miRNA—21在三陰性乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義

[摘要] 目的 探討miRNA-21在三陰性乳腺癌中的表達(dá)及其臨床病理特征之間的相關(guān)性。方法 選取自2012年1月至2013年6月于我院乳腺外科手術(shù)治療并經(jīng)過病理科免疫組化證實(shí)的30例三陰性乳腺癌及其癌旁組織，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)miRNA-21在三陰性乳腺癌及其癌旁組織中的表達(dá)情況，并分析其臨床病理因素的相關(guān)性。結(jié)果 ①miRNA-21在三陰性乳腺癌中的表達(dá)明顯高于其癌旁組織；②miRNA-21的表達(dá)增高與TNM分期/淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)。結(jié)論 miRNA-21在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管三陰性乳腺癌中呈高表達(dá)，可作為乳腺癌診斷及判斷預(yù)后的指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 三陰性乳腺癌；miRNA-21；PCR；預(yù)后

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.03.150 文章編號(hào)：1004-7484（2014）-03-1337-02

乳腺癌是目前世界范圍內(nèi)女性最常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重的威脅著廣大婦女的生命和健康，雖然隨著早期診斷及規(guī)范化的治療使乳腺癌的死亡率有所下降，但在女性病人中仍屬于發(fā)病率和病死最高的惡性腫瘤率，預(yù)后并不理想。三陰性乳腺癌（TNBC）是最近幾年才被提出來的，是指雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）以及人類表皮生長(zhǎng)因子受體2亞型（HER2）都是陰性的乳腺癌，約占乳腺癌的15%左右，好發(fā)于45歲以下的女性，具有特殊的臨床病理特征，具體表現(xiàn)為病情進(jìn)展迅速，且易發(fā)生局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后較其他類型乳腺癌差，內(nèi)分泌治療和抗HER2靶向治療效果不理想。另外三陰性TNBC對(duì)內(nèi)分泌治療及抗HER2靶向治療也不敏感，化療雖然有效，但因其復(fù)發(fā)早、進(jìn)展快、生存期短而成為近年來關(guān)注的熱點(diǎn)。近年來，隨著醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)展，逐漸認(rèn)識(shí)到miRNA在乳腺腫瘤的發(fā)病及演進(jìn)等多個(gè)過程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的調(diào)控作用，作為早期診斷及預(yù)后評(píng)估的分子指標(biāo)，已日益得到大家的重視。

資料顯示腫瘤組織大都具有特征性的miRNA表達(dá)譜，可以作為癌癥的生物學(xué)標(biāo)志。有文獻(xiàn)報(bào)道三陰乳腺癌患者與microRNA-21密切相關(guān).且與乳腺腫瘤的分級(jí)、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理指數(shù)密切相關(guān)。因此對(duì)三陰乳腺癌miRNA-21的表達(dá)水平及與臨床病理因素的相關(guān)性研究，可以為三陰乳腺癌的早期診斷及治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院2012年1月至2013年6月在乳腺外科行手術(shù)治療并經(jīng)我院病理科免疫組化證實(shí)的30例三陰性乳腺癌腫瘤組織及癌旁組織（癌旁組織距離腫瘤組織>2cm）。所選患者均有完整的臨床病理資料，術(shù)前均未接受任何治療，年齡范圍23-71歲，平均年齡為40.3歲。所選用的標(biāo)本均有本科室研究生收集，保證在標(biāo)本離體30分鐘內(nèi)存入-80℃冰箱中，以減少組織RNA的降解。

1.2 所用儀器及試劑 超低溫冰箱（日本三洋）、ABI7500型PCR擴(kuò)增儀（愛普拜斯公司）、RNA濃度檢測(cè)儀（美國(guó)伯樂儀器公司）、TGL-16高速冷凍離心機(jī)（湖南賽特湘儀器廠）、BSC-2生物安全柜（上海上凈凈化設(shè)備有限公司），本實(shí)驗(yàn)所用的試劑盒、內(nèi)參、及miRNA-21引物等均購(gòu)于QIAGEN公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

