常規病理技術工作中遇到的問題及相應的解決辦法探討

【摘要】 目的 研究常規病理技術工作中遇到的問題及相應的解決辦法。 方法 對常規病理技術工作中遇到的脫片、切片不完整或漏切、切片困難、切片起皺、染色不均、切片模糊不清的問題，分別進行分析、找原因，根據每個問題產生的原因不同，提出相應的解決辦法。 結果 提高了病理切片質量。 結論 優良的病理切片是保證病理診斷正確的關鍵。

【關鍵詞】： 常規 病理技術 問題 解決辦法

【中圖分類號】R722.12 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）08-0548-01

病理技術中的常規石蠟切片是病理科的重要工作，只有優良的石蠟切片才能為正確病理診斷提供可靠的依據。在常規石蠟切片的操作過程中常會遇見許多的問題，造成石蠟切片優良率降低，甚至出現劣等片。把這些常見的問題歸納和對其產生的原因進行分析，并采取相應的解決方法，可以有效地提高常規石蠟切片的優良率，改進以后的病理工作。

1資料與方法

1.1 材料 材料取自浙江省臺州市立醫院病理科工作中的活體組織標本。

1.2 方法 對送檢標本按規范進行固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色、封片。要注意以下操作細節：①要充分固定組織。只有對組織進行充分的固定，才能為下一步組織的處理打下良好的基礎。②調好切片刀與切片機，保持切片刀刀刃情況良好，才能切出完整地切片。③在取材與制片過程中，避免組織碎屑、蘇木素染液中的氧化膜污染切片。④調節展片水溫及烤片溫度。

2結 果

組織切面完整、厚薄均勻、貼附端正、平坦無皺褶、無折疊、無刀痕、無顫痕、無裂隙、無污染、無松散、組織色彩鮮艷、細胞核與細胞質染色對比清晰。樹膠適當而無氣泡、編號清楚。

3討 論

3.1 組織切面不完整 原因及解決方法①切片刀角度不適宜，切片刀和蠟塊之間的夾角應在為8°-10°。刀架及蠟塊夾持器的螺旋要擰緊。手搖手輪的轉速要均勻，用力要均勻，保持切片機機身平穩。應細心清除刀頭刀架上蠟的碎屑及污物。②刀片不鋒利，缺口、卷刃等可造成切片不完整、厚薄不均、刀痕、裂隙、顫痕、皺褶。可以用頭發在刀鋒上碰一下，如一碰即斷說明刀鋒鋒利。③組織過大或過厚，固定不徹底，脫水不好，致使石蠟無法浸入組織內部，造成蠟塊中間部分過軟及收縮凹陷，這時需將蠟塊脫蠟后再次固定、脫水、透明、浸蠟。④漂片時水溫應略低于石蠟熔點，一般在42℃至55℃之間，主要和包埋蠟的熔點有關，不同廠家的石蠟熔點也有不同，可以根據需要自行調整。水溫過高，切片崩解；水溫過低，細小皺折不易展開。⑤包埋時，小塊組織應在同一個平面上，大塊組織應在包埋時盡量將其壓平，避免出現切片不全及片內組織雜亂。對皮膚、囊腫和管狀結構的組織或有突起的組織應將其立埋，即包埋沿縱切面包埋，可觀察各個層次。

