HPV、TCT與陰道鏡在宮頸癌檢查中的應用研究

[摘要] 宮頸癌是影響女性健康的重要疾病。在對女性宮頸癌的檢測中，HR-HPV對各種病癥的敏感度較高，但是特異性較低。與之相反，對宮頸癌用TCT檢測則具有較高的特異性，但是敏感度較低。而將這兩個檢測方式與陰道鏡一起進行聯合檢測，則可以大大提高篩選宮頸癌及癌前病變的正確率，并獲得及早期診斷的檢出率，本文即以此研究分析。

[關鍵詞] 宮頸癌；HPV；TCT

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.03.011 文章編號：1004-7484（2014）-03-1214-02

[摘要] 宮頸癌是影響女性健康的重要疾病。在對女性宮頸癌的檢測中，HR-HPV對各種病癥的敏感度較高，但是特異性較低。與之相反，對宮頸癌用TCT檢測則具有較高的特異性，但是敏感度較低。而將這兩個檢測方式與陰道鏡一起進行聯合檢測，則可以大大提高篩選宮頸癌及癌前病變的正確率，并獲得及早期診斷的檢出率，本文即以此研究分析。

[關鍵詞] 宮頸癌；HPV；TCT

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.03.011 文章編號：1004-7484（2014）-03-1214-02

細胞項目：見鱗狀細胞、見宮頸內膜細胞、未見化生細胞。

微生物項目：未見念珠菌、未見滴蟲、未見放線菌。

病毒項目：未見皰疹病毒感染、未見乳頭瘤病毒感染。

總體分類：正常細胞涂片中度炎癥。

樣本質量滿意度：滿意。

炎癥細胞的覆蓋比例：50%-70%。

2.1.2 裂解與雜交 用HPV裂解液對生物樣品中的HPV進行裂解，分離提取核酸；用SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4特異性引物從上述步驟所得核酸中擴增HPVL1核酸片段；對獲得的HPVL1核酸片段進行焦磷酸測序反應，焦磷酸測序引物選自SEQ ID NO.5-SEQ ID NO.3任意一種或幾種；將焦磷酸測序讀出的序列與HPV型別序列進行比對，判斷HPV分型結果。本發明利用DNA條碼技術和焦磷酸測序技術，對生物樣本中的HPV進行檢測、分型，可用于評估生殖道癌癥及相關疾病的發生發展并對其進行預后指導。

2.1.3 捕獲 ①標本的采集和預處理：用刮板或生理鹽水浸潤的棉棒從陰道和宮頸外口取分泌物和細胞。在作細胞學檢查的同時，將標本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS離心（3000g，10min）洗滌2次，沉積細胞重懸于1mlPBS中，取0.5ml細胞懸液抽提DNA。②標本核酸的捕獲：按1體積細胞懸液加10倍體積的細胞裂解液（10mmol/LTris-HCl，pH7.4，10mmol/LEDTA，150mmol/LNaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K）37℃下處理過夜，且等體積酚/氯仿（1：1），氯仿/異戊醇（24：1）各抽提2次；加1/10體積3mol/LNaAc（pH5.2）及2.5倍體積無水乙醇置-20℃2h或過夜沉淀DNA；加1體積乙醇洗滌1次；用60μl含RNA酶（100μg/ml）的TE液（10mmol/LTris-HCl，pH8.0，1.0mmol/LEDTA）溶解DNA，37℃溫育30min。

2.2 TCT液基細胞學檢測 引物設計和合成：HPV基因組可分為早期區（E）和晚期區（L），每區含一系列開放讀碼框架（ORF）。序列分析表明，各型HPV的非編碼區及E1、E6、E7和L1區均有保守序列。Manos等從HPVL1區中選擇保守序列設計合成引物MY11和MY09，該引物與HPV6、11、16、18及33型有互補序列，也可擴增其它型HPV。

