環孢素A對哮喘大鼠肺組織NF—κB表達的影響

[摘要] 目的 探討環孢素A在臨床中治療哮喘的作用機制，以期更有效的指導臨床治療。方法 將32只wistar大鼠隨機分為4組：正常對照組、哮喘組、地塞米松干預組和環孢素干預組。采集肺組織標本經免疫組化染色后計算機圖像分析測定胞核NF-κB陽性表達率。結果 環孢素干預組和地塞米松干預組與哮喘組相比BALF中雖然白細胞總數無明顯變化，但嗜酸性粒細胞數有明顯下降，且有統計學差異（P<0.05）。環孢素干預組BALF中嗜酸性粒細胞數不及地塞米松組下降明顯，且兩者相比有統計學差異（P<0.05）。環孢素干預組肺組織NF-κB表達下降不及地塞米松干預組下降明顯，且兩者相比有統計學差異（P<0.05）。結論 環孢素A可以減少哮喘大鼠肺泡灌洗液嗜酸性粒細胞數量，也可以減少哮喘大鼠肺組織中NF-κB的表達，但其作用不及地塞米松明顯。環孢素A治療哮喘的作用機制復雜，但至少部分是通過減少BALF中嗜酸性粒細胞數量和下調肺組織NF-κB表達來實現。

[關鍵詞] 環孢素A；哮喘；大鼠；嗜酸性粒細胞；核因子-κB

文章編號：1004-7484（2014）-03-1213-02

支氣管哮喘（bronchial asthma，簡稱哮喘）是氣道的一種慢性過敏反應炎癥性疾病[1]。本實驗探索性的給予哮喘大鼠環孢素A（CsA）干預，通過觀察大鼠BLAF中嗜酸性粒細胞數及大鼠肺組織中NF-κB表達的變化，來了解CsA對哮喘大鼠肺組織中NF-κB表達的影響，從而明確CsA治療支氣管哮喘是否通過NF-κB這一信號通路。

1 資料和方法

1.1 材料 健康雄性SPF級Wistar大鼠32只，隨機分為4組，每組8只。哮喘組（實驗第一天腹腔注射10%卵蛋白（OVA）和氫氧化鋁（AL（OH）3）1ml致敏，2周后將大鼠放入自制密封的霧化箱內，霧化吸入1%OVA20分鐘誘發其哮喘發作，每日一次，共14天）、地塞米松干預組（致敏和激發同哮喘組，激發前半小時給予地塞米松5mg.kg-1·d-1腹腔注射）、環孢素干預組（致敏和激發同哮喘組，激發前半小時前給予環孢素10mg.kg-1·d-1灌胃）、正常對照組（用同等量的生理鹽水替代OVA腹腔注射和霧化吸入，霧化前半小時給予生理鹽水1.5ml灌胃）[2]。

1.2 方法 大鼠肺泡灌洗、灌洗液細胞計數、采集肺組織切片及免疫組化。

VS正常組*P<0.05，VS正常組*〖KG-*2〗*P<0.01，VS哮喘組▽P<0.05，VS地塞米松組△P<0.05。Model模型組，CsA A干預組，Dex 地塞米松干預組，Control正常對照組。TL白細胞Eos嗜酸性粒細胞。

2 結 果

2.1 肺泡灌洗液細胞總數及嗜酸性粒細胞數比較 哮喘組與正常對照組相比BALF中白細胞總數和嗜酸性粒細胞數均有明顯升高，且有統計學差異（P<0.01），環孢素干預組和地塞米松干預組與哮喘組相比BALF中雖然白細胞總數無明顯變化，但嗜酸性粒細胞數有明顯下降，且有統計學差異（P<0.05）。環孢素干預組BALF中嗜酸性粒細胞數不及地塞米松組下降明顯，且兩者相比有統計學差異，見圖1。

2.2 氣道上皮NF-κB免疫組化染色結果比較 胞核陽性細胞為NF-κB陽性表達細胞，正常大鼠氣道壁可見少許NF-κB陽性表達的細胞，哮喘組與正常對照組相比肺組織NF-κB表達明顯增加，且有統計學差異（P<0.01）。環孢素干預組和地塞米松干預組與哮喘組相比肺組織NF-κB表達有明顯下降，且有統計學差異（P<0.05）。環孢素干預組肺組織NF-κB表達下降不及地塞米松干預組下降明顯，且兩者相比有統計學差異（P<0.05），見圖2。

