直接免疫熒光技術在自身免疫性大皰性皮膚病診斷中的價值分析

[摘要] 目的 探討直接免疫熒光檢查對自身免疫性大皰性皮膚病的診斷價值。方法 對26例自身免疫性大皰性皮膚病患者的皮損采用鼠抗人免疫球蛋白（IgG，IgM，IgA）及補體C3進行直接免疫熒光檢查，對結果進行回顧性分析。結果 天皰瘡15例和大皰性類天皰瘡11例。天皰瘡IgG沉積為100%；IgM和補體C3沉積較少，分別為20%及40%；IgA未見沉積。大皰性類天皰瘡IgG和補體C3沉積分別為88%及70%；IgM罕見沉積，IgA未見沉積，免疫熒光具有特征性。結論 直接免疫熒光檢查對自身免疫性大皰性皮膚病的診斷、鑒別診斷、預后判斷具有重要的意義。

[關鍵詞] 直接免疫熒光檢查；自身免疫性大皰性皮膚病；診斷

文章編號：1004-7484（2014）-03-1259-02

在自身免疫性疾病中，本來用于對付體外侵入者（如感染）的免疫系統，錯誤地對自身的正常組織起作用，引起皮膚損害。筆者探討了直接免疫熒光檢查對26例自身免疫性大皰性皮膚病患者診斷的臨床資料，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取我院2010年1月到2012年1月收治的2010年1月到2012年1月收治的26例自身免疫性大皰性皮膚病患者。其中男性19例，女性7例。年齡13-71歲，平均年齡49±1.6歲。天皰瘡15例和大皰性類天皰瘡11例。

1.2 實驗材料 日本櫻花OCT包埋劑，日本尼康熒光顯微鏡，上海鼎國生物FITC標記的兔抗人IgG、IgA、IgM和補體C3。

1.3 實驗方法 根據Foster的方法[1]行直接免疫熒光檢查：盡可能取早期完整水皰，OCT包埋，冰凍切片，滴加FITC標記的兔抗人IgG、IgA、IgM和補體C3，孵育30min，緩沖液沖洗2次，熒光顯微鏡觀察。

1.4 統計學分析 統計學軟件采用SPSS13.0版，組間計量數據采用（χ〖TX-*3〗±s）檢驗，計量資料行t檢驗及卡方檢驗，P<0.05差異有統計學意義。

2 結 果

26例自身免疫性大皰性皮膚病患者的DIF染色結果，見表1。

天皰瘡IgG沉積為100%；IgM和補體C3沉積較少，分別為20%及40%；IgA未見沉積。大皰性類天皰瘡IgG和補體C3沉積分別為88%及70%；IgM罕見沉積，IgA未見沉積。

3 討 論

直接免疫熒光法：用以檢查病人的皮膚組織中有無免疫球蛋白或補體沉積，用特異熒光抗體直接滴加于待檢的標本上，由熒光標記的抗體與抗原發生特異結合。使之呈現熒光，根據熒光分布和形態確定抗原部位和性質。此法用已知的抗體檢查未知的抗原，但一種標記抗體只能查一種抗原，可直接采用病人的病變組織。如：天皰瘡、大皰性類天皰瘡等作冰凍切片，熒光染色。此法簡單、特異。文獻報道，DIF診斷天皰瘡及大皰性類天皰瘡的敏感性分別為88%-100%和82%-100%[3]。

天皰瘡（pemphigus）為一組累及皮膚粘膜的自身免疫性表皮內水皰大皰性皮膚病，血清中存在針對橋粒成分的抗體，與棘細胞橋粒結合，引起棘層松懈，產生表皮內水皰，表現為薄壁水皰，尼氏征陽性，是臨床診斷的重要依據。水皰常出現在口腔，不久破潰形成疼痛性潰瘍。接著出現更多的水皰和潰瘍，直到整個口腔粘膜受累。皮膚受累情況相似，水皰首先出現在正常皮膚，然后破裂、留下裸露、結痂的創面。水皰分布很廣，一旦破裂，很容易感染。其常見類型是尋常型天皰瘡，其主要抗原為抗表皮（上皮）中橋粒芯糖蛋白（Dsg3）。大多數PV的早期病損首先出現在口腔，且口腔出現水皰很快破潰，臨床檢查時絕大多數僅見到范圍教大的糜爛面。直接免疫熒光（DIF）技術是診斷天皰瘡的一種可靠方法，被認為是診斷金標準，其特異性強[2]。各型天皰瘡患者的水皰周圍和病變部位皮膚的棘層細胞間總是有IgG沉積，而IgM和lgA陽性者只為25%。補體成分中C3總是陽性。其他成分有C1q和C4，顯示補體活化主要是通過經典途徑。免疫球蛋白和補體沉積位置與病變原發部位相一致。在只有口腔黏膜損害、血清抗體尚為陰性而又不能做活體組織病理學檢查的病例，取損害黏膜涂片，進行直接免疫熒光檢查，若為陽性，有助于本病的診斷。

大皰性類天皰瘡（bullous pemphigoid）是一種老年人常見皮膚病，它的特點是皮膚、粘膜上出現深在的水皰，一般的解釋是：大皰性類天皰瘡是以在正常皮膚或紅斑基礎上發生緊張性表皮下大皰、免疫熒光試驗可見沿基底膜有管狀或線狀免疫反應沉積物（IgG，C3）為特征的一種慢性皰疹性自身免疫病。大多數患者血清中存在有抗基底膜帶的自身抗體，主要是IgG。免疫電鏡示這種抗體結合在基底膜帶的透明板。大皰性類天皰瘡是由于基底膜帶透明板部位的抗原抗體反應，在補體參與下，吸引白細胞釋放酶，導致表皮下水皰形成，偶爾因應用呋塞米治療腎衰等疾病而誘發。大皰性類天皰瘡也是以皮下大皰為特點的自身免疫性皮膚病，主要發病人群為中老年人，表現為紅斑和緊張的水皰。此類患者的血清中可檢測到IgG基底膜（BMZ）抗體，損傷部位的基底膜可檢測到線性IgG或C3沉積。大量證據證明抗BP180IgG抗體與BP發病相關，且與病情相平行[4-5]。一項多中心前瞻性隊列研究認為，BP180滴度和DIF陽性可作為大皰性類天皰瘡疾病復發的預測指標[6]。

綜上所述，直接免疫熒光檢查對自身免疫性大皰性皮膚病的診斷、鑒別診斷、預后判斷具有重要的意義。

參考文獻

[1] Foster CS.Cicatricial pemphigoid.Trans Am Ophthalmol Soc，1986，84∶527.

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[3] Inchara YK，Rajalakshmi T.Direct immunofluorescence in cutaneous vesiculobullous lesions 2007，50：730-732.

[4] Tsuji-Abe Y，Akiyama M，Yamanaka Y.Correlation of clinical severity and ELISA indices for the NC16A domain of BP180 measured using BP180 ELISA kit in bullous pemphigoid，2005，37：145-149.

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[6] Bernard P，Reguiai Z，Tancrède-Bohin E，et al.Risk factors for relapse in patients with bullous pemphigoid in clinical remission：a multicenter，prospective，cohort study.Arch Dermatol，2009，145（5）：537-542.