2.3 陰道鏡病理活檢 臨床上，宮頸癌是女性常見的一種惡性腫瘤，由于危害甚大，因而及早檢查是非常有必要的，對于這一宮頸癌的檢查項目，陰道鏡可用于發現子宮頸部與癌有關的異型上皮、異型血管以及早期癌變的所在，以便準確地選擇可疑部位作活組織檢查。此外，陰道鏡檢查作為一種非損傷性及又可重復性的檢查宮頸癌變的方法，可用于已婚或未婚而有性生活史的病人，它能迅速識別肉眼看不見的宮頸管病變，及時發現宮頸炎性病變及宮頸癌前病變或宮頸癌變，能直視下選擇性地定位取活檢，改變以往靠主觀取活檢的習慣，大大的提高活檢的陽性率，據臨床資料顯示，對于這一宮頸癌的檢查項目而言，陰道鏡檢查宮頸癌變陽性檢出率100.00%。這對于宮頸癌的早期診斷是非常有幫助的。另外，必須值得一提的是，存在宮頸糜爛而有誘發宮頸癌的可能的患者，完全有必要做陰道鏡檢查，因為陰道鏡檢查也能夠及早發現宮頸癌早期隱患。

3 討 論

3.1 HPV與宮頸疾病 過去一直沿用的5級程度分類已經過時了，目前，最新的醫學分類標準為3級[4]：

CIN1-輕度非典型增生（病變占據了不到上皮細胞的1/3）。

CIN2-中度非典型增生（病變占據了上皮細胞不到2/3）。

CIN3-重度非典型增生（病變占據了上皮細胞的2/3）。

從CIN發展到浸潤癌需要好多年的時間（甚至到10年左右），而且具有可逆性。如果治療的及時、徹底，病變就會消失，身體恢復健康。反之，就會朝癌癥發展。

3.2 TCT與宮頸疾病 在TBS診斷系統中，TCT是一種篩查方式，不是TCT異常就一定是宮頸癌前病變，只代表現在是高危對象。進一步確診還要進行HPV檢測，甚至陰道鏡檢查。根據相應的指征取出活體組織，做病理學檢查，看細胞的改變，病理學檢查才是最后診斷的主要依據。對于高危人群，即20歲以前有性活動或兩個以上性伙伴的，或者既往HPV檢測有異常有性傳播疾病，有免疫缺陷，有吸煙史的女性應當適當增加婦科檢查頻率。一般4-6個月復查觀察病變的情況。宮頸癌是唯一一個可以早期發現、早期治療的婦科癌癥[5]。所以宮頸早期病變給了我們一個早期發現它的機會。如果是原位癌，五年生存率是百分之百，晚期宮頸癌的生存率最低是12.1%，差異還是很大的。

4 結論與展望

對女性宮頸癌采用高危型HPV的檢測是目前一種先進的用于宮頸癌篩査的方法。本研究通過對HR-HPV進行檢測，同時通過TCT檢查，判斷不同細胞學分級和病理學診斷分級的關系。本文將兩種方法聯合起來，將陰道鏡病理活檢作為宮頸癌診斷標準，研究綜合性篩選診斷方案，從而達到集中各檢測方式方式，啟發后續研究的作用。

參考文獻

[1] 汪東亞.朱江.夏術階.Wang Dongya.Zhu Jiang.Xia Shujie SPP、TURP、HoLEP三種宮頸切除術對性功能的影響[J].中國女科學雜志，2007，21（3）.

[2] 金杰.虞巍.賀占舉.郭應祿良性宮頸增生與性功能障礙[J].中華泌尿外科雜志，2004，25（3）；鄭天貴.張玉蘭中藥治療女性更年期綜合癥30例[J].廣西中醫藥，2002，25（3）.

[3] Mcvary KT Sexual dysfunction in men with lower urinary tract symptoms and benign hyperplasia：anmeting link[J].2003.

[4] 李佳明.宮頸疾病與性功能障礙[J].中國性學會學報，2009，12（5）.

[5] Oishi K，Boyle P.Barry MJ Epidemiology and natural history of benign prostatic hyperplasia，1998.