1.3.1 RNA提取 從超低溫冰箱中取出所選的乳腺癌及癌旁組織，將標(biāo)本加入液氮迅速碾成粉末狀，然后按所用的試劑盒說明書提取RNA，用RNA濃度檢測(cè)儀測(cè)出濃度后立即進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄。

1.3.2 microRNA-21檢測(cè)及反轉(zhuǎn)錄 先算出RNA樣本需要量，按所購(gòu)試劑盒說明書的操作步驟分別加入所需試劑，將其充分混勻離心即可檢測(cè)。

1.3.3 microRNA-21表達(dá)的定量分析 用熒光定量PCR法進(jìn)行，每個(gè)標(biāo)本各加3個(gè)板孔，以便進(jìn)行對(duì)比，陰性對(duì)照組用實(shí)驗(yàn)用水替代用于對(duì)照。

1.3.4 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析 熒光定量PCR數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件。microRNA-21計(jì)數(shù)資料用X2檢驗(yàn)，（P<0.05）表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

microRNA-21在三陰性乳腺癌組織中呈顯著高表達(dá)，在相對(duì)應(yīng)的癌旁組織中呈低表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合正態(tài)分布，另外microRNA-21在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)情況與乳腺腫瘤的分級(jí)、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小等呈正相關(guān)。

3 討 論

microRNA-21是一類由大約22個(gè)核苷酸組成的單鏈非編碼小分子RNA，參與多個(gè)生理過程的調(diào)控，但是由于長(zhǎng)度太短，一般難以檢測(cè)。大量研究表明microRNA-21作為一種新的腫瘤標(biāo)志物，可在腫瘤的診斷治療和預(yù)后評(píng)估等方面發(fā)揮重要作用。通過本實(shí)驗(yàn)我們可以發(fā)現(xiàn)，microRNA-21在乳腺癌組織中的表達(dá)水平顯著高于相對(duì)應(yīng)的癌旁組織，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），另外microRNA-21的表達(dá)情況與三陰性乳腺癌患者的臨床病理因素呈正相關(guān)，具體表現(xiàn)為：①microRNA-21高表達(dá)高低與患者發(fā)病年齡呈負(fù)相關(guān)；②與患者腫瘤大小呈正相關(guān)；③與患者腫瘤分期呈正相關(guān)；④與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也有著密切的關(guān)系。

相信隨著醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)和理論的進(jìn)展，不久的將來microRNA-21就可以作為鑒別乳腺良惡性腫瘤的新一個(gè)生物學(xué)指標(biāo)，并能用于乳腺腫瘤的早期診斷以及判斷乳腺癌的預(yù)后，也有望成為乳腺癌的一個(gè)新的治療靶點(diǎn)，在未來乳腺腫瘤的診斷和治療中將會(huì)有很廣泛的價(jià)值及應(yīng)用前景。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃秀芳，邵建永，顏黎栩，等.乳腺癌差異表達(dá)的MicroRNA的篩選研究.中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2009，30：69-73.

[2] 劉晶晶，郝曉甍，劉艷，等.乳腺癌microRNA表達(dá)譜的初步研究.天津醫(yī)藥，2009，37：913-916.

[3] 曹志剛，邵志敏.microRNA在乳腺癌診斷及預(yù)后判斷中的作用.中國(guó)癌癥雜志，2012年第22卷第7期.

[4] Electrochemical based detection of microRNA，mir21 in breast cancer cells.Kilic T，Topkaya SN，Ozkan Ariksoysal D，Ozsoz M，Ballar P，Erac Y，Gozen O.Biosens Bioelectron，2012 Oct，38（1）：195-201.PMID：22776181.

[5] Expression analysis of MiR-21，MiR-205，and MiR-342 in breast cancer in Iran.Savad S，Mehdipour P，Miryounesi M，Shirkoohi R，F(xiàn)ereidooni F，Mansouri F，Modarressi MH.Asian Pac J Cancer Prev，2012，13（3）：873-7.PMID：22631664.

[6] Breast cancer signatures for invasiveness and prognosis defined by deep sequencing of microRNA.Volinia S，Galasso M，Sana ME，Wise TF，Palatini J，Huebner K，Croce CM.Proc Natl Acad Sci U S A，2012 Feb 21，109（8）：3024-9.PMID：22315424.