3.2 切片染色不佳 原因及解決方法①切片染色后有白色呈云霧狀，組織與細胞結構模糊不清。切片脫蠟不徹底，組織不著色或著色過淺。應延長脫蠟時間，但不能過長，避免組織烤焦。筆者認為環境溫度高時可縮短時間，環境溫度低時可延長時間。定期更換染色過程中的二甲苯。②蘇木素染料質量差或染色液配制不當，如蘇木素配制時加熱過度造成過度氧化，不能生成三氧化蘇木紅，使染液沒有染色能力；或使用時間過久。③組織固定、脫水、透明不徹底。組織脫蠟后，再次脫水，透明。④切片染色不均勻，是由于使用乙醇固定以及切片過厚。乙醇對組織收縮較大，但滲透能力較弱，不能滲透到組織內部，導致固定不良。應選用緩沖中性甲醛固定組織，可滲透到組織內部。切片的厚度一般在2-3um，對于淋巴結、扁桃體等富含淋巴細胞的組織切片要求在2um以內。⑤在染色過程中，組織需偏藍，這樣為鹽酸分化和氨水反藍留有余地。染色過程中鹽酸乙醇的分化很關鍵，分化不足，切片呈現一片藍染，影響伊紅上色。

3.3 組織切片污染 原因及解決方法①取材時，取材臺和取材刀沒有沖洗干凈，混有相鄰組織的碎屑。②染色時，蘇木素染液中氧化膜未清理干凈，切片中出現藍黑色沉淀。③漂片水面未清理干凈，水面漂浮有蠟末和組織碎屑。③包埋時，鑷子未清理干凈，粘有相鄰組織。④組織固定液選擇不恰當，固定后，組織內混有甲醛色素結晶。使用緩沖中性甲醛固定，去除甲醛色素結晶。取材時，為避免污染，取材臺和取材刀應沖洗干凈。包埋時，把鑷子上的石蠟清理干凈，以免石蠟中含有細小的組織，并且每夾一塊組織要更換鑷子。切片時，清理切片刀。漂片時保持水面的清潔，切忌水面殘留組織碎屑，以防止漂片過程中的污染。染色前必須細心清除蘇木素染液表面的氧化膜，如出現蘇木素沉淀必須更換新的染液。

3.4 組織切片崩解 原因及解決方法①常見于含脂肪豐富的組織，如皮脂腺囊腫、脂肪瘤、乳腺、皮膚組織等。②組織過大或過厚。③組織固定不徹底，脫水、透明、浸蠟不足。④漂片水溫過高。對脂肪組織及自身松散、互不相連組織，應降低漂片水溫，或將切出的蠟片在10%-20%的酒精溶液中展片，不經溫水展片[3]。條件允許，再次取材。組織取材時應形狀規則，大小在lcm×lcm×0.2cm。組織處理不良者，檢查脫水試劑有效后，重新脫水、透明、浸蠟。

3.5 切片脫片 原因及解決方法①切片較厚。②組織含血液成份較多。③烤片時間短或溫度低。④載玻片不潔凈。⑤染片時，水洗用力過猛。切片的厚度一般在2-3um，切片過快或過慢都會影響切片厚度，應均勻連續切片。含凝血成份多的組織，如凝血塊及子宮內膜，在組織處理過程中易硬化，變脆。切片薄時易產生空洞，厚時易脫片。故切片時，先用左拇指沾漂片箱內的水按修好的組織片刻（該類組織纖維成份少易受潮濕影響），再輕輕均勻的切片，易切出薄而完整的片子[4]。在75℃烤片箱中放置10分鐘，可看到石蠟溶化即可。對已打開包裝，剩余的載玻片應保持清潔防治污染。染色過程中，用水沖時不要洗過猛或振蕩過度。

參考文獻

[1]鄭暉，羅洪英，顏亞暉.免疫組織化學技術常見問題分析及對策.中國組織化學與細胞化學雜志，2007，16（1）：126-127. [2]鄭暉，蔣海鷹，顏亞暉.淺談常規病理制片及免疫組化染色的質控問題.診斷病理學雜志，2003， 10（2）：119-120

[3]李雯，梁顏笑，劉國榮等.不同抗原修復方法對肝癌組織中內源性生物素的影響及對策.中國組織化學與細胞化學雜志，2005， 14（4）：462-464.

[4]蔣金芳，李洪安，張新艷.免疫組化染色中常見問題及對策.農墾醫學，2004，26（6）：460-461.