革蘭氏陽性球菌引起的血培養陽性標本直接細菌鑒定和藥敏的方法探討

[摘要] 目的 分析討論革蘭氏陽性球菌引起的血培養陽性標本直接細菌鑒定和藥敏的方法。方法 對我院2012年3月——2013年3月間的革蘭氏陽性球菌引起的血培養陽性標本的細菌鑒定和藥敏的方法進行歸納統計，用直接法上機鑒定藥敏和常規法鑒定藥敏，比較兩種方法的鑒定、藥敏符合率、發報告時間等。結果 直接法和常規法兩種方法的鑒定符合率分別100%、93.33%，藥敏符合率分別為98.33%、96.67%，發報告時間分別為3-4d、5-6d，鑒定符合率兩組相比較具有顯著性差異，藥敏符合率、發報告時間無顯著性差異。結論 革蘭氏陽性球菌的鑒定相比較革蘭氏陰性桿菌等的鑒定有些難度，程序復雜，鑒定的準確率也受到影響，使用全自動血培養儀鑒定藥敏更為可靠、方便，但成本高，需要購買鑒定儀，這對于基層醫院還是有難度。

[關鍵詞] 革蘭氏陽性球菌；血培養陽性標本；直接細菌鑒定；藥敏

文章編號：1004-7484（2014）-03-1251-01

隨著抗生素、抗腫瘤藥物、免疫抑制劑、各種侵襲性操作，特別是靜脈導管及各種介入手段的應用，血行性感染在醫院中的發生率有上升趨勢[1]，所以對血培養中病原菌的耐藥性監測和尋找敏感的藥物顯得特別重要。血培養（blood culture）是將新鮮離體的血液標本接種于營養培養基上，在一定溫度、濕度等條件下，使對營養要求較高的細菌生長繁殖并對其進行鑒別，從而確定病原菌的一種人工培養法。用于菌血癥、敗血癥及膿毒敗血癥的病因學診斷，隨著全自動血培養儀的引進，不僅大大提高了血培養陽性率，而且對于陽性標本24h內可報警提示，比傳統手工血培養縮短了24-48h，但血培養陽性標本從采集到給臨床一份完整的結果報告，仍需要3-4d[2]為了提高血培養的陽性率，客觀的反映出敗血癥患者血內存在病原菌的實際狀況，臨床醫生精確選用血培養，檢驗科室精心分離鑒定，現就革蘭氏陽性球菌引起的血培養陽性標本直接細菌鑒定和藥敏的方法做以下的討論分析：

1 資料與方法

1.1 一般資料 對我院2012年3月——2013年3月間的120例革蘭氏陽性球菌引起的血培養陽性標本的細菌鑒定和藥敏的方法進行歸納統計。

1.2 儀器及其材料 血培養儀為BacT9050型全自動血培養儀，樹脂血培養瓶均為美國Bactec Dickinson公司生產；G+菌鑒定及藥敏綜合板（PC11）為美國DadeBerhing公司產品，血平板和M-H藥敏平板購于（北京奧博星生物技術責任有限公司），藥敏紙片購于（陜西中北公司），由美國B.D公司生產，菌株鑒定按照常規方法使用VITEK微生物全自動分析儀，手工藥敏試驗采用K-B劃線法。

1.3 標本采集及其培養 由臨床在寒顫或高熱時無菌操作采集標本與血培養瓶中，送檢微生物室置于血培養儀中，儀器報警后轉種血平板，5天陰性標本進行盲種。

1.4 質控菌株 大腸桿菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923、銅綠假單胞菌ATCC 27853、肺炎克雷伯ATCC700603購于衛生部臨床檢驗中心。

1.5 方法 將臨床所采集的血培養瓶放入BacT9050系統，系統自動孵育和檢測.當系統發生響聲報警時，提示有細菌生長的陽性瓶被檢出，用無菌注射器抽取陽性瓶中菌液涂片行革蘭氏染色后鏡檢，根據鏡檢結果為革蘭氏陽性球菌是做觸酶試驗，直接法將菌液濃度調整至6.9×108CFU/L.然后將其接種于PC11綜合板，上微生物分析儀進行細菌鑒定與藥敏試驗；常規法是將陽性標本分別轉種血平板、麥康凱平板和巧克力平板，經35℃孵育18-24h后，挑取生長菌落涂片，行革蘭染色鏡檢，根據鏡檢結果觸酶試驗，按VITEK微生物全自動分析儀系統操作步驟上機進行細菌鑒定與藥敏試驗。

1.6 統計學處理 采用MannWhitney U檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結 果

直接法和常規法兩種方法的鑒定符合率分別100%、93.33%，藥敏符合率分別為98.33%、96.67%，發報告時間分別為3-4d、5-6d，鑒定符合率兩組相比較具有顯著性差異，藥敏符合率、發報告時間無顯著性差異，見表1。

3 討 論

血培養是臨床診斷敗血癥的重要方法，陽性結果對明確診斷、對癥治療有極高的應用價值。因此臨床上疑為敗血癥的患者，必須盡快做血培養檢測，為臨床盡早明確診斷和準確治療敗血癥提供直接依據[3]，國內相關文獻報道顯示血培養陽性率大多在10%左右[4]。在血培養陽性標本中，有革蘭氏陽性球菌引起的陽性比率較高，但革蘭氏陽性球菌的鑒定沒有革蘭氏陰性桿菌那么容易，在本次討論數據中我們選擇了直接法和常規法對革蘭氏陽性球菌進行鑒定藥敏，討論結果顯示直接法和常規法兩種方法的鑒定符合率分別100%、93.33%，藥敏符合率分別為98，33%、96.67%，發報告時間分別問3-4d、5-6d，鑒定符合率兩組相比較具有顯著性差異，藥敏符合率、發報告時間無顯著性差異。自動血液細菌培養儀配合其抗生素中和增菌培養基，操作簡便，結果快速準確[3]，48h內大部分病原菌都能及時檢測出來，大幅度縮短了檢測時間[4]。本實驗所采取的直接鑒定法也是只需根據陽性標本涂片染色后的鏡檢結果來選擇相應的鑒定板型，調整合適的菌液濃度直接上機進行檢測.但與過去文獻報道的直接鑒定法相比，本實驗在兩個方面有所改進：一是采用了樹脂血培養瓶，其最大優點是能溶解血液紅細胞和白細胞、無須離心且對直接法檢測的結果沒有影響[7]，同時也比較了兩種方法的藥敏符合率。

綜上所述，在血培養中，革蘭氏陽性球菌的陽性率比較高，在鑒定和藥敏過程中，如果條件允許，盡量使用全自動血培養儀，這樣不但能提高鑒定、藥敏符合率，也能提前發出報告盡快為臨床提供診斷和用藥依據。

參考文獻

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