明顯差別。

鏡下觀察：空白對照組可見較多原始卵泡、初級和次級卵泡，成熟卵泡較少見，偶見黃體。宮血停組可見各級卵泡，成熟卵泡略增，黃體增多。補腎健脾方低劑量組與空白組相似。補腎健脾方高、中劑量組可見各級卵泡，成熟卵泡略增，黃體明顯增多。己烯雌酚組可見各級卵泡，初、次級卵泡、成熟卵泡明顯增多，但少見黃體，顆粒細胞層明顯增厚。

5 討論

補腎健脾方能夠促進各級卵泡發(fā)育、成熟，排卵及黃體形成，能促進子宮內(nèi)膜由增生期向分泌期轉(zhuǎn)變，并且能夠有效地調(diào)節(jié)血清前列腺素，提示其促卵泡發(fā)育及排卵的作用機理可能與調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-卵巢性腺軸的功能及調(diào)節(jié)卵巢局部因子，改善卵巢微環(huán)境，擴張卵巢血管有關(guān)；通過促排卵，促進P分泌，使子宮內(nèi)膜由增生期轉(zhuǎn)化為分泌期，從而達到止血的目的。