3 討 論

3.1 NF-κB與哮喘 哮喘在全世界范圍內是最常見的慢性疾病之一，并且發病率正在上升，尤其在兒童中，全世界哮喘病人估計有1.5億，我國估計也有一二千萬[3]，但哮喘病因及發病機制復雜至今仍不完全清楚，由于近年來對核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）研究的深入，人們開始關注核因子-κB在哮喘發病過程中所發揮的作用。

NF-κB是一種能與DNA結合的二聚體蛋白，它由Rel蛋白家族組成。Rel家族的許多成員都是可以與其他Rel蛋白聚合成同型二聚體或異型二聚體，以形成具有序列特異性的DNA誘導活性的核轉錄因子[4]。其中研究最多的就屬P50和P65組成的異源二聚體，即NF-κB。

3.2 CsA與哮喘 環孢素A（cyclosporineA）簡稱CsA是1971年瑞士Sandos公司從真菌分離得到的一種天然的親脂性環十一肽，分子量為1202 Dalton。CsA主要的生物學作用是免疫抑制，臨床上主要用于器官移植后的抗排斥反應。由于對其藥理作用的不斷研究及對各種疾病發生發展的不斷認識，CsA目前在臨床上也用于包括自身免疫性疾病在內的多種疾病的治療，如系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、腎病綜合癥、再生障礙性貧血甚至是白血病等多種疾病[5]。

在支氣管哮喘方面，CsA主要用于治療激素依賴型和激素抵抗型哮喘。國內外多項臨床研究證實CsA對哮喘患者有效，包括CsA能夠減少哮喘相關的細胞因子的表達，CsA能夠減少激素的用量[7]，CsA能夠提高哮喘患相關肺功能指標等[6]。

本實驗通過試驗性的給予哮喘大鼠CsA干預，收集肺泡灌洗液（BALF）進行細胞總數及嗜酸性粒細胞數的分析及比較，結果是，雖然CsA干預組與模型組相比白細胞總數沒有明顯差異，但嗜酸性粒細胞數有明顯下降（P<0.05）。說明，CsA能夠減少哮喘大鼠BALF中嗜酸性粒細胞數量，抑制哮喘大鼠的炎癥反應。嗜酸性粒細胞在哮喘的發病中占重要的地位，

本實驗探索性的給予哮喘大鼠CsA干預，并通過免疫組化的方法觀察大鼠肺組織中NF-κB的表達。觀察結果是，CsA干預組（10mg.kg-1·d-1）與哮喘組相比NF-κB的表達明顯下降（P<0.05），說明CsA能夠抑制哮喘大鼠肺組織NF-κB的表達。

糖皮質激素下調哮喘動物模型或患者肺組織中NF-κB表達的主要機制可能有[7]：糖皮質激素進入細胞后激活激素受體（GR），后者可以和NF-κB結合從而抑制其進入細胞核發揮生物學效應；糖皮質激素也可以通過增加IκB基因轉錄和表達實現對NF-κB表達的抑制；糖皮質激素誘導組蛋白上酶的修飾及染色質的重構從而抑制NF-κB基因的表達實現；糖皮質激素通過作用于哮喘相關的其他轉錄因子如AP-1、激活T細胞核因子1（NFAT-1）、GATA-3及信號轉導和轉錄激活因子（STAT）間接的下調NF-κB的表達。這種不同的作用就機制也正是不同的實驗結果的原因。

總之，環孢素A在支氣管哮喘的治療中的作用機制，在臨床應用中是否安全，是否可行，是否可以和糖皮質激素聯用，聯合使用的劑量要求，都需要我們進一步的研究。

參考文獻

[1] 王吉耀，廖二元，等.內科學[M].北京：人民衛生出版社，2005.49.

[2] E，et a1.com― KanosA，poulouSpsonF，Pulmona indiabetesmellitus[J].Chronic，2008，5：101，108.

[3] 丁寧，劉淑華.CsA在小兒激素依賴型哮喘中的療效研究[J].臨床薈萃，2006，21（1）：46-47.

[4] 蔡柏薔，李蕓龍，等.協和呼吸病學[M].北京：中國協和醫科大學出版社，2005：835.

[5] 余洪華，陸曉和，張永強，等，核因子-κB與細胞間黏附分子-1在角膜移植排斥反應中的表達及環孢素A對兩者表達的影響[J].中國臨床康復，2005，9（38）：46-49.

[6] 宮蓓蕾.張永.許啟霞.等.重癥肺炎患者核轉錄因子-κBDNA結合活性變化及血必凈注射液的干預作用[J].中國危重病急救醫學，2010，（9）：96-98.

[7] 路小光.大黃附子湯對重癥急性胰腺炎肺損傷大鼠肺組織Toll樣受體4/核轉錄因子-κB的影響[J].中國中西醫結合急救雜志，2009，16（1）